hplc和ce衍生試劑ppt課件(存儲版)
【正文】 OOC H 2 CONOOFig. 13. Electropherograms obtained for separations of five DTAF labeling phosphoamino and amino acids in pH borate buffer–10mM Brij35. Separation voltage: 25 KV。 3 s injection。 (b) coated capillary, 225 kV, 24 mA. Sample concentration, 200 mmol/L。 capillary 55 cm (47 cm to detector window)350 mm ., (a) uncoated capillary,125 kV, 24 mA。隨著 BSA濃度不斷的增加，游離的 FITCBSA峰不斷升高，而 FITC標記的抗原抗體復(fù)合物的峰不斷降低，甚至消失 Comparison of electropherograms of petitive CEIA due to adsorption of the analyte to the capillary wall with whole antiBSA. The reaction mixtures contained FITCBSA(300 nmol/L), antiBSA (333 nmol/L) and BSA solution in different concentrations. Buffer, 200 mmol/L borate, pH . Applied voltage, 25 kV。 injection: 50 mbar for 3 s。 液相色譜和毛細管電泳中的 衍生試劑 ? 為什么衍生 ? 衍生方式 ? 衍生試劑的構(gòu)成與要求 ? 衍生試劑 種類及應(yīng)用 液相色譜和毛細管電泳中的衍生試劑 為什么衍生 ? 檢測方法與檢測信號 ? 化學(xué)衍生主要是用于改善檢測靈敏度 ? 不好線性檢測或較窄線性范圍檢測和高檢出限的分析物，通過衍生得到改善 ? 不能與其它基體物質(zhì)分辨的分析物，通過衍生可以擴大差別 ? 熒光生成（ fluorogenic）試劑和熒光標記（ fluorescent label）試劑 . 衍生反應(yīng)方式 ? 柱前衍生（ precolumn derivatizations） ? 柱后衍生（ post column derivatizations) ? 柱中衍生 （ on column derivatizations) ? 離線（ off line)柱前衍生 ? 在線（ on line)柱前衍生， ? 離線（ off line)柱后衍生 ? 在線柱后衍生 柱前衍生 ? 自由性大 ? 衍生與柱分離的流動相無關(guān) ? 提高檢測靈敏度 ? 改善分離方法選擇性和色譜分辨率 ? 易于優(yōu)化反應(yīng)條件 衍生物穩(wěn)定 產(chǎn)率高 副反應(yīng)產(chǎn)物少 ? 選擇易與色譜流動相混合的溶劑作為衍生溶劑 在線柱后衍生 ? 柱后反應(yīng)器 ? 衍生反應(yīng)不強調(diào)生成單一的穩(wěn)定的衍生產(chǎn)物 ? 過量的衍生試劑干擾檢測 ? 要求快速并允許現(xiàn)時檢測 ? 加泵供給衍生試劑 ? 反應(yīng)溶劑必須與分離用的流動相易混溶 ? 衍生試劑與柱淋洗液有效混合 柱中衍生 ? 這一衍生方法基本是把衍生試劑溶入流動相，注射樣品后，在柱上分析物與流動相中的衍生試劑反應(yīng) ? 方法適于不太穩(wěn)定的衍生物，反應(yīng)要快 ? 所需衍生試劑量較大，昂貴的衍生試劑不應(yīng)采用此法 . 衍生試劑的構(gòu)成與要求 ? 衍生試劑必須含有可檢測的基團，即顯色團（ chromophore）、熒光團（ fluorophore）和電基團（ electrophore） ? 含有反應(yīng)基團如 FITC NSC H 3 OC H 3 ONCSNOOC O O HO OOC H 2COO? 衍生試劑穩(wěn)定 要純 ， 不含雜質(zhì) ， ? 形成一種衍生物 ， 盡可能沒有副產(chǎn)物形成 ? 盡可能高衍生物產(chǎn)
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