cd147在胃癌細胞sgc7901增殖-免費閱讀
【正文】 胃癌最常見的惡性腫瘤之一，惡性腫瘤致死占第二位。 第四十四頁，共四十九頁。 SGC7901/shRNA2細胞 體外侵襲能力顯著降低 010203040506070SGC7901 SGC7901/shRNAcontrolSGC7901/shRNA2Invasive cell numberB * 第四十頁，共四十九頁。 明膠酶譜法是一種測定明膠酶活性的常用方法。Western blot結(jié)果與 Realtime PCR結(jié)果相符。 pSilencer/shRNA1測序圖（紅線為插入片段） 第二十九頁，共四十九頁。 shRNA2 539。 shRNA模板的設(shè)計示意圖 第二十四頁，共四十九頁。 第十九頁，共四十九頁。 CD147可激活 PI3K/AKT細胞存活信號通路 。 并且腫瘤的惡性程度越高 ， CD147的表達水平也越高 。 CD147的結(jié)構(gòu) CD147屬單次跨膜糖蛋白 ， 胞外段中的4個半胱氨酸殘基形成 2個二硫鍵 ， 構(gòu)成 2個典型的半球形 Ig結(jié)構(gòu)域 。 腫瘤細胞利用 MMP的基質(zhì)降解能力遷移到其他部位 。 胃癌概況 胃癌最常見的惡性腫瘤之一 ， 惡性腫瘤致死占第二位 。 其惡性程度較高 ， 轉(zhuǎn)移擴散嚴(yán)重 ， 多數(shù)患者就診時已屬中晚期 ， 因而死亡率較高 。 在腫瘤與間質(zhì)交界處 ， MMP往往高表達 。 第九頁，共四十九頁。 第十二頁，共四十九頁。 在大多數(shù)惡性腫瘤細胞中此通路均被激活 。 三、研究方法及結(jié)果 第二十頁，共四十九頁。 干擾靶序列的選擇 參考陳翔等的報道 ， 選取 CD147mRNA 370390和 808828作為靶序列 ， 相應(yīng)的 shRNA分別命名為 shRNA1和 shRNA2。GATCCGTGACAAAGGCAAGAACGTCTTCAAGAGAGACGTTCTTGCCTTTGTCATTTTTTGGAAA3’ 539。 轉(zhuǎn)染及篩選 脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染 48h后用含 篩選 2周，然后改為半量維持。 第三十二頁，共四十九頁。 收集細胞培養(yǎng)上清液 ， 用 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳法可將這兩種明膠酶按分子量大小分開 ， 顯示兩條負(fù)染條帶 ， 根據(jù)條帶的面積和亮度可判定明膠酶的活性 。 順鉑敏感性實驗 抗腫瘤藥物順鉑的使用濃度以血漿峰濃度 〔 Peak Plasma Concentration， PPC) 為標(biāo)準(zhǔn) 。 我們的研究說明： CD147在胃癌細胞 SGC7901增殖、侵襲和化療藥物敏感性中發(fā)揮重要作用； CD147可能是胃癌治療的一個有效的靶點。轉(zhuǎn)染 SGC7901細胞，篩選穩(wěn)定表達干擾載體的 SGC7901細胞株。 內(nèi)容總結(jié) RNA干擾抑制 CD147表達對人胃癌細胞 SGC7901增殖、侵襲和順鉑敏感性的影響。 ? 成功構(gòu)建了靶向 CD147的 shRNA真核表達載體； ? 成功轉(zhuǎn)染了人胃癌細胞 SGC7901，并獲得了穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株，經(jīng) Realtime PCR、 Western Blot檢測， CD147在 mRNA和蛋白水平均被顯著抑制； ? CD147表達沉默后 SGC7901的增殖能力明顯降低，細胞的 MMP2和MMP9的活性明顯降低，細胞的體外侵襲能力明顯降低，細胞對化療藥物順鉑的敏感性增強。 Transwell結(jié)果 穿過 Transfer侵襲小室的染成紫色的細胞
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