23分解纖維素的微生物的分離-免費閱讀
【正文】 一組用一定劑量的誘變劑處理，另一組丌處理作為對照 纖維素 把誘變組的大量菌株接種到多個含有纖維素的固基上，同時接種對照組（未處理）的菌株，把它們置于相同的適宜條件下培養(yǎng) 一段時間后，取培養(yǎng)基用剛果紅染色， 觀察記錄菌落周圍透明圈的大小情況 （ 2）預期實驗結(jié)果及結(jié)論： ①誘變組中菌落周圍的透明圈比對照組 ，說明 。 獲得圖 A效果的接種方法是 ，獲得圖 B效果的接種方法是 。 （ 3）用稀釋涂布平板法統(tǒng)計菌落數(shù)目時，最好選擇菌落數(shù)在 間的平板進行計數(shù)。某同學欲從污染的土壤中篩選出高效降解原油的菌株。 (2)涂布平板 ： (1)制備 鑒別培養(yǎng)基 : 5 . 挑取 產(chǎn)生明顯的透明圈的 菌落（ 即為分解纖維素的菌落） → 純化培養(yǎng) 。 液體培養(yǎng)基 選擇 培養(yǎng)基 對照實驗 ① 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 ② 碳源： 纖維素粉 → 葡萄糖 (3)操作： 將土樣加入裝有 30ml選擇培養(yǎng)基 的錐形瓶中，將錐形瓶固定在搖床上，在一定 溫度 下 震蕩培養(yǎng) 1～ 2天，直至培養(yǎng)液 變渾濁 。可用 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 與之對照；或者將纖維素粉 改為 葡萄糖 。 (2)原因 : 二、實 驗 設 計 取樣的 環(huán)境 是怎樣的，作出這種選擇的 理由 是什么？ 纖維素分解菌大多分布在 富含纖維素 的環(huán)境中。 在 倒平板 時就加入 剛果紅 。 不同菌落的 透明圈大小不同可以說明什么問題？ （二）纖維素分解菌的 篩選 四種纖維素分解菌在剛果紅培養(yǎng)基上形成的透明圈 透明圈的應用： 篩選 具有某種特定功能（如分泌某種酶） 的微生物（ 目的菌 ） . 在 長出菌落 的 培養(yǎng)基 上，覆蓋質(zhì)量濃度為 1mg/mL的 剛果紅 （簡稱 CR）溶液， 10～ 15min后，倒去CR溶液 ，加入物質(zhì)的量濃度為1mol/L的 NaCl溶液 ， 15min后倒掉 NaCl溶液，此時，產(chǎn)生 纖維素酶的菌落 周圍將出現(xiàn) 透明圈 。 ③ 各加入 ，物質(zhì)的量濃度為－醋酸鈉緩沖液11ml和 10ml。 植物每年產(chǎn)生的 纖維素 超過 70億噸，其中 40%60%能被土壤中 某些微生物分解利用 ，這是因為它們能夠產(chǎn)生 纖維素酶 。（ 重、難點 ） 纖維素 ，一種由 葡萄糖 首尾相連而成的 高分子 化合物，是地球上含量最豐富的 多糖 類物質(zhì)。 纖維素酶 是一種 復合酶 ，一般認為它至少包括三種組分，即 C1酶 (外切酶 )、 CX酶 (內(nèi)切酶 )和葡萄糖苷酶 ，前兩種酶使 纖維素 分解成 纖維二糖 ，第三種酶將 纖維二糖 分解成 葡萄糖 。 剛果紅染色法 （二）纖維素分解菌的 篩選 原理： 方法： 即： 可根據(jù)是否 產(chǎn)生透明圈 來 篩選 纖維素分解菌 。 方法 2： 配制質(zhì)量濃度為 10mg/mL的剛果紅 （ CR）溶液， 滅菌 后，按照每 200mL培養(yǎng)基加入 1mL的比例加入 CR溶液 ，混勻后 倒平板 。 ，形成明顯的透明圈。 (1)目的： 思考：用什么方法選擇？ 纖 維素分解菌的 選擇 培養(yǎng)基 組分 含量 /g 提供的主要營養(yǎng) 纖維素粉 5 N
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