高效液相色譜-hplc(存儲版)
【正文】 防止微粒阻塞進樣閥 減少對進樣閥的磨損 ? 進樣結(jié)束沖洗進樣器 ： 用不含鹽的稀釋劑、水或不含鹽的流動相沖洗， 在進樣閥的 Load和 Inject位置反復沖洗 再用無纖維紙擦凈注射器針頭的外側(cè) ? 使用流動相盡量要清潔 ? 進液處的砂芯過濾頭要經(jīng)常清洗 ? 流動相交換時要防止沉淀 ? 避免泵內(nèi)堵塞或有氣泡 ? 每次分析結(jié)束后，要反復沖洗進樣口，防止樣品的交叉污染 2. 泵的保養(yǎng) ? 在任何情況下不能碰撞、彎曲或強烈震動色譜柱 ? 當色譜柱和色譜儀聯(lián)結(jié)時，閥件或管路一定要清洗干凈 ? 要注意流動相的脫氣 ? 避免使用高粘度的溶劑作為流動相 ? 進樣樣品要提純；嚴格控制進樣量 2. 色譜柱的保養(yǎng) ? 每天分析工作結(jié)束后，要清洗進樣閥中殘留的樣品 ? 每天分析測定結(jié)束后，都要用適當?shù)娜軇﹣砬逑粗? ? 若分析柱長期不使用，應用適當有機溶劑保存并封閉 ? 在分析前應先平衡色譜柱，差不多后，再開檢測器； ? 在分析完成后馬上關(guān)閉檢測器 3. 紫外燈的保養(yǎng) ?“分析型液相色譜” 目的 :得到數(shù)據(jù) 定性及定量分析 – 靈敏度的要求 – 樣品的復雜性 – 樣品量的要求 – 精度及準確度的要求 – 容易使用 HPLC的應用 ?“制備型液相色譜” 目的 :得到純品 分離及純化 – 化合物的穩(wěn)定性 – 樣品的復雜性 – 制備量的要求 – 純度的要求，及純度的鑒定 – 方法的安全性 ? 色譜圖 (Chromatogram) : 色譜柱流出物通過檢測器時所產(chǎn)生的響應信號對時間的曲線圖 ,其縱坐標為信號強度 ,橫坐標為時間 HPLC色譜圖名詞術(shù)語 色譜峰 (Peak):):色譜柱流出組分通過檢測器時產(chǎn)生的響應信號 峰底 (Peak Base):):峰的起點與終點之間連接的直線 峰高 (Peak Height):):峰最大值到峰底的距離 峰面積 (Peak Area):):峰與峰底之間的面積 ,又稱響應值 色譜圖名詞術(shù)語 : 基線 (Baseline):在 正常操作條件下 ,僅由流動相所產(chǎn)生 的響應 信號 基線 飄移 (Baseline Drift):基線 隨時間定向的緩慢變化 基線噪聲 (N)N)(Baseline Noise):由 各種因素所引起的 基線 波動 譜 帶擴展 (Band Broadening):由于 縱向擴散 ,傳質(zhì)阻力 等因素的影響 ,使組分在色譜柱內(nèi) 移動過程 中譜帶寬度增加的現(xiàn)象 色譜圖名詞術(shù)語 : 保留時間 (tR)(Retention time):組分 從進樣到出現(xiàn)峰最大值 所需 的時間 死時間 (t0)(Dead time):不 被固定相滯留的組分 ,從進 樣到出現(xiàn)峰最大值所需的時間 保留體積 (VR)(Retention volume):組分 從進樣到出現(xiàn)峰最大值 所需的流動相體積 死體積 (V0)(Dead volume):不 被固定相滯留的組分 ,從進樣 到出現(xiàn) 峰最大值所需的流動相體積 色譜圖名詞術(shù)語 : ? 等度 在整個運行過程中溶劑組成保持不變 如 (60:40 甲醇 /水 ) HPLC 實驗的基本類型 等度 ? 梯度 在運行過程中溶劑組成變化 漸變或臺階式變化 如 100% H20/ 0% MeOH 到 0% H2O/100% MeOH HPLC 實驗的基本類型 梯度 ? 這些是導出理論和定義所必需的基本測量 洗脫體積和峰寬 ? 簡單說來 ,分離度即是兩峰相對于其峰寬分開得有多遠 分離度 (R)的定義式 ? 計算分離度的實例 : 分離程度的量度 ? k′ 是樣品與填料作用強度的直接量度 保留因子 (k′ ):保留能力的量度 ? α是兩個化合物在同一套色譜系統(tǒng)上保留差異的數(shù)值表述 分離因子 (α):峰分離程度的量度 ? 理論塔板數(shù)或柱效是一個數(shù)值 ,它表示作為保留時間函數(shù)的峰展寬的量度 ? 用于評價色譜柱的性能 (中國 2022版藥典 ) 理論塔板數(shù) (N):分離效率的量度 色譜峰對稱性的測量方法 中國藥典要求對儀器進行適用性
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