【正文】 6種。NMR定量方法：要求： ； ； ； ； ，取平均值。蛋白質(zhì)分子量測定： 多肽與蛋白質(zhì)的ESIMS分析采用正離子方式進行，ESIMS可以產(chǎn)生多電荷離子峰使檢測的分子質(zhì)量范圍擴大。激發(fā)態(tài)分子與溶劑分子及其它溶質(zhì)分子之間相互碰撞而失去能量（常以熱能的形式放出），這種不同物質(zhì)間的能量轉(zhuǎn)移引起熒光淬滅（熄滅）。熒光效率——激發(fā)態(tài)分子發(fā)射熒光的光子數(shù)與基態(tài)分子吸收激發(fā)光的光子數(shù)之比。準(zhǔn)確度、靈敏度高，選擇性好，抗干擾性強，適用范圍廣，但工作曲線范圍窄，通常每測定一種元素要使用一種元素?zé)?，使用不便，且對難溶元素和多種元素的測定尚存在困難。定量分析方法：校正曲線法；標(biāo)準(zhǔn)加入法；內(nèi)標(biāo)法（十）色譜法導(dǎo)論色譜法是一種重要的分離分析方法，它是根據(jù)組分與固定相和流動相的作用力不同而達到分離目的。調(diào)整保留時間(t’R )——某組份的保留時間扣除死時間后的時間，它是組份在固定相中的滯留時間。半峰寬W1/2——峰高一半處的峰寬。塔板理論研究的是平衡態(tài)，速率理論則從動態(tài)角度出發(fā)，提出改變色譜條件、控制流速、提高分離效率的理論。極性極性靜電力按極性順序出柱，非極性組分先出柱。增大n：峰寬變窄。（需要校正）定量分析方法： 外標(biāo)法——校正曲線法和外標(biāo)一點法 內(nèi)標(biāo)法——校正曲線法和內(nèi)標(biāo)一點法氣相色譜與液相色譜的比較流動相GC用氣體做流動相（載氣），常用載氣（氮氣、氦氣和氫氣）種類少，可選擇范圍小，對分離影響??；LC中，流動相種類多，對分離結(jié)果貢獻大。HPLC：可用于分離和分析；柱內(nèi)徑2~6mm，固定相粒徑10μm且均勻；高壓輸送流動相，分析速度快；柱效高；采用高靈敏度檢測器，分析時間大大縮短；可以在線檢測。但流動相的pH應(yīng)在其相應(yīng)使用范圍內(nèi)，如2~8，否則硅膠會被溶解；按極性可分為非極性、弱極性和極性三類。反相鍵合相色譜法以非極性鍵合相為固定相，如十八烷基硅烷（C18）、辛烷基（C8）等，有時也用弱極性或中等極性的鍵合相為固定相，流動相則以水為基礎(chǔ)溶劑，再加入一些與水混溶的有機溶劑，如甲醇、乙腈等，以調(diào)整流動相的極性比例，即固定相極性小于流動相極性的色譜法。HPLC流動相：不與固定相發(fā)生化學(xué)反應(yīng)；對樣品有適宜的溶解度；必須與檢測器相適應(yīng)；純度要高，粘度要小。HPLC的三大關(guān)鍵部件：輸液泵、色譜柱、檢測器。梯度洗脫有兩種裝置：高壓梯度和低壓梯度?？煞譃樾Ｕ€法、外標(biāo)一點法及外標(biāo)兩點法等。比移值——溶質(zhì)移動距離與流動相移動距離之比，與組分及色譜條件有關(guān)。硅氧交聯(lián)多孔結(jié)構(gòu)表面有硅醇基（吸附活性中心），與極性物質(zhì)或不飽和化合物形成氫鍵，物質(zhì)極性↑，吸附能力↑。 分子中雙鍵數(shù)越多，則吸附力越強。電泳過程應(yīng)在適當(dāng)?shù)木彌_液中進行的，緩沖液可保持待分離物的帶電性質(zhì)的穩(wěn)定。粒子（帶正電、帶負電、電中性）在毛細管溶液中的運動結(jié)果是電泳速度和電滲流速的矢量和。，其內(nèi)充液為一定pH值的緩沖溶液。掃描時對選定的離子進行檢測，其它離子不被記錄，能提高靈敏度，改善峰形和準(zhǔn)確度，主要用于定量分析。（1）條件：；；。 怎樣提高色譜柱的理論塔板數(shù)n，從而提高色譜柱的效率？答：根據(jù)塔板理論n=L/H，通過減少理論塔板高度和增大有效柱長可以提高色譜柱理論塔板數(shù)。如何獲得色譜最佳流速？答：根據(jù)速率理論可知，H=A+B/u+Cu，故存在一個最佳流速u=BC。為什么毛細管電泳法有很高的理論塔板數(shù)？答：由n=μaV2DE可知，對于一定化合物，其μa、DE一定，在一定范圍內(nèi)提高電泳電壓V，可以有效提高CE的理論塔板數(shù)。固定相粒度大小對速率理論中的哪些因素有影響？答：固定相粒度大小對于速率理論的渦流擴散項A和傳質(zhì)阻抗項C都有影響，粒度越小，A、C越小。只要在柱內(nèi)有合適的固定相與流動相中的被分離物結(jié)合，并能保證k值合適，就能選用空心柱進行色譜分離。(b) 兩個組分的K或k值差別越大，則相應(yīng)的兩色譜峰相距就越遠。S——靈敏度或響應(yīng)值，1ml載氣攜帶1mg某組分通過檢測器所產(chǎn)生的電壓，或者每秒鐘1g組分被載氣攜帶通過檢測器所產(chǎn)生的電壓。色譜質(zhì)譜三維譜全離子（Total Ion）色譜圖或總離子流色譜圖——總離子強度隨時間變化的曲線。電滲流的改變，最主要通過改變緩沖溶液的pH值來達到：pH↓，veop↓；pH↑，veop↑焦?fàn)枱崾请娏魍ㄟ^緩沖溶液時溶液產(chǎn)生的自熱，不利于電泳的快速高效。電滲淌度：μeof=εξη，ε：介電常數(shù)，ξ：雙電層電勢，η：介質(zhì)粘滯系數(shù)電滲——在外電場作用下，毛細管內(nèi)溶液整體朝一個方向運動的現(xiàn)象。電泳技術(shù)利用待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)以及分子本身大小、形狀等性質(zhì)的差異，在電場的作用下，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而對樣品進行分離、鑒定或提純。 非極性化合物，吸附弱。組分在薄層板上反復(fù)吸附、解吸附，經(jīng)過一定時間（距離）層析而實現(xiàn)分離。操作步驟：鋪板→活化→點樣→展開→定位(定性)/洗脫(定量)紙色譜法——以紙纖維為載體，吸著其上的水為固定相，與水不相混溶的有機溶劑為流動相，物質(zhì)在流動相的移動過程中被分離的色譜方法。色譜的定量分析需要色譜系統(tǒng)符合一定要求，即要進行色譜系統(tǒng)適用性實驗，包括理論塔板數(shù)、分離度、峰對稱因子、重復(fù)性等參數(shù)，其中分離度和重復(fù)性最具實用意義。根據(jù)具體情況，可將等度洗脫和梯度洗脫結(jié)合起來。在實驗中常用粘度比較低的甲醇或乙腈，而少用粘度比較大的乙醇。以長鏈烷基組成的鍵合相適合分離非極性化合物，短鏈烷基鍵合相則能用于分離部分極性化合物，苯基鍵合相適用于分離芳香化合物以及多羥基化合物等。正相鍵合相色譜法以極性鍵合相為固定相，如氰基（CN）、氨基（NH2）等，并以非極性或弱極性溶劑為流動相，如各種烷烴等，即固定相極性大于流動相極性?；瘜W(xué)鍵合相——采用化學(xué)反應(yīng)的方法，將官能團鍵合在載體表面所形成的固定相。具有分離效率高、選擇性好、分析速度快、檢測靈敏度高、操作自動化和應(yīng)用范圍廣的特點。 定量分析的依據(jù)：在恒定的實驗條件下，峰面積（或峰高）與組分的（含）量成正比。減小C：固定相的液膜厚度要??；組分在液相中的擴散系數(shù)要大。中等極性中等極性誘導(dǎo)力和色散力按沸點順序，沸點低者先出柱。 當(dāng)塔板數(shù)n較少時，組分流出曲線呈峰形，但不對稱；當(dāng)塔板數(shù)n50時，峰形接近正態(tài)分布。兩組分在兩相間的分配系數(shù)不同，是色譜分離的先決條件。包括組份隨流動相通過柱子的時間t0和組份在固定相中滯留的時間。UVVis分光光度計：連續(xù)光源—單色器—吸收池—檢測器AAS分光光度計：銳線光源—原子化器—單色器—檢測器原子化過程——被測元素由試樣轉(zhuǎn)入氣相，并轉(zhuǎn)化為基態(tài)原子的過程。（九）原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法——根據(jù)蒸氣相中被測元素的基態(tài)原子對特征輻射的吸收來測定試樣中該元素含量的方法。說明在激發(fā)和（熒光）發(fā)射之間存在一定的能量損失。躍遷的能量轉(zhuǎn)移方式：振動弛豫，內(nèi)部能量轉(zhuǎn)移（內(nèi)轉(zhuǎn)換），熒光發(fā)射，外部能量轉(zhuǎn)移（外轉(zhuǎn)換），體系間跨越，磷光發(fā)射。被積信號過于接近而無法準(zhǔn)確測定各質(zhì)子峰積分面積時，可考慮用峰高法進行定量分析，通過實驗求出峰高與含量之間的關(guān)系，校正誤差。優(yōu)點：定性測定不具有破壞性，定量測定不需標(biāo)樣，靈敏度、精確度、準(zhǔn)確度及分析速度高。分為面內(nèi)變形振動和面外變形振動。（五）紅外吸收光譜法紅外光譜——又稱為分子振動轉(zhuǎn)動光譜，當(dāng)樣品受到頻率連續(xù)變化的紅外光照射時，分子吸收某些頻率的輻射，并由其振動運動或轉(zhuǎn)動運動引起偶極矩的凈變化，產(chǎn)生的分子振動和轉(zhuǎn)動能級從基態(tài)到激發(fā)態(tài)的躍遷，從而形成的分子吸收光譜。連續(xù)光譜——在一定范圍內(nèi)各種波長的光都有，且連續(xù)不斷，無明顯的譜線和譜帶。174。分為原子光譜法和分子光譜法。標(biāo)準(zhǔn)電極電位