基因工程載體噬菌體載體-免費閱讀
【正文】 重組的柯斯質(zhì)?？上笫删w λ 一樣感染大腸桿菌，并在細(xì)菌細(xì)胞中復(fù)制。 柯斯質(zhì)粒載體 cosmid載體 ：也稱粘粒、柯斯載體。 T vector的克隆過程 —— 簡便！ T vector PCR product T4 DNA ligase T T四、柯斯質(zhì)粒載體 柯斯質(zhì)粒 (cosmid) 一種人工構(gòu)建的克隆載體，包含了 λ噬菌體的 cos基因。 ③ 兩種復(fù)制形式 ① 分子量小 噬菌粒載體的特點 既具有質(zhì)粒的復(fù)制起點，又具有噬菌體的復(fù)制起點 。 ? 可以定向地克隆 DNA片段 ， 克隆在 M13 RF DNA分子上的雙鏈 DNA片段 ， 到了子代噬菌體便成了單鏈的形式 。 M13單鏈DNA噬菌體的生命周期 RF DNA Phage M13 replication in the host cell: + RNA pol DNA polIII 177。 M13噬菌體載體 M13是一種含單鍵（ +） DNA（ ssDNA）的絲狀大腸桿菌噬菌體，其基因組大小為 。 用途： cDNA文庫。這是因為以感染方式導(dǎo)入細(xì)胞的頻率可達(dá)106~108/μgDNA ，而以轉(zhuǎn)染（ translation）的方式導(dǎo)入的頻率僅為 103~105/ μgDNA 。 溶源性生長 (lysogenic pathway) 噬菌體感染細(xì)菌后 ， 可將自身 DNA整合到細(xì)菌的染色體中去 ， 與之一起復(fù)制 ， 并遺傳給子代細(xì)胞 ， 宿主細(xì)胞不被裂解 。 整合了一套完整的噬菌體基因組的細(xì)菌被稱為溶源性細(xì)菌。在溶源性細(xì)菌內(nèi)存在的整合或非整合的噬菌體 DNA被稱為原噬菌體。 ?噬菌體 A WB DEF Z J att xis N cl cro O P Q SR 結(jié)構(gòu)區(qū) 重組區(qū) 調(diào)控區(qū) 裂解區(qū) cos位點 cos 位點 A R A R EcoRI 目的基因 插入型 置換型 A W B C D E F Z U V G H M L K I J b2 cI cro cII O P Q S R att int xis gam red cIII N COS COS 頭部基因 尾部基因 功能不明區(qū) 溶源化 重組 早期控制 阻遏 DNA合成 溶菌 生長非必須區(qū)段 cI基因：溶源過程控制基因。 λ 噬菌體的包裝限制為野生噬菌體 DNA（約 kb）的 75%~105%。 。這類載體主要用來獲得大量的單鏈ＤＮＡ片段，這種單鏈ＤＮＡ片段在遺傳學(xué)研究中主要用來測定ＤＮＡ序列（ sanger雙脫氧法）、基因的定點突變研究、異源雙鏈 DNA的分析等。 RF Nicked by gene 2 protein + ssRolling circle replication, then cut and ligate Coated with gene 5 protein Gene 5 protein is replaced by gene 8 protein ect. Linear M13 phagereleased from the cell. （二） M13載體的構(gòu)建 （ 1）克隆區(qū)域的選定 ① 基因間隔區(qū)（ intergenic region, IG區(qū)） J. Messing證明， IG區(qū)存在M13的復(fù)制起點，但可以插入外源 DNA而不影響 M13噬菌體的活力。 所以如果要同時分離ＤＮＡ分子中的雙鏈 ， 則需要兩種獨立的克隆 。 既能在大腸桿菌中以質(zhì)粒的形式雙鏈復(fù)制，又能在噬菌體內(nèi)進行單鏈復(fù)制?？滤官|(zhì)粒能被包裝到 λ噬菌體粒子中，感染大腸桿菌；它攜帶入宿主細(xì)菌的 DNA片段（超過 45kb）要比質(zhì)粒載體攜帶的要大 （一）粘粒 (cosmid) 組成： 2. 抗性基因； 1. 質(zhì)粒復(fù)制的起始位點 (ORI)； 3.
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