【正文】 試劑 （ 3）妊娠診斷試劑 （ 4）抗 ABO 血型系統(tǒng)血清 免疫標(biāo)記技術(shù)用的抗體類試劑 P164 給抗體標(biāo)記放射性核素、熒光素或酶活性，能將抗原抗體反應(yīng)放大，使常規(guī)不能觀察的反應(yīng)得以顯現(xiàn)，可對微量抗原進(jìn)行定性定量測定，靈敏度提高。人 CD 的編號已從 CD1 命名至 CD247，大致分為 13 組。 ② 第二代免疫毒素是利用抗體或抗體片段與毒素的 A 鏈或與 A 鏈相似的單鏈核糖體失活蛋白的結(jié)合物。P183 （ 1）生長階段特征 ? 延遲期：細(xì)胞數(shù)量不變，核酸及蛋白合成較快 ? 加速期：最大生長期，最大細(xì)胞濃度 ? 對數(shù)期：細(xì)胞數(shù)呈對數(shù)增加 ? 穩(wěn)定期：細(xì)胞高液泡化，非常脆弱 （ 2）植物細(xì)胞與動物細(xì)胞、微 生物細(xì)胞比較 特征 哺乳動物細(xì)胞 植物細(xì)胞 微生物細(xì)胞 大小（ μm） 10~100 10~100 1~10 生長 懸浮、貼壁 懸浮 懸浮 營養(yǎng)要求 很復(fù)雜 較復(fù)雜 很簡單 生長速度（倍增時間：h） 慢； 15~100 慢； 20~120 快； ~5 細(xì)胞分化 有 有限分化 無 環(huán)境影響 非常敏感 敏感 一般 細(xì)胞壁 無 有 有 產(chǎn)物存在部位 胞內(nèi)或胞外 胞內(nèi)或胞外 胞內(nèi)或胞外 產(chǎn)物濃度 低 低 高 含水量 約 90 約 75 供氧需求 1~25 20~30 100~1000 產(chǎn)物種類 疫苗、單抗、酶、生長因子、激素、免疫調(diào)節(jié)劑 酶、天然色素、天然有機(jī)化合物等 發(fā)酵食品、抗生素、有機(jī)化合物、酶等 第四節(jié) 植物細(xì)胞培養(yǎng)的基本技術(shù) 植物材料的準(zhǔn)備 ； P185 植物組織培養(yǎng)的外植體必須是無雜菌材料。 植物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)的方法及特點(diǎn)； P191 （ 1）大規(guī)模植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng) ①成批培養(yǎng)法（分批）：最適于植物細(xì)胞培養(yǎng)的反應(yīng)器是氣升式反應(yīng)器 將培養(yǎng)基一次性加入反應(yīng)器中，接種、培養(yǎng)一定時間后收獲細(xì)胞的操作方式 ②半連續(xù)培養(yǎng)：在反應(yīng)器中投料和接種培養(yǎng)一段時間后，將部分培養(yǎng)液和新鮮培養(yǎng)基進(jìn)行家換。 P197 第六節(jié) 植物細(xì)胞培養(yǎng)的生物反應(yīng)器 植物細(xì)胞反應(yīng)器的選擇取決于：生產(chǎn)細(xì)胞的密度、通氣量、提供的營養(yǎng)成分的分散程度。 誘導(dǎo)子有兩種分類，一種是根據(jù)在細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞外 形成而將其分為 內(nèi)源性誘導(dǎo)子 和 外源性誘導(dǎo)子 ；另一種是根據(jù)其來源分為 生物誘導(dǎo)子 和非生物誘導(dǎo)子 。（ 6）酶的抑制劑、激活劑的開發(fā)和應(yīng)用研究。 （ 3）優(yōu)點(diǎn)： ①可多次使用； ②反應(yīng)后，酶底物產(chǎn)物易分開，產(chǎn)物中無殘留酶，易純化，產(chǎn)品質(zhì)量高；③反應(yīng)條件易控制；④酶的利用效率高；⑤比水溶性酶更適合于多酶反應(yīng) 。 （ 2）交聯(lián)法： 用雙功能或多功能試劑使酶與酶或細(xì)胞與細(xì)胞之間交聯(lián)的方法。通常為直徑幾微米到幾百微米的球狀體。②最適 pH：最適 pH 可能變大，也可能變??；③最適溫度：一般升高。 底物以恒定流速通過反應(yīng)床。② 在酶技術(shù)和有機(jī)合成中，分子印跡聚合物可作為模擬抗體，模擬酶或具有催化活性的聚合物。①提高生物活性②增強(qiáng)在不良環(huán)境（非生理?xiàng)l件）中的穩(wěn)定性③針對異體反應(yīng)，降低生物識別能力。 （ 4）單相有機(jī)溶劑體系：在該體系中，不存在單獨(dú)的水相，只含極微量的水，即在酶分子周圍存在著一層水分子膜，以維持催化反應(yīng)所必需的構(gòu)象。 菌種選育； P261 菌種選育包括：自然選育、誘變育種、雜交育種等經(jīng)驗(yàn)育種方法，還包括控制雜交育種、原生質(zhì)體融合、基因工程等定向育 種方法。為防止菌種衰退，需把菌種進(jìn)行保藏，并且還需不斷純化。 ②特點(diǎn)：發(fā)酵罐內(nèi)料液量維持恒定，微生物在近似恒定狀態(tài) ③優(yōu)點(diǎn) ：能維持低基質(zhì)濃度；可以提高設(shè)備利用率 和單位時間的產(chǎn)量；便于自動控制。 （ 3） PH 的影響及控制：有最適生長 PH 和最適發(fā)酵 PH；通過加酸性物質(zhì)或堿性物質(zhì)調(diào)節(jié) PH，也可補(bǔ)料來調(diào)節(jié) （ 4）溶氧的影響及控制：根據(jù)微生物對氧的需求來控制溶氧濃度；調(diào)節(jié)通氣速率和攪拌速率來。 ③ 優(yōu)點(diǎn)：操作簡單；操作引起染菌的概率低；不會產(chǎn)生菌種老化和變異等問題 缺點(diǎn)：非生產(chǎn)時間較長、設(shè)備利用率低。 （ 4） 融合子的 篩選： 依靠在選擇培養(yǎng)基上的遺傳標(biāo)記，有二個遺傳標(biāo)記互補(bǔ)，就可確定其為融合子。 P261 發(fā)酵工業(yè)的生產(chǎn)水平取決于三要素： 生產(chǎn)菌種、發(fā)酵工藝、發(fā)酵設(shè)備。在該體系中，要求底物在水和有機(jī)溶劑中的溶解度盡可能大，而產(chǎn)物在水中的溶解度要小。 酶化學(xué)修飾：通過化學(xué)方法對酶 分子的主鏈進(jìn)行切割、剪接和側(cè)鏈基團(tuán)的化學(xué)修飾改造，以改變其理化性質(zhì)和生物活性。 P236 模擬酶的分類 P236 （ 1）根據(jù) Kirby 分類法：單純酶模型、機(jī)理酶模型、單純合成的酶樣化合物 （ 2）主 客體酶模型：主 客體酶（環(huán)糊精 CD）、膠束酶模型、肽酶、分子印跡酶模型、半合成酶 何謂分 子印跡？分子印跡的應(yīng)用范圍有哪些？ P238 分子印跡 ：指制備對某一特定分子具有選擇性的聚合物的過程，該特定分子稱為印跡分子或模板。 （ 2）連續(xù)流動攪拌罐反應(yīng)器：連續(xù)進(jìn)料、連續(xù)出料 （ 3）填充床反應(yīng)器： 固定化酶填充于床層內(nèi)。其原因是限制了酶分子之間的相互作用，阻止了其自溶，增加了酶構(gòu)型的牢固程度。多用于固定化細(xì)胞。 ③共價(jià)結(jié)合法：酶以共價(jià)鍵結(jié)合于載體上。 P218 第二節(jié) 酶和細(xì)胞固定化 固定化酶的特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)各是什么？ P219 （ 1）固定化酶：限制或固定于特定空間位置的酶。（ 3）酶生產(chǎn)中基因工程的應(yīng)用及遺傳修飾酶的研究。 第七節(jié) 進(jìn)展與展望 植物細(xì)胞培養(yǎng)有哪些新進(jìn)展？ P204 （ 1）誘導(dǎo)子在植物細(xì)胞工程中的應(yīng)用：利用誘導(dǎo)子進(jìn)行有目的次級代謝產(chǎn)物調(diào)控及生物合成。 ④ 植物生長調(diào)節(jié)劑：不同植物激素及其不同組合形式均可顯著影響次級代謝產(chǎn)物的產(chǎn)生。 ） （ 4）氮源 ：蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物或各種氨基酸。 P177 植物體中任何一個具有完整細(xì)胞核（完整染色體組）的細(xì)胞，在一定條件下都可以重新再分化形成原來的個體。 ②抗體類藥物逆轉(zhuǎn)耐藥性 （ 3）毒素偶聯(lián)的抗體藥物 在導(dǎo)向藥物中，毒素和抗體的交聯(lián)物稱為免疫毒素。 常 用的標(biāo)記抗體試劑： a、 HBsAg 放射性核素標(biāo)記抗體診斷試劑： 125 I 標(biāo)記，靈敏度 ng/ml b、 HBeAg 放射性核素標(biāo)記抗體診斷試劑： 125 I 標(biāo)記，靈敏度 ng/ml c、 HAV 抗原放射性核素標(biāo)記抗體診斷試劑： 125 I 標(biāo)記 d、 AFP 放射性核素標(biāo)記抗體診斷試劑： 125 I 標(biāo)記，靈敏度 1~5 ng/ml e、 CEA 放射性核素標(biāo)記抗體診斷試劑： 125 I 標(biāo)記，靈敏度 1 ng/ml 導(dǎo)向診斷藥物 由于腫瘤的特異性小分子抗體尚在研究之中，所以導(dǎo)向藥物 還未愛臨床廣泛應(yīng)用。通過 “ 吸附－洗脫－擴(kuò)增 ” 的富集過程 ， 從中篩選出特異性抗體的可變區(qū)基因。 VH或 VL （ 7）最小識別單位：即 MRU，只含有 一個 CDR 多肽的抗體，也為超變區(qū)多肽。 基因工程抗體及其特性和制備方法 （ P152 圖 44） （ 1） 人鼠嵌合抗體 ：在基因水平上將鼠源單抗的 H 和 L 鏈可變區(qū)（ V 區(qū)）基因分離出來，分別與人 Ig 的 H 和 L 鏈的穩(wěn)定區(qū)（ C）基因連接成人 鼠嵌合抗體的 H 和 L 鏈基因，再共轉(zhuǎn)染骨髓瘤細(xì)胞，就能表達(dá)完整人 鼠嵌合抗體。 原理： 酶分子與抗體或抗抗體分子共價(jià)結(jié)合，此種結(jié)合不會改變抗體的免疫學(xué)特性，也不影響酶的生物學(xué)活性。 ）和 軟瓊脂法 （ 將雜交瘤細(xì)胞稀釋到一定密度，然后與瓊脂混懸。體內(nèi)免疫就是將抗原注射到小鼠腹腔，使小鼠產(chǎn)生免疫反應(yīng)， B 細(xì)胞迅速增殖；體外免疫小鼠脾細(xì)胞的懸浮液與抗原一起培養(yǎng)后，再分離脾細(xì)胞。 P137 第四章 抗體制藥 第一節(jié) 概述 P143 抗體：即 Ig，指能與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合具有免疫功能的球蛋白。它與連續(xù)式操作不同處，在于取出部分 條件培養(yǎng)基時，絕大部分細(xì)胞仍保留在反應(yīng)器內(nèi)，而連續(xù)式培養(yǎng)則同時也取出部分細(xì)胞。該培養(yǎng)方法操作簡便，節(jié)省了微載體的成本。 （目前在生產(chǎn)中用于懸浮培養(yǎng)的設(shè)備主要是通氣攪拌罐式生物反應(yīng)器和氣升式生物反應(yīng)器。④ 細(xì)胞產(chǎn)品易于純化。 (3)轉(zhuǎn)化細(xì)胞 這類細(xì)胞是通過某個轉(zhuǎn)化過程形成的，它常常由于染 色體的斷裂變成了異倍體，從而失去了“正常”細(xì)胞的特點(diǎn)，而獲得了無限增殖的能力。 (6)動物細(xì)胞對蛋白質(zhì)的合成途徑和修飾功能與細(xì)菌不 同 動物細(xì)胞的蛋白質(zhì)合成除了在游離的核糖體上進(jìn)行外，還在與糙面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上結(jié)合的核糖 體上進(jìn)行。 什么是接觸抑制現(xiàn)象？ P84 當(dāng)細(xì)胞在基質(zhì)上分裂增殖，逐漸匯合成片時，即每個細(xì)胞與其周圍的細(xì)胞相互接觸時， 細(xì)胞就停止增殖。 （ 5）蛋白質(zhì)二硫鍵分析 二硫鍵和巰基與蛋白質(zhì)的生物活性密切相關(guān)，基因工程藥物產(chǎn)品的硫 硫鍵是否正確配對 是一個重要問題。 包涵體的分離和溶解 P63 （ 1）包涵體的分離：重組菌破碎后，離心得沉淀部分，再用低濃度變性劑（ 脲或鹽酸胍）、去垢劑（ Triton X100）、脫氧膽酸鈉洗滌。 （ 4） 凝膠過濾層析 P59 凝膠過濾是以具有大小一定的多孔性凝膠作為分離介質(zhì)，小分子能進(jìn)入孔內(nèi)，在柱中緩慢移動，而大分子不能進(jìn)入孔內(nèi)，快速移動，大分子量物質(zhì)先流出，小分子物質(zhì)后流出。色譜技術(shù)分為離子 交換色譜、疏水色譜、反相色譜、親和色譜、凝膠過濾色譜、高 壓液相色譜等。包括：①菌種的類型及其代謝特性。 質(zhì)粒的分裂不穩(wěn)定 是指工程菌在分裂時出現(xiàn)一定比例的不含質(zhì)粒的子代菌的現(xiàn)象。 載體相關(guān)定義 載體： 在基因工程重組 DNA 技術(shù)中將 DNA 片段 (目的基因 )轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞的一種能自我復(fù)制的 DNA 分子。 ④ 密碼子組成：應(yīng)選擇使用大腸桿菌偏愛的密碼子。已有不少真核基因成功表達(dá) ⑵絲狀真菌：分泌能力強(qiáng)，能正確進(jìn)行翻譯后加工（肽剪切糖基化）有成熟的發(fā)酵和后處理工藝。 ⑵枯草芽胞桿菌：分泌能力強(qiáng)，蛋白質(zhì)不形成包含體。 載體分為：表達(dá)型載體和非表達(dá)型載體。 第三節(jié) 目的基因的獲得 利用基因工程生產(chǎn)蛋白質(zhì)或多肽需要得到其基因，制備目的基因常用的方法有哪些？ P16 （ 1）逆轉(zhuǎn)錄法 以 mRNA 為模板，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄的到 cDNA，構(gòu)建 cDNA 文庫，從 cDNA 文庫中篩選目的基因。 生物藥物按用途分為：治療藥物；預(yù)防藥物；診斷藥物。生物技術(shù)制藥復(fù)習(xí)題 第一章 緒論 第一節(jié) 生物技術(shù)的發(fā)展史 生物技術(shù) ：以生命科學(xué)為基礎(chǔ)，利用生物體的特性和功能，設(shè)計(jì)構(gòu)建具有與其性狀的新物種或新品系，并與工程結(jié)合，利用這樣的新物種進(jìn)行加工生產(chǎn)，為社會提供商品服務(wù)的一個綜合性技術(shù)體系。 現(xiàn)代生物藥物分為 4 類 ：重組 DNA 技術(shù)制造的基因重組多肽、蛋白質(zhì)類治療劑；基因藥物；天然藥物；合成與部分合成藥物。 基因工程藥物制造的主要程序 （過程）（重點(diǎn)和后面幾節(jié)聯(lián)系起來） （ 1）目的基因的克隆 （分離目的基因）： 通過逆轉(zhuǎn)錄、 反轉(zhuǎn)錄 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、化學(xué)合成方法來制備 cDNA， 再通過核酸探針雜交或免疫反應(yīng)來篩選目的基因 （ 2）目的基因與載體連接構(gòu)建 DNA 重組體： 通過限制性內(nèi)切酶 DNA 連接酶等核酸酶，把目的基因組入載體的相關(guān)克隆位點(diǎn)，常用的載體有質(zhì)粒載體和 噬菌體載體 （ 3）將 DNA 重組體轉(zhuǎn)入宿主菌構(gòu)建工程菌：常用的宿主菌有大腸桿菌、酵母菌等，先使宿主菌處于感受態(tài)，再通過轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)等方式把重組 DNA 導(dǎo)入宿主菌，以構(gòu)建工程菌 （ 4）工程菌發(fā)酵： 提供適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基、反應(yīng)器、控制好 發(fā)酵過程中的各種參數(shù)，如溫度、 PH、溶氧等，并通過升溫來誘導(dǎo)產(chǎn)物表達(dá) （ 5）目的基因表達(dá)產(chǎn)物的分離純化： 通過固液分離、初 步純化、高度純化、成品加工來制備產(chǎn)品；若是胞內(nèi)產(chǎn)物需要細(xì)胞破碎，若是包涵體則需要變性和復(fù)性 （ 6）產(chǎn)品的檢驗(yàn) ： 檢測產(chǎn)品的質(zhì)量和性能 。 （ 5）從 cDNA 文庫中篩選目的基因 ：得到 cDNA 文庫后，通常采用核酸探針雜交法和免疫反應(yīng)鑒定法從數(shù)以萬計(jì)的 DNA 片段中篩選出目的基因。其內(nèi)毒素很難除去。能外分泌，產(chǎn)物可糖基化。 ③ SD 序列和起始密碼 ATG 的間距 ：表達(dá)非融合蛋白的關(guān)鍵是原核 SD 序列和真核起始密碼ATG 之間的距離，距離過長過短都影響真核基因的表達(dá)。 ⑶ 分泌型表達(dá) 藥物基因（ 外源基因融合到編碼原核蛋白信號肽序列的下游） 優(yōu)點(diǎn)：在周質(zhì)中穩(wěn)定，有活性，不 含蛋氨酸殘基； 缺點(diǎn)：產(chǎn)量不高， 信號肽不被切割。適當(dāng)提高 pH，可減少乙酸的抑制作用 ； P31 第六節(jié) 基因工程菌的不穩(wěn)定性 質(zhì)粒不穩(wěn)定分為那兩類？ P32 工程菌在傳代過程中經(jīng)常出現(xiàn)質(zhì)粒不穩(wěn)定的現(xiàn)象，質(zhì)粒不穩(wěn)定分為 分裂不穩(wěn)定和結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定。 分離純化的基本過程 若是論述題最好對過程進(jìn)行一定的介紹 建立分離純化工藝的根據(jù) P46 （ 1）含目的產(chǎn)物的起始料的特點(diǎn) 基因工程菌的發(fā)酵產(chǎn)物其上游過程的各種因素對分離、純化工藝有影響。色譜技術(shù)是醫(yī)藥生物技術(shù)下游過程精制階段的常用手段，其優(yōu)點(diǎn)是該法具有多種多樣的分離機(jī)制、設(shè)備簡單、便于自動化控制和分離過程中無發(fā)熱等 有害效應(yīng)。洗脫時分為特異性洗脫和非特異性洗脫。