食品安全分析10-免費(fèi)閱讀
【正文】 此法是將樣品的還原型抗壞血酸氧化為脫氫型抗壞血酸，然后與 2， 4二硝基苯肼作用，生成紅色的脎。該染料在酸性溶液中呈粉紅色 (在中性或堿性溶液中呈藍(lán)色 )，被還原后顏色消失。 ?過(guò)柱與洗脫： ? 將全部氧化后的央液及標(biāo)準(zhǔn)液通過(guò)吸附柱后，用約20mL的熱水洗去樣液中的雜質(zhì)，然后用 （丙酮：冰乙酸：水＝ 5： 2： 9）將樣品中核黃素洗脫并收集于一帶蓋 10mL刻度試管中，再用水洗吸附柱，收集洗出液并定容至 10mL，混勻后待測(cè)熒光。此提取液在 4176。 原理 ? 核黃素在 440500nm波長(zhǎng)光照射下發(fā)生黃綠色熒光，在稀溶液中，熒光強(qiáng)度與核黃素濃度成正比。 （ 3）氧化 ? 將 5mL試樣凈化液分別加入 A、 B兩個(gè)反應(yīng)瓶。 ? 用 2mol/L乙酸鈉調(diào)其 pH值為 （以 %溴甲酚綠為指示劑） ? 按每克試樣加入 20mg淀粉酶的比例加入淀粉酶。 ? 維生素 Bl、 B2 鹽酸水解 酶解 提取 純化 ? 維生素 C通常采用草酸、草酸 — 醋酸、偏磷酸 — 醋酸溶液直接提取。 ? 也可用硅藻土及皂土柱層析，除去甾醇、 VA、胡蘿卜素的干擾。是 AOAC選定的正式方法。 ? 在植物體內(nèi)，胡蘿卜素經(jīng)常與葉綠素、葉黃素等共存，在提取 β一胡蘿卜素時(shí)，必須將胡蘿卜素與其它色素分開(kāi)。 ? 三氯化銻腐蝕性強(qiáng)，不能沾在手上，三氯化銻遇水生成白色沉淀．因此用過(guò)的儀器要先用稀鹽酸浸泡后再清洗。 ? 洗滌時(shí)，最初水洗輕搖，逐次振搖強(qiáng)度可增加。將乙醇液移入一小塑料離心管中，離心 5min（ 5000rpm)。 （ 2）提取 ? 將皂化后的樣品移入分液漏斗中，用 50mL水分 2－ 3次洗皂化瓶，洗液并入分液漏斗中。 ? 最小檢出量分別為 VA： ； αE： ； γE：； δE： 。 脂溶性維生素具有以下理化性質(zhì)： 溶解性：不溶于水，易溶于脂肪、乙醇、丙酮、氯仿、乙醚、苯等有機(jī)溶劑。其種類很多，目前已確認(rèn)的有 30余種，其中被認(rèn)為對(duì)維持人體健康和促進(jìn)發(fā)育至關(guān)重要的有 20余種。 水溶性維生素：能溶于水，包括 B族、 C，其共同特點(diǎn)是一般只存在于植物性食品中，滿足組織需要后都能從機(jī)體排出，需要每天供給。 一、維生素 A的測(cè)定 維生素 A存在于動(dòng)物性脂肪中，主要來(lái)源于肝臟、魚(yú)干油、蛋類、乳類等動(dòng)物性食品中。加 10mL(1+1)氫氧化鉀，混勻。 （ 4）濃縮 ? 將乙醚提取液經(jīng)過(guò)無(wú)水硫酸鈉（約 5g）濾入與球形蒸發(fā)瓶?jī)?nèi)，用約 10mL乙醚沖洗分液漏斗及無(wú)水硫酸鈉 3次，入蒸發(fā)瓶?jī)?nèi)，并將其接至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上，于55176。 ? 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：標(biāo)準(zhǔn)和內(nèi)標(biāo)物進(jìn)行色譜分析，以維生素 A峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積之比為縱坐標(biāo)，維生素 A濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 ? 適用范圍及特點(diǎn)：本法適用于維生素 A含量較高的各種樣品 (高于 5— 10 μ g ／ g )，對(duì)低含量樣品，因受其他脂溶性物質(zhì)的干擾．不易比色測(cè)定： ?主要缺點(diǎn)：生成的藍(lán)色絡(luò)合物的穩(wěn)定性差。 ? β— 胡蘿卜素的結(jié)構(gòu)如下： ? 胡蘿卜素對(duì)熱及酸、堿比較穩(wěn)定，但紫外線和空氣中的氧可促進(jìn)其氧化破壞。以 D3為最重要。 ? 試樣經(jīng)皂化后，用苯提取不皂化物，蒸餾除苯，先采用反相 C18柱分取維生素 D，除去大部分雜質(zhì)。在酸性介質(zhì)中很穩(wěn)定，既使加熱也不破壞；但在堿性介質(zhì)中不穩(wěn)定，易于分解，特別在堿性條件下加熱，可大部分或全部破壞。在給定的條件下，以及沒(méi)有其他物質(zhì)干擾時(shí)，此熒光強(qiáng)度與硫色素量成正比，即與溶液中硫胺素量成正比。如此 重復(fù)三次。 二、維生素 B2的測(cè)定 ? 維生素 B2即核黃素，在食品中以游離形式或磷酸酯等結(jié)合形式存在。水解液冷卻后，滴加 1mol/L氫氧化鈉，取少許水解液，用 %溴甲酚綠檢驗(yàn)呈草綠（ pH為 ） （ 2）酶解 : ? 含有淀粉的水解液：加入 3ml 10%淀粉酶溶液 ,于 3740℃ 保溫 16h。滴加 3%雙氧水溶液數(shù)滴，直到高錳酸鉀顏色褪掉。進(jìn)一步水解則生成 2， 3 二酮古樂(lè)糖酸，失去生理作用。在提取過(guò)程中，可加入EDTA等螯合物。
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