實驗二-聚合酶鏈反應技術、酶切鑒定-免費閱讀
【正文】 （3）電泳：一般電壓為515V/cm。因此該凝膠適合于免疫復合物、核酸與核蛋白的分離、鑒定及純化。酶切后除了目的DNA條帶外，還有其它條帶。4．電泳結束后紫外燈下觀察結果。限制酶BsmAI識別序列如下：539。⑨每次PCR操作都應設陽性及陰性對照：陽性對照使用能出現擴增條帶的最低量的標準病原體DNA，陰性對照不加模板或加其它來源的DNA，試劑加樣操作取量同待測標本。⑤樣品制備應按無菌操作原則進行，避免樣品間相互污染。4．非特異性PCR擴增常見的造成非特異性PCR擴增的原因及相應預防措施如下：引物特異性不高或用量過多；Taq DNA聚合酶質量不好或者用量偏高；Mg2+濃度過高；退火溫度過低，退火以及延伸時間過長；循環(huán)次數過多。注意事項：1．用PCR擴增目的基因，一般多采用商品試劑盒。PCR由變性－退火－延伸三個基本反應步驟構成。3．掌握PCR基因擴增技術的具體操作過程。PCR反應體系：反應體系各成分名稱反應體系各成分濃度各成分體積（181。為了監(jiān)控PCR實驗的污染情況，應該同時設立陰性對照，重復試驗，甚至對PCR產物進行測序分析，以鑒定擴增片段的正確性。②耐高壓的試劑及器材應高壓滅菌，但酶、引物、dNTP、加樣器等不能高壓滅菌，以免試劑失活或器材損壞。其原理是：在PCR反應系統中以 dUTP取代dTTP，使擴增產物中含有尿嘧啶。加熱滅活DNase I或核酸內切酶，再加入Taq DNA聚合酶和模板做PCR。（2）限制性核酸內切酶BsmAI（10u/ul）（3）100bp DNA ladder（4） % 瓊脂糖凝膠（5）TAE緩沖液操作步驟：1．在Eppendorf管中依次加入 μl 雙蒸水 1μl 10酶切緩沖液 5μl DNA BsmAI（10u/μl）2．將裝有上述反應液的Eppendorf管于37℃水浴保溫1小時。4．RFLP酶解片段在電泳分離的過程中，要根據片段的大小選擇不同的瓊脂糖濃度，如果產生的片段大部分小于500bp以下，可選用聚丙烯酰胺凝膠電泳進行分離。第三節(jié) 瓊脂糖凝膠電泳技術目的：掌握瓊脂糖凝膠
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