分光光度計基本原理與結(jié)構(gòu)(存儲版)
【正文】 可以說，當(dāng)一束單色入射光經(jīng)過有色溶液且入射光、消光系數(shù)和溶液厚度不變時，吸光度 A是隨著溶液濃度而變化的。 ? 在標(biāo)準(zhǔn)溶液中： As=KsCsLs ? 在待測溶液中： Ax=KxCxLx ? 如果測定時選用相同厚度的比色皿使 L相等，并使用同一波長的單色光，保持溫度相同，則 K也相等。在同樣的條件下，用儀器測出 A后，查標(biāo)準(zhǔn)曲線即可得被測溶液的濃度值 Cx。這三種運動能量都是量子化的，并對應(yīng)有一定的能級。 ? 二、分光光度計的基本結(jié)構(gòu) ? 與光電比色計相比，在結(jié)構(gòu)上分光光度計用單色器代替了濾光片，其它部分兩者比較相似。即使使用同一種光學(xué)材料，以相同的人射角照射，若波長不同，得到的折射角也不一樣。溝紋排列異常密集，每英寸長度上有 15000或 30000條。 26 ? 光柵的分辨能力取決于它的 mN值， N是光柵上總溝紋數(shù)或總條數(shù)。此法可以將光柵上的臟物去掉。點光源發(fā)出的光，經(jīng)聚光鏡后，變成平行光，然后再進(jìn)入棱鏡（或光柵）色散系統(tǒng)。結(jié)構(gòu)如圖 4－ 6所示。差別在于雙光束分光光度計的單色器的出射狹縫和樣品室之間加了一個光束分裂器或斬波器，它的作用是以一定頻率把一個光束交替分成兩路。日本島津公司的 UV－ 260，日立公司的U－ 1000/2022， Unicam公司的 Pu8600型，Varian公司的 DMS系列， Perkin－ elmer公司的 1 17型等。經(jīng)過光電倍增管和電子控制系統(tǒng)，在記錄器上顯示出兩束光（ λ1和λ2）的吸光度差 ⊿ A，即 ⊿ A=Aλ1－ Aλ。選擇 A組分顯示相等吸光度的兩個波長 λ1和 λ2，則不管 A組分濃度如何變化 44 ? ⊿ A= Aλ1－ Aλ2=0 ? 因此測定混合物 C在 λ1和 λ2的吸光度差值，實際上就是 B組分在 λ1和 λ2的吸光度差。對于生物材料、醫(yī)藥、食品等試樣的分析具有特殊重要意義。 ? 下面以吸收點法測定二組分混合物中單個組分的含量為例，說明雙波長分光測定的特點。以后 AmincoBowman公司、日立公司和島津公司等先后研制設(shè)計了各種類型的雙波長分光光度計，如 156型、 365型、 556型和 557型； UV300型、 UV3000型等。 37 ? 雙光束分光光度計種類很多，大致可分為中低檔和高檔兩類。其結(jié)構(gòu)示意圖如圖 47所示。在參比（溶劑）進(jìn)入光路時，調(diào)零。常常不鍍此 SiO2保護(hù)膜，這種準(zhǔn)直鏡的維護(hù)方法與光柵相同。光柵萬一臟了，可以用洗耳球吹去表面上的灰塵。 ? 射線波長 λ與反射角 θ的關(guān)系，如下式： ? m λ= 2dsinθ ? 式中， d 是溝紋之間的距離， θ是光柵常數(shù)；m是干涉價數(shù)。 ? 2．光柵單色器 ? 衍射光柵也可用作單色器。 ? 1．棱鏡單色器 ? 從幾何光學(xué)我們知道，當(dāng)一束光從一種介質(zhì)射到另一種介質(zhì)時，在界面會發(fā)生折射和反射，如圖 43所示。 ? 分子吸收光譜與物質(zhì)本身的結(jié)構(gòu)有關(guān)，吸光度的大小與物質(zhì)的含量有關(guān)，我們利用吸收光譜的形狀和吸收程度的大小即可對物質(zhì)進(jìn)行定性和定量的分析。 18 ? 一、分光光度計基本原理和結(jié)構(gòu) ? 分子，包括雙原子分子的光譜，要比原子光譜復(fù)雜得多。 ? （ 3）做 A～ C標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，如圖 4－ 3所示。 13 ? 2．計算法 ? 根據(jù)被測溶液濃度的大致范圍，先配制一已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。若溶液的濃度以摩爾／升表示，溶液厚度以厘米表示，則此時的 K值稱為摩爾消光系數(shù)。它是由朗伯定律和比爾定律相結(jié)合而成的，所以叫朗伯 比爾定律。光的顯色原理 ? 若把某兩種顏色的光，按一定的強(qiáng)度比例混合，能夠得到白色光，則這兩
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