【正文】 25g樣品于滅菌帶螺旋帽的廣口瓶中(500ml)或其它合適的容器內(nèi)，加 入225ml滅菌的營(yíng)養(yǎng)肉湯，充分混勻形成懸液，蓋緊瓶塞，室溫下靜置60min。把瓶蓋松開約1/4圈置于35℃培養(yǎng)24177。檢測(cè)多香果粉、肉桂和薄荷時(shí)，樣品與肉湯的比例為1:100，而丁香與肉湯的比例為1:1000；檢驗(yàn)葉狀調(diào)味品時(shí)，由于是脫水產(chǎn)品，可吸收部分肉湯，在實(shí)際檢測(cè)中樣品與肉湯的比例大于1:10，檢測(cè)這些調(diào)味品時(shí)，按以上C10a進(jìn)行，保持推薦的樣品與肉湯的比例。5min。以下試驗(yàn)按D,111進(jìn)行。1明膠無菌操作稱取25g樣品，放入滅菌的帶螺旋帽的500mL廣口瓶中或其他合適的容器內(nèi)。1肉、肉代用品、肉副產(chǎn)品、動(dòng)物產(chǎn)品、腺體制品和粗粉（魚，肉，骨）無菌操作稱取25g樣品放入滅菌的攪拌器中。（15分鐘）的Tergitol7，混勻。如果單個(gè)腿估計(jì)平均重在25g或以上，則只需檢查15對(duì)的每對(duì)中的一條腿。接下去按下面的D，111進(jìn)行。1口香糖無菌操作稱取25g樣品到滅菌燒杯（250mL）或其他合適容器中。以下按D，111進(jìn)行。旋動(dòng)使充分混勻，用試紙測(cè)定pH值。D、沙門氏菌的分離培養(yǎng) 擰緊瓶蓋并輕輕振蕩培養(yǎng)過的樣品混合物。2小時(shí)。2小時(shí)。 檢查平板中可疑沙門氏菌菌落的存在。c、 亞硫酸鉍（BS）瓊脂上。培養(yǎng)了48177。b. ，其周圍培養(yǎng)基稍微或不呈暗色。不需灼燒接種針，即可接種LIA斜面，先穿刺接種底層兩次，再劃線斜面上。只有試管底層呈明顯黃色時(shí)才認(rèn)為有酸性（陰性）反應(yīng)。1 生化和血清學(xué)鑒定試驗(yàn)：a. 從RV培養(yǎng)基（或口香糖中亞硒酸鹽胱氨酸肉湯）劃線分離的選擇性瓊脂平板上所挑取的3個(gè)擬定陽性TSI瓊脂培養(yǎng)物和從四硫磺酸鹽肉湯劃線分離的選擇性平板所挑取的3個(gè)擬定陽性TSI瓊脂培養(yǎng)物，進(jìn)行生化和血清學(xué)鑒定試驗(yàn)。b. 在HE瓊脂上：見上述四，7ac. 在木糖賴氨酸去氧膽酸鹽（XLD）瓊脂上：見上述四，7b. 按上面的四，7節(jié)所述轉(zhuǎn)種至少2個(gè)可疑沙門氏菌菌落到TSI瓊脂和LIA瓊脂斜面上，接下去按上述的四，9節(jié)進(jìn)行鑒定. 純培養(yǎng)物：a、 尿素酶試驗(yàn)（常規(guī)）。 血清學(xué)多價(jià)鞭毛（H）試驗(yàn)：a、 此時(shí)或以后進(jìn)行多價(jià)鞭毛（H）試驗(yàn)，可按下面五，4節(jié)所述進(jìn)行。陽性反應(yīng)：在甲醛肉湯培養(yǎng)物與血清混合物中凝集，而在甲醛肉湯培養(yǎng)物與甲醛鹽水管中（對(duì)照管）不凝集。如果培養(yǎng)物呈現(xiàn)可疑的LIA反應(yīng)，則以賴氨酸脫羧酶肉湯進(jìn)行賴氨酸脫羧酶的最終鑒定。由TSI瓊脂上取少量培養(yǎng)物接種至肉湯管中。c、 胰蛋白胨（或色氨酸）肉湯。有生長(zhǎng)者（有渾濁）為陽性。3) 吲哚試驗(yàn)。（用已知沙門氏菌培養(yǎng)物同所有抗血清做予試驗(yàn)）。將混合液前后傾斜移動(dòng)1min，并在良好照明下對(duì)著黑暗背景觀察，任何程度的凝集都視為陽性反應(yīng)。沙門氏菌鞭毛（H）試驗(yàn)陽性表明有沙門氏菌抗原，但不具有沙門氏菌生化特性者，應(yīng)對(duì)培養(yǎng)物作純分離（按上述五、1），按上述五、2開始重新做試驗(yàn)。大多數(shù)沙門氏菌為陰性結(jié)果。1) 在室溫下按下述進(jìn)行VogesProskauer氏(VP)試驗(yàn)：移取1mL48h培養(yǎng)物于試管中，并將剩余的MRVP肉湯于35℃再培養(yǎng)48h。對(duì)KCN陽性，VP試驗(yàn)陽性及甲基紅試驗(yàn)為陰性培養(yǎng)物，皆可作為非沙門氏菌棄去。凡培養(yǎng)物具有表2所列任何一小項(xiàng)結(jié)果，為非沙門氏菌則棄去。組裝試劑盒，配制試劑盒所需試劑。置于35℃培養(yǎng)24h。培養(yǎng)物要放在腦心浸液瓊脂斜面的試管(13X100mm或16X125mm)內(nèi)遞送。沙門氏菌沙門氏菌（Salmonella）　　沙門氏菌病的病原體。人畜感染后可呈無癥狀帶菌狀態(tài)，也可表現(xiàn)為有臨床癥狀的致死疾，它可能加重病態(tài)或死亡率，或者降低動(dòng)物的繁殖生產(chǎn)力。鼠傷寒桿菌有12四個(gè)；豬霍亂桿菌有7二個(gè)?！　∩抽T氏桿菌的h抗原有兩種，稱為第1相和第2相。新從患者標(biāo)本中分離出的傷寒桿菌、丙型副傷寒桿菌等有此抗原?！　抽T氏菌只感染人類，損害肝、脾和骨髓，每年導(dǎo)致1600萬人生病，60萬人死掉，由于越來越多菌株具有抗藥性，情況可能變得更糟。　　疫情：美國(guó)人生吃西紅柿“中毒”　　西紅柿中含有沙門氏菌生吃西紅柿等新鮮的時(shí)蔬水果是再平常不過的事了，然而，在美國(guó)中西部和南部30個(gè)州，近日卻有數(shù)百人因生食了從超市或是餐館購(gòu)買的新鮮西紅柿而出現(xiàn)發(fā)燒、腹瀉、腹痛等癥狀，這些西紅柿進(jìn)口自墨西哥。不光是食用西紅柿，其他瓜果蔬菜也一樣。第一，通常，沙門氏菌的含量水平在污染食品中比有感染病人的病料中要低很多；第二，食品本身的性質(zhì)會(huì)干擾病原的檢測(cè)，例如，某些食品中固有菌群可能處在一個(gè)很高的水平，從而影響特定細(xì)菌的選擇性分離和鑒定；第三，與臨床病料不同的是，經(jīng)過加工的食品，由于加熱、干燥、高含鹽量、酸和冷凍等因素的作用，其中的沙門氏菌受到了尚不致命的損傷或稱“致傷”。第一步(預(yù)增菌)，將樣品加到一種高營(yíng)養(yǎng)、無選擇性的培養(yǎng)基中，溫度37℃，使那些“致傷”的細(xì)菌復(fù)蘇及使所有微生物生長(zhǎng)。細(xì)菌菌體或鞭毛抗原的特異性抗體的存在，使得人們可以建立一些快速方法來檢測(cè)以食品為載體的病原。ELISA法檢出沙門氏菌的極限范圍在105～106個(gè)細(xì)胞/ml，因此，要得出可靠的結(jié)果，食物樣品首先必需進(jìn)行預(yù)增菌、選擇性增菌，通常還要在含有D甘露糖的肉湯(M肉湯)中進(jìn)行后增菌，以促進(jìn)鞭毛發(fā)育。最新式的沙門氏菌免疫學(xué)檢測(cè)法，利用經(jīng)特異性抗體敏化的免疫色譜卡片為基礎(chǔ)。平板上菌落厚、有光澤、圓形凸起，直徑12mm。因而，食品受其污染的機(jī)會(huì)很多。C內(nèi)，溫度越高，產(chǎn)毒時(shí)間越短；　　存放地點(diǎn)，通風(fēng)不良氧分壓低易形成腸毒素；　　食物種類，含蛋白質(zhì)豐富，水分多，同時(shí)含一定量淀粉的食物，腸毒素易生成。1．金黃色葡萄球菌的檢驗(yàn)　　樣品處理：無菌取25g或25mL食品樣品，放入225mL滅菌生理鹽水中均質(zhì)，制成101稀釋液。　　血漿凝固酶試驗(yàn)：，置36177。2．金黃色葡萄球菌腸毒素檢測(cè)　　金黃色葡萄球菌腸毒素的檢測(cè)主要有動(dòng)物試驗(yàn)、血清學(xué)試驗(yàn)、免疫熒光試驗(yàn)及酶聯(lián)免疫吸附等方法，在此就不一一贅述。葡萄球菌(streptococcus)鏈球菌(肉湯培養(yǎng)物,革藍(lán)氏染色)。C培養(yǎng)24小時(shí)，在刺種線周圍出現(xiàn)淡粉色者為陽性。在BairdParker平板上菌落為圓形，直徑23mm，顏色灰或黑色，周圍有一渾濁帶。它引起的食物中毒癥狀是嘔吐和腹瀉。一般說，金黃色葡萄球菌可通過以下途徑污染食品：　　食品加工人員、炊事員或銷售人員帶菌，造成食品污染；食品在加工前本身帶菌，或在加工過程中受到了污染，產(chǎn)生了腸毒素，引起食物中毒；熟食制品包裝不嚴(yán)，運(yùn)輸過程受到污染；奶牛患化膿性乳腺炎或禽畜局部化膿時(shí)，對(duì)肉體其他部位的污染。金黃色葡萄球菌具有較強(qiáng)的抵抗力，對(duì)磺胺類藥物敏感性低，但對(duì)青霉素、紅霉素等高度敏感。金黃色葡萄球菌營(yíng)養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好，需氧或兼性厭氧，最適生長(zhǎng)溫度37176。ELISA方法本身，則僅需要大約2h而已(其中30min是操作時(shí)間，90min是孵育時(shí)間)。該法采用預(yù)先包被了沙門氏菌(AE群)單克隆抗體的微量板，加入經(jīng)增菌處理的樣品，反應(yīng)后再加入一定的指示劑，作用畢后用酶標(biāo)儀測(cè)定OD值來判定結(jié)果。傳統(tǒng)沙門氏菌檢測(cè)法全過程需時(shí)至少4～7天，才能得出明確的診斷結(jié)果。隨著DNA和抗體技術(shù)的發(fā)展，近10～15年間發(fā)展了無數(shù)改進(jìn)的方法，其中許多可以在48h內(nèi)檢出沙門氏菌，這些方法通稱為快速檢測(cè)。此后的60年間，用于從食品中分離沙門氏菌的方法實(shí)質(zhì)上與那些用于臨床病料的方法是相同的。但是，以前各州爆發(fā)的疫情幾乎都與人們吃了染上沙門氏菌的肉類、蛋類、乳類有關(guān)，但迄今為止，很少聽說吃蔬果大面積受沙門氏菌污染甚至在人群中引發(fā)大疫情的。由于傷寒的癥與瘧疾和登革熱等病相似，很容易搞混。傷寒沙門氏菌Salmonella Typhi和鼠傷寒沙門氏菌Salmonella Typhimurium這兩個(gè)名字，看起來也夠像的。由聚n乙酰d半乳糖胺糖醛酸組成。具有鞭毛的細(xì)菌經(jīng)甲醇液固定后，其o抗原全部被h抗原遮蓋，而不能與相應(yīng)抗o抗體反應(yīng)。決定o型原特異性的是脂多糖中的多糖側(cè)鏈部分，以3等阿拉伯?dāng)?shù)字表示。沙門氏菌基本介紹　　沙門氏菌病是公共衛(wèi)生學(xué)上具有重要意義的人畜共患病之一，其病原沙門氏菌屬腸道細(xì)菌科，包括那些引起食物中毒，導(dǎo)致胃腸炎、傷寒和副傷寒的細(xì)菌。依據(jù)聯(lián)邦登記以最快的方式進(jìn)行運(yùn)輸。c. 凡不符合a或b的培養(yǎng)物，應(yīng)按上述五,27項(xiàng)中有關(guān)規(guī)定作進(jìn)一步試驗(yàn)，或按Ewing(2)氏的有關(guān)項(xiàng)目進(jìn)一步試驗(yàn)，或送至標(biāo)準(zhǔn)定型實(shí)驗(yàn)室，做最后的血清定型與鑒定。按本節(jié)鑒定所述，檢驗(yàn)人員根據(jù)自己試驗(yàn)室選擇商品試劑盒與生化管系統(tǒng)相適應(yīng)的一種商品試劑盒。陰性反應(yīng)：不生長(zhǎng)或微弱生長(zhǎng)，而且不變色。絕大多數(shù)沙門氏菌培養(yǎng)物呈陽性結(jié)果，即培養(yǎng)基呈彌散性紅色。c. ，挑取少許，接種到此肉湯管中，置于35℃培養(yǎng)48177。陽性反應(yīng)：產(chǎn)酸（黃色）和在倒立發(fā)酵管內(nèi)產(chǎn)氣。補(bǔ)充生化試驗(yàn). 按表1中111項(xiàng)試驗(yàn)，對(duì)培養(yǎng)物呈典型沙門氏菌反應(yīng)者，進(jìn)行沙門氏菌分類。再以干凈滅菌的接種環(huán)或針將一個(gè)區(qū)域內(nèi)的菌懸液和生理鹽水混合。5) 吲哚試驗(yàn)陽性和血清學(xué)鞭毛（H）試驗(yàn)陰性；或者KCN試驗(yàn)陽性和賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)陰性的非沙門氏菌任一培養(yǎng)物予以去除。2小時(shí)，但在培養(yǎng)24h后觀察反應(yīng)。35℃培養(yǎng)48177。陰性反應(yīng)為倒管內(nèi)無氣體產(chǎn)生。如果培養(yǎng)基出現(xiàn)褪色現(xiàn)象（即不呈紫色也不呈黃色），%溴甲酚紫溶液，然后再觀察試管的反應(yīng)。 尿素酶陰性培養(yǎng)物試驗(yàn). a、 賴氨酸脫羧酶肉湯。在1075mm或13100mm血清學(xué)試管內(nèi)，（H）抗血清?！嫠≈信囵B(yǎng)2小時(shí)。a. 在麥康凱（MC）瓊脂上：典型菌落呈透明、無色，有時(shí)帶有暗色中心。對(duì)所保留的擬定陽性TIS瓊脂培養(yǎng)物，可按下面四，11節(jié)敘述的進(jìn)行檢測(cè)，是否為沙門氏菌，包括亞利桑那沙門氏菌。在TSI瓊脂中，典型的沙門氏菌培養(yǎng)物使斜面呈堿性（紅色），底層呈酸性（黃色），產(chǎn)生或不產(chǎn)生H2S（瓊脂變黑色）。參考的對(duì)照培養(yǎng)物除了陽性對(duì)照外（典型沙門氏菌），3個(gè)附加的沙門氏菌培養(yǎng)物也可用來輔助非典型沙門氏菌在選擇性平板上的獲得，這些對(duì)照是乳糖陽性，H2S陽性的沙門氏菌（ATCC12325）和乳糖陰性，H2S陰性的沙門氏菌（ATCC9842），或者乳糖陽性，H2S陰性的沙門氏菌（ATCC29934），這些菌種可從ATCC購(gòu)買到。HE和XLD平板經(jīng)24177。2小時(shí)時(shí)是否挑取過菌落，BS平板再培養(yǎng)24177。b、 在木糖賴氨酸去氧膽酸鹽（XLD）瓊脂上. 粉色菌落，帶或不帶黑色中心。 把選擇性平板置35℃培養(yǎng)24177。2小時(shí)。TTB肉湯在43177。2小時(shí)。豬耳和狗顎類從每個(gè)樣品中挑出一片(尺寸小的可挑23片)置于無菌的塑料袋中，將塑料袋置于大燒杯中或其它合適的容器內(nèi)，按1:9的比例(g/L) (見以上A，2324)加入無菌的乳糖肉湯，浸沒樣品。旋松瓶蓋，35℃培養(yǎng)24177。2小時(shí)。再把裝有乳糖肉湯的塑料袋放入塑料燒杯或其它合適的容器內(nèi)，于35℃培養(yǎng)24177。以下試驗(yàn)按D,111進(jìn)行。旋動(dòng)使充分混勻，用試紙測(cè)定pH值。2小時(shí)。2h。把瓶蓋松開約1/4圈置于35℃培養(yǎng)24177。以下試驗(yàn)按D,111進(jìn)行。c、 多香果粉、肉桂、丁香及薄荷調(diào)味料目前還沒有方法可以中和這4種調(diào)料的毒性。無菌稱取25g樣品于滅菌帶螺旋帽的廣口瓶中(500ml)或其它合適的容器內(nèi)，加 入225ml滅菌的TSB肉湯，充分混勻形成懸液，蓋緊瓶塞，室溫下靜置60mi