【正文】 振動(dòng)信息。 SPR可提供表面介電常數(shù)和厚度的信息，以及分子相 互作用的信息。 3. 為什么講生物質(zhì)譜是蛋白質(zhì)組學(xué)研究的主要工具？ 4. 請(qǐng)查文獻(xiàn)說(shuō)明分析化學(xué)在人類基因組研究中作用。 圖 在波長(zhǎng) nm激光激發(fā)下，在三種不同波長(zhǎng)區(qū)內(nèi)測(cè) 得的吸附在 Ag電極上的 Os(NH3)5py3+的 SERS光譜與電勢(shì) (尺度標(biāo) 在右側(cè) )關(guān)系圖 最近的一個(gè)有意義的發(fā)現(xiàn)是，從觀察負(fù)載有吸附分子 (例如羅丹明 6G)的 Ag顆粒，當(dāng)采用波長(zhǎng)為 nm激 發(fā)光時(shí)，當(dāng)這些 “ 熱 ” 顆粒的大小在 80－ 100 nm時(shí)，相 對(duì)于粗糙表面具有非常大的增強(qiáng)因子 (約 1014)，這種 巨大的增強(qiáng)可用于觀察單分子的 Raman圖譜。 每條曲線是在 V和 V(相對(duì)于 NHE)處記錄的光譜的差值。 IR輻射 窗口 薄溶液層 圖 紅外光譜電化學(xué)的外反射示意圖 圖 IRSEC的光譜電化學(xué)池 由于大多數(shù)溶劑對(duì)紅外輻射有較強(qiáng)的吸收，所以窗口和電極之間 的溶液薄層必須很小 (1100 nm)。 在此主要討論現(xiàn)場(chǎng)方法。而與一維色譜相比，近幾年來(lái)得到迅速發(fā)展和廣泛 應(yīng)用的多維液相色譜 (Multidimensional highperformance liquid chromatography， MDLC)不僅能夠提供更大的峰容量，而 且還具有分離樣品動(dòng)態(tài)范圍寬、分辨率高和自動(dòng)化程度高等優(yōu)點(diǎn)， 它的出現(xiàn)不僅很好的解決了復(fù)雜樣品的分離分析問題，而且大大 提高了液相色譜的分離能力和選擇性。 該電離技術(shù)利用位于一根毛細(xì)管和質(zhì)譜儀進(jìn)口間的電 勢(shì)差生成離子，在電場(chǎng)的作用下產(chǎn)生以噴霧形式存在 的帶電液滴，當(dāng)使用干燥氣體或者加熱時(shí)，溶劑蒸發(fā)， 帶電液滴體積縮小，電場(chǎng)增強(qiáng)，離子向液滴表面移動(dòng) 并從表面揮發(fā)，最終生成單電荷或多電荷去溶劑化離 子。 為實(shí)現(xiàn)液相色譜與質(zhì)譜的聯(lián)用，需要解決液相色譜流動(dòng)相對(duì) 質(zhì)譜工作條件的影響的問題，為此可以通過(guò)以下兩個(gè)途徑實(shí) 現(xiàn)： 一是發(fā)展不同接口以協(xié)調(diào) LC和 MS的不同要求； 二是改進(jìn)液相色譜技術(shù)，如發(fā)展微柱液相色譜，減少進(jìn)入質(zhì) 譜流動(dòng)相的量，改進(jìn)質(zhì)譜的離子化方法，使它們兩者之間逐 漸靠近。 由此可以看出，如果把 LC分離和質(zhì)譜分析有機(jī)結(jié)合起來(lái)，充分 發(fā)揮它們各自的優(yōu)點(diǎn)，取長(zhǎng)補(bǔ)短，就可以有效的對(duì)復(fù)雜樣品進(jìn) 行定性和定量分析，因此， LC 質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)逐漸被廣大科研 工作者所關(guān)注。近幾年發(fā)展起來(lái)的納升電噴霧方法 (Nanospray)，采用內(nèi)徑為 10 μm左右的噴針，樣品注入到噴針 的噴口，在噴口前端產(chǎn)生噴霧，噴霧液滴比常規(guī)電噴霧產(chǎn)生的 小 100倍，這樣可以使樣品被充分利用，并有效離子化。 ESI通?？梢缘玫蕉嚯姾煞肿与x子，這對(duì) 于測(cè)量大分子意義重大。 (2) 氣動(dòng)輔助電噴霧：具有上述電噴霧的特點(diǎn)，但最初的液滴 形成是由輔氣 (如 N2)幫助霧化的結(jié)果。 缺點(diǎn)： 大質(zhì)量離子檢測(cè)較困難。 常用的基體有： 芥子酸 (SA)， 2,5二羥基苯甲酸，咖啡酸，吡臻酸， 安息香酸，尼古丁酸等。 MALDI是 1988年由 Hillenkamp 和 Micheal Karas等首 先提出的，其原理同 FAB類似。 二維質(zhì)譜在提高分析靈敏度、通量等方面具有特殊 的優(yōu)點(diǎn)，是蛋白質(zhì)組大規(guī)模篩選的 首選工具 。 蛋白質(zhì)組學(xué) (Proteomics)－生物質(zhì)譜！ Proteomics is the study of the proteome, the protein plement of the genome. The terms ”proteomics” and “proteome” were coined by Marc Wilkins and colleagues in the early 1990s and mirror the terms “genomics” and “genome”, which describe the entire collection of genes in an anism. Introduction to Proteomics, Daniel Liebler. 2022, Humana Press 蛋白質(zhì)組學(xué)目前面臨的最大挑戰(zhàn)是什么？ 各種質(zhì)譜技術(shù) 質(zhì)譜儀的一般結(jié)構(gòu)框圖如圖 。 MS的特點(diǎn)可概括為 4個(gè) S: 靈敏 (sensitivity)、快速 (speed)、專一 (specificity)、化學(xué)計(jì)量 (stoichiometry)。因此，為了圓滿完成復(fù) 雜樣品體系的全分析，需要綜合利用包括色譜法和質(zhì)譜法在內(nèi)的 多種現(xiàn)代分離、分析方法。如果要對(duì)復(fù)雜樣品體系提供全面、準(zhǔn) 確的結(jié)構(gòu)與成分表征信息，那么其分析過(guò)程可能包括從常量到微 量、痕量分析，從成分到結(jié)構(gòu)、形態(tài)分析，從總體到微區(qū)、表面、 空間分布分析，從宏觀形貌到微觀結(jié)構(gòu)分析，從靜態(tài)到動(dòng)態(tài)、時(shí) 間分辨分析，從破壞到非破壞分析等等。 質(zhì)譜法的特點(diǎn)： (1) 高靈敏度，可測(cè) 108mol以下物質(zhì)的量； (2) 快速，數(shù)分鐘內(nèi)即可完成測(cè)試； (3) 能同時(shí)提供樣品的精確分子質(zhì)量和結(jié)構(gòu)信息； (4) 既可用于定性分析，也可用于定量分析； (5) 能有效地與各種色譜技術(shù)聯(lián)用，如 GC/MS， HPLC/MS， TLC/MS及 CZE/MS等，用于復(fù)雜 體系分析。首先是質(zhì)譜技術(shù)，尤其是軟電離技術(shù) 的發(fā)展和雙向 (二維 )凝膠電泳技術(shù)的完善，使得蛋白質(zhì)的大范圍 高通量分析成為可能。例如 QTOF MS, TOF MS, TOFTOF MS以及 MSn等。 1990s在日本和 德國(guó)幾乎同時(shí)報(bào)道了 60000Da分子質(zhì)量的蛋白質(zhì)的電離， 引起全球的關(guān)注和興趣，并刺激了許多公司致力于開發(fā) 相關(guān)質(zhì)譜儀，并研究如何用 MALDI技術(shù)分析蛋白質(zhì)、 多肽及 DNA。 選擇 MALDI的基體主要要求如下： (1) 對(duì)激光有高的吸收系數(shù)； (2) 與樣品能夠溶于同一種溶劑中； (3) 具有真空穩(wěn)定性； (4) 對(duì)普遍存在于生物溶液中的無(wú)機(jī)鹽及緩沖液等 污染物具有包容性。高靈敏度，樣品量只需 要 1pmol，甚至更少。 APIMS的四種工作模式的特點(diǎn)： (1) 電噴霧 (ESI)：離子化過(guò)程應(yīng)用電場(chǎng)來(lái)產(chǎn)生帶電液滴，然后 通過(guò)離子蒸發(fā)將分析物離子送入 MS分析。 ESI電離的一個(gè)主要特點(diǎn)是可以在大氣壓下蒸發(fā)樣 品，離子化過(guò)程溫和，產(chǎn)生碎片極少，是一種軟電 離方法。 (3)在常規(guī)電噴霧電離技術(shù)中，噴霧過(guò)程容易形成較大液滴，液 滴中的樣品分子不能完全離子化，因而降低了樣品的利用率和 質(zhì)譜檢測(cè)靈敏度。 質(zhì)譜分析雖然具有靈敏度高、鑒別能