培訓(xùn)3-植物基因工程技術(shù)及應(yīng)用(存儲版)
【正文】 業(yè)化的批準(zhǔn)有年限控制，一般時限是 4年。對于一種食物過敏的人有時還會對一種以前他們不過敏的食物產(chǎn)生過敏，比如：科學(xué)家將玉米的某一段基因加入到核桃、小麥和貝類動物的基因中，蛋白質(zhì)也隨基因加了進(jìn)去，那么，以前吃玉米過敏的人就可能對這些核桃、小麥和貝類食品過敏。在一次實驗室研究中，一種蝴蝶的幼蟲在吃了含桿菌基因的馬利筋屬植物的花粉之后，產(chǎn)生了死亡或不正常發(fā)育的現(xiàn)象，這引起了生態(tài)學(xué)家們的另一種擔(dān)心，那些不在改良范圍之內(nèi)的其它物種有可能成為改良物種的受害者。國際經(jīng)合組織（ OECD）、聯(lián)合國糧農(nóng)組織（ FAO）、環(huán)保規(guī)劃署（ UNEP）、生物安全議定書、食品法典委員會，都對轉(zhuǎn)基因生物的安全提出了明確的要求。實行標(biāo)識管理制度是使消費者有知情權(quán)和選擇權(quán)。農(nóng)業(yè)部負(fù)責(zé)監(jiān)管基因作物進(jìn)行田間試驗的結(jié)果 ,食品與藥物管理局 (FDA)負(fù)責(zé)對基因食品安全性的審核 ,而環(huán)保署則負(fù)責(zé)對該基因作物對環(huán)境影響的評估。如歐盟轉(zhuǎn)基因作物的商業(yè)化主要是政府和公眾對轉(zhuǎn)基因作物的認(rèn)識問題，而對貧窮的發(fā)展中國家則可能是經(jīng)濟(jì)問題。 自 1983年首次獲得轉(zhuǎn)基因煙草、馬鈴薯以來，在短短十余年間，轉(zhuǎn)基因作物的研究和開發(fā)進(jìn)展十分迅速。因此只能在作物播種前使用。 再如，美國生物技術(shù)研究人員把月桂樹基因?qū)胗筒酥?，生產(chǎn)出含月桂酸油達(dá) 40％的油菜籽，大大降低了成本并增加了產(chǎn)量。 ? 戴維斯加州大學(xué)，利用凸顯特定基因功能的方法，已大大改變了西紅柿、水稻和苜蓿耐鹽的能力，使作物可在更嚴(yán)苛的條件下 茁壯生長。這種雙季水稻的稻種是由遼寧盤錦市科研人員采用兩種不同抗性的水稻品種進(jìn)行雜交，突破了抗旱、抗寒、抗病蟲害等關(guān)鍵點。 ? 經(jīng)初步測產(chǎn)，每畝產(chǎn)量可達(dá) 1040斤。 ? 伊利諾大學(xué)生物學(xué)家從 “ 冰葉日中花 ” 中找到產(chǎn)生滲透保護(hù)劑的基因，并將其引入煙草作物，結(jié)果改性后的煙草特別耐旱。 改良品質(zhì)方面 一個被稱作“金水稻”的轉(zhuǎn)基因品種（孟山都等公司開發(fā)的），可以使食用者 避免維生素 A缺乏癥 。 抗除草劑方面 有資料報道：農(nóng)業(yè)上因雜草危害減產(chǎn)由 40年代的 8%上升為 12%。其中轉(zhuǎn)基因大豆占全球轉(zhuǎn)基因作物面積約６０％，轉(zhuǎn)基因棉花和油菜的種植面積位居第三和第四。 ? 。 我國還建立了由農(nóng)業(yè)部、國家發(fā)改委、科技部、衛(wèi)生部、國家質(zhì)檢總局和國家環(huán)?？偩纸M成的國家農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物安全管理部際聯(lián)席會議制度。 我國在制定 《 條例 》 及其配套規(guī)章的過程中，對國外的相關(guān)法規(guī)進(jìn)行了比較研究。 使人們對轉(zhuǎn)基因作物及其產(chǎn)品的安全性問題充滿了憂慮 轉(zhuǎn)基因植物的幾個典型事件 ① “ 馬鈴薯”事件 英國 《 獨立報 》 披露了轉(zhuǎn)基因食品巨頭孟山都公司的一份秘密報告 ?不能確定轉(zhuǎn)基因和非轉(zhuǎn)基因的馬鈴薯化學(xué)成分有什么差異 ?對使用轉(zhuǎn)基因土豆的大鼠，沒有補充蛋白質(zhì)以防止饑餓 ?供試動物數(shù)量少，飼喂的幾種食物都不是大鼠的標(biāo)準(zhǔn)食物 ?試驗設(shè)計差，未作雙盲測定 ?統(tǒng)計方法不當(dāng)，試驗結(jié)果無一致性 試驗錯誤 含雪花蓮凝集素基因的土豆 體重和器官減輕， 免疫系統(tǒng)受到破壞 ② “ 斑蝶”事件（ 1999年５月，康奈爾大學(xué)的一個研究組在 《 Nature》 雜志上發(fā)表文章 ） 但 2年后美國組織了多個大學(xué)和研究部門進(jìn)行了大量試驗，得出了科學(xué)的結(jié)論： ? 玉米花粉重，擴(kuò)散不遠(yuǎn) ? 田間試驗表明，抗蟲玉米花粉對斑蝶并不構(gòu)成威脅 轉(zhuǎn)基因抗蟲玉米的花粉 “馬利筋” 44%幼蟲死亡 北美珍稀瀕危 大斑蝶 雜草 ? 斑蝶幼蟲真正的死因 農(nóng)藥使用過度 生態(tài) 環(huán)境的破壞 （五）轉(zhuǎn)基因植物的安全評價與檢測 ? 安全性評價主要包括兩部分：一是對人類健康的影響，一是對環(huán)境的影響。 ? 第五是對環(huán)境的威脅。一些研究學(xué)者認(rèn)為，對于基因的人工提煉和添加，可能在達(dá)到某些人們想達(dá)到的效果的同時，也增加和積聚了食物中原有的微量毒素。本階段的評價主要是評估轉(zhuǎn)基因生物對環(huán)境是否有影響和壓力。 ⑤ 將芽轉(zhuǎn)入含有抗生素的生根培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)生根。 是由我國科學(xué)家周光宇首先提出設(shè)計的 ， 目前已應(yīng)用于水稻 、 小麥 、 棉花 、 大豆 、 花生 、蔬菜等作物的轉(zhuǎn)基因研究 ， 花粉管導(dǎo)入法的特點是直接 、 簡便 。 在宿主細(xì)胞中能保存下來并能大量復(fù)制； 有多個限制酶切點，而且每種酶的切點最好只有一個，可適于多種限制酶切割的 DNA插入； 含有復(fù)制起始位點 ori ，能夠獨立復(fù)制； 有一定的標(biāo)記基因，便于進(jìn)行篩選。 ?② PCR ?③ 特異片段的回收、連接與轉(zhuǎn)化 將擴(kuò)增產(chǎn)物用 1%瓊脂糖凝膠（ EB染色）在 100V電壓的電泳液中電泳 40min 在紫外燈下用刀片切取帶有特異帶的膠塊，并把該膠塊轉(zhuǎn)移到 回收片段按照膠回收試劑盒進(jìn)行 目的片段與克隆載體的連接（ pGEM –T easy vector或 pMD18T ）在4℃ 條件下連接 12h16h 采用熱激法，將連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化至大腸桿菌的感受態(tài)細(xì)胞 JM109 將全部菌液涂于含 Amp（ Xgal為 40181。 ? 1. 提取 DNA （二）轉(zhuǎn)基因技術(shù) 有 SDS法和 CTAB法，常采用 CTAB法提取方法基因組 DNA。 2022年 2月 24日統(tǒng)計 種植面積排名前三位的國家分別為，美國（ 6250萬公頃）、阿根廷（ 2100萬公頃）和巴西（ 1580萬公頃）。 （一）轉(zhuǎn)
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