【正文】 的反應(yīng)時間比較長，不利于快速測定，這在生產(chǎn)中是很不方便的 [18]。 另外，同一菌種分小批分別接種培養(yǎng)的方式最后得出的數(shù)值存在較大誤差，若同一菌接種到 250 mL的三角瓶中，在不同時間段取液保存測定可能更為直觀，因為株菌的生長環(huán)境變化不大，也沒有隔離。C 和 50 176。 貴 貴州大學(xué)本科畢業(yè)論文（設(shè)計） 第 17 頁 4 結(jié)果與 討 論 從茅臺酒廠提供的樣品中分離到近千株菌，經(jīng)過革蘭氏碘液染色，共得到能產(chǎn)生透明圈的菌株 244株， 其中，有 4株菌菌落半徑達(dá)到 cm， BL595透明圈與菌落半徑比值最大的達(dá)到 15，透明圈與菌落半徑比值超過 10的有 12株，透明圈與菌落半徑比值超過 5的有 103株。 表 葡萄糖 吸光度 (OD520nm) 管號 標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液中所含葡萄糖量（ μg） OD 值 1 100 2 200 3 300 4 400 5 500 6 600 圖 是 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的 DNS 顯色反應(yīng)圖片，與圖 可作為一個直觀的對比方式，通過對比不難發(fā)現(xiàn) CMC 酶活大體數(shù)值。C 、120 r /min 振蕩培養(yǎng) 下的菌懸液吸光度偏離真實值， 為減少累贅，在這里只列表，不繪制曲線。C 、 120 r /min 振蕩培養(yǎng) 下的菌懸液，沉淀量大、液體中分布有絮狀物、液面有菌苔生長、液體中顆粒物分布不均勻 、液體顏色呈清透亮、細(xì)菌生長情況很難判明。保存在 4176。C 3d BH634 50176。 其中 BL5581是在純化 BL558時被發(fā)現(xiàn)的，后來發(fā)現(xiàn)透明圈半徑比 : BL558更大，就一直以此命名。 菌株初篩 結(jié)果 初篩情況統(tǒng)計 通過對近千個菌株的初篩，用 羧甲基纖維素鈉鑒定培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，滴加革蘭氏碘液有透明圈的 244 株。迅速冷卻試管，并加蒸餾水定容至 mL。還原糖的測定：取刻度試管 26 只，個加入稀釋酶液 mL， CMC 緩沖液（檸檬酸緩沖液） mL。在 520 nm 處測 OD 值，測得 OD 值后查閱葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出酶解所得葡萄糖含量，換算成酶活力值。以葡萄糖質(zhì)量為橫坐標(biāo)， 吸光度 為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 用 721G可見分光光度計，在 660 nm波長處測定 吸光度 。C 、 50176。 7．革蘭氏碘液：碘 g、 碘化鉀 g、蒸餾水 mL，將碘與碘化鉀先行混合，加入蒸餾水少許充分振搖，待完全溶解后，再加蒸餾水至 mL。量取 0. 1 mol / L 檸檬溶液 89. 5 mL， 0. 1 mol/ L檸檬酸三鈉溶液110. 5 mL，混勻，即得 pH 4. 8 0. 1 mo l/ L的檸檬酸緩沖液。 7．纖維素分解細(xì)菌產(chǎn)酶發(fā)酵培養(yǎng)液：羧甲基纖維素鈉 、 MgSO43H2O g、 MgSO4 因為微生物試驗的主要對象是微生物，其中空格部分的理化性質(zhì)是無需檢測的指標(biāo)，理化性質(zhì)只是作為最后結(jié)果的一個比較參考 。 貴 貴州大學(xué)本科畢業(yè)論文（設(shè)計） 第 3 頁 2 材料與方法 供試樣地區(qū)域概況 樣品來源地 茅臺 鎮(zhèn)位于仁懷市 赤水河 畔，是茅臺酒、文臺酒的故鄉(xiāng)。最適產(chǎn)酶條件為：發(fā)酵時間 72~ 96 h，發(fā)酵溫度 25~ 30176。研究最多的是纖維單胞菌（ Cellulomonas） [89]和熱纖梭菌（ Clostridium thermocellum）。 酒糟生物質(zhì)主要由 纖維素和木質(zhì)素 構(gòu)成 ，同時含有一定的殘余糖分、淀粉、粗脂肪和蛋白質(zhì) [3]，因此 ， 可利用具有降解纖維素的菌種對其進(jìn)行分解，把其中部分纖維素轉(zhuǎn)化為有機(jī)質(zhì)等，從而提高酒糟的綜合利用效率 [4]。 本試驗 分別從 50176。畢業(yè) 論文（設(shè)計） 中凡引用他人已經(jīng)發(fā)表或未發(fā)表的成果、數(shù)據(jù)、觀點等，均已明確注明出處。通過不同溫度分離篩選條件下得到的菌株分別在其對應(yīng)溫度下的生長曲線 可以看出 ， 高溫 振蕩 培養(yǎng)的菌株會在試管表面長出菌苔，菌液澄清，試管底部有沉淀；中溫靜置培養(yǎng)條件下的菌株菌液整體渾濁，分布均勻。據(jù)估計，纖維素水解成葡萄糖所需的酶蛋白要比淀粉相應(yīng)水解所需的酶蛋白多 100 倍，這是影響纖維素酶實際應(yīng)用的重要原因之一 [5]。 貴 貴州大學(xué)本科畢業(yè)論文（設(shè)計） 第 2 頁 厭氧細(xì)菌將 3 種纖維素酶 以特定方式 聯(lián)合組裝成一個大復(fù)合體 — 纖維小體(cenulosome)[10]，具有多種功能的超分子結(jié)構(gòu)。 李日強等 [12]通過對發(fā)酵處理后的玉米秸稈和白酒糟的分析，玉米秸稈經(jīng)發(fā)酵處理后粗蛋白、真蛋白和主要氨基酸總量分別比發(fā)酵處理前高了 %， %和 %；白酒糟經(jīng)發(fā)酵處理后粗蛋白、真蛋白和主要氨基酸總量分別比發(fā)酵處理前高了 %， %和 %，而且都具有較高的半纖維素酶和纖維素酶活性，可對秸稈和白酒糟進(jìn)行持續(xù)降解，進(jìn)一步提高了消化率。茅臺鎮(zhèn)地處河谷，風(fēng)速小，冬暖、夏熱、少雨、少風(fēng)的特殊小氣候十分有利于釀造茅臺酒 微生物 的棲息和繁殖。C 培養(yǎng)條件下，從茅臺酒丟糟、 301 車間丟糟、酒曲、酒醅、茅臺有機(jī)高粱基地土壤、廢舊稻草樣品中分離細(xì)菌； 2．對分離得到的菌株分別于 30176。 4．斜面保存培養(yǎng)基：牛肉膏 g、蛋白胨 g、 NaCl g、蒸餾水 mL，調(diào) pH 。 6H2O g、蒸餾水 mL、調(diào) pH 。 4． CMCNa 溶液：稱取 g CMCNa（羧甲基纖維素鈉）溶于 mL醋酸緩沖液（ pH ），加熱使之溶解，保存于冰箱中，以待使用。C 恒溫培養(yǎng)箱中 倒置 培養(yǎng) 2 d，不同處理均作 3個重復(fù)。 最后保存菌落半徑與透明圈比值大于 2： 4的菌株于牛肉膏蛋白胨瓊脂斜面培養(yǎng)基上，其活性與透明圈半徑 /菌落半徑（ R/r）在冰箱中 4176。 另取試管 7 支，編號，用移液管準(zhǔn)確吸取上述試管個濃度的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液 mL，對好加入各試管，然后于各試管中加入 DNS 試劑 mL，搖勻，置于沸水中煮沸 5 min。C 通過靜置培養(yǎng) 、 50176。C 恒溫?fù)u床， 120 r /min下振蕩培養(yǎng)， 每天檢查記錄各菌株對濾紙的作用 情況 [17]。 在容積為 10 mL的試管管中，加入 1 mL 適當(dāng)稀釋的酶液于 50176。C 下，每 1 g 纖維素酶曲在 1 min 內(nèi)水解 CMC，生成 1 ug 葡萄糖的酶活性稱作纖維素酶活力單位 ， 記作 U。 50176。C 3d BH314 50176。C 3d BL5581 30176。C 低溫保存。最后通過 721G 可見分光光度計的測定證實以上推斷。C 振蕩 ， 轉(zhuǎn)速為 120 r/ min培養(yǎng) 6 d， 將培養(yǎng)液于 4176。渾濁度高的菌懸液，其細(xì)菌的生長繁殖速度快，繁殖能力較強。C條件的 6株，對其進(jìn)行各項指標(biāo)的測定，主要偏重于其纖維素酶活的測定。C 條件下篩選得到的菌株。 人們對纖維素酶活力測定方法進(jìn)行了大量的研究， 自 20 世紀(jì) 60 年代以來，提出了許多不同的測定方法。還有如梁如玉等對含纖維素底物進(jìn)行化學(xué)的或物理的預(yù)處理，可大大提高底物對酶的敏感性，減少底物的抗性，提高纖維素轉(zhuǎn)化率。 貴 貴州大學(xué)本科畢業(yè)論文（設(shè)計） 第 19 頁 參考文獻(xiàn) [1] 李新社 , 陸步詩．大曲酒糟代替米糠生產(chǎn)小曲的效果研究［ J］．釀酒 科技 , 20xx(7):65 －66． [2] 張禮星 , 王華．里氏木霉纖維素酶在大曲酒酒糟中的應(yīng)用 [J]．釀酒科技 , 20xx, （ 3）： 5253． [3] 江龍法 ．分解酒糟生物質(zhì)的纖維素酶生產(chǎn)菌的篩選研究［ J］．自然科學(xué)版 , 20xx, 15(4):51 － 54． [4] 熊世勤 , 彭謙 . 耐熱纖維素酶產(chǎn)生菌及產(chǎn)酶條件 [ J ]. 云南大學(xué)學(xué)報 (自然科學(xué)版 ) , 1998, 20 ( 2 ) : 91 94. 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