實驗九聚丙烯酰胺凝膠等電聚焦電泳測定蛋白質(zhì)的等電點(存儲版)
【正文】 丙烯酰胺凝膠等電聚焦電泳測定蛋白質(zhì)的等電點 一、目的要求 等電聚焦電泳測定蛋白質(zhì)的等電點方法 二、原理 聚丙烯酰胺等電聚焦電泳 (Isoelectric FocusingPAGE，簡稱 IEFPAGE)：利用各種蛋白質(zhì)pI不同，以聚丙烯酰胺凝膠為電泳支持物，并在其中加入兩性電解質(zhì)載體 (carrier ampholytes)，兩性電解質(zhì)載體在電場作用下，按各自 pI形成從陽極到陰極逐漸增加的平滑和連續(xù)的 pH梯度。 （ 4）待凝膠聚合 2. 電泳 小心地拔出玻管，并用蒸餾水洗去蔗糖溶液，把管固定到電泳槽上槽的洞中 （安裝時要保證凝膠管垂直且橡膠塞孔密封不漏） 在上槽中加入 5%磷酸緩沖液，在下槽中裝入 2%氫氧化鈉溶液。 次日用酸度計分別測定每管浸提液的 pH值 。 六 、 思考題 (1)簡述聚丙烯酰胺等電聚焦電泳的基本原理 。 為防止上述影響 ， 進行 IEFPAGE時 ， 樣品應(yīng)透析或用 SephadexG25脫鹽
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