cd147在胃癌細胞sgc7901增殖(存儲版)
【正文】 〔 400〕 SGC7901 SGC7901/shRNAcontrol SGC7901/shRNA2 第三十九頁，共四十九頁。 第三十五頁，共四十九頁。 1 2 3 4 HG LG CD147 βactin Lane 1: SGC7901. Lane 2: SGC7901/shRNAcontrol Lane 3: SGC7901/shRNA1 Lane 4: SGC7901/shRNA2 HG代表高糖基化形式的 CD147， LG代表低糖基化形式的 CD147。 重組質(zhì)粒測序鑒定結果 DNA測序說明， 3個重組質(zhì)粒構建正確。AGCTTTTCCAAAAAAGTCGTCAGAACACATCAACTCTCTTGAAGTTGATGTGTTCTGACGACG339。 shRNA〔 short hairpin RNA〕表達載體的構建 neo 第二十三頁，共四十九頁。 本實驗旨在運用 RNA干擾技術抑制胃癌細胞株 SGC7901中 CD147基因的表達 ， 研究該基因沉默后對腫瘤細胞生長 、 侵襲能力及化療藥物敏感性的影響 ， 探討 CD147在胃癌中的作用 。 3. 促進腫瘤細胞多藥耐藥 在多種 多藥耐藥 的腫瘤細胞中都觀察到 CD147的高表達 。 免疫組化實驗證實 CD147在多種惡性腫瘤中高表達 ， 包括膀胱癌 、 皮膚癌 、 肺癌 、 乳腺癌 、 淋巴癌和胰腺癌等 。 第八頁，共四十九頁。 MMP的主要功能是 降解細胞外基質(zhì) 。 一、 研究背景 第三頁，共四十九頁。 第四頁，共四十九頁。 第六頁，共四十九頁。 細胞內(nèi)的 CD147存在低糖基化 〔 low glycosylated CD147， LG〕 和高糖基化 〔high glycosylated CD147， HG〕 形式 ， 分子量分別是 32~44kDa、 45~65kDa。 CD147在腫瘤發(fā)生開展中的作用 1. 促進腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移 CD147就是通過刺激成纖維細胞及腫瘤細胞本身產(chǎn)生多種 MMP來降解基底膜和細胞外基質(zhì) ， 從而促進腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移的 。 第十五頁，共四十九頁。 CD147shRNA真核表達載體的構建與鑒定 ↓ 轉(zhuǎn)染 SGC7901細胞，篩選穩(wěn)定表達干擾載體的 SGC7901細胞株 ↓ MTT法檢測 SGC7901細胞增殖水平的變化 ↓ 明膠酶譜法檢測 SGC7901細胞 MMP MMP9分泌的變化 ↓ SGC7901細胞體外侵襲力測定 ↓ MTT檢測 SGC7901細胞順鉑敏感性的變化 技術路線 技 術 路 線 第二十一頁，共四十九頁。另外 ， 設計一個陰性對照 shRNAcontrol。AGCTTTTCCAAAAAATGACAAAGGCAAGAACGTCTCTCTTGAAGACGTTCTTGCCTTTGTCACG3’ shRNAcontrol 5‘GATCCACTACCGTTGTTATAGGTGTTCAAGAGACACCTATAACAACGGTAGTTTTTTTGGAAA339。將抗 G418的陽性細胞克隆用有限稀釋法別離出來并逐步擴增以待進一步分析。 接種細胞 培養(yǎng)細胞 加入 MTT呈色 終止培養(yǎng) 比色 結果計算 抑制率 (%)=(對照組 A 值 實驗組 A 值 )／對照組 A 值 100% 24h
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