【正文】 申請者和具有高級專業(yè) 技術(shù)職務(wù)的項目組主要成員，當(dāng)年申請及承擔(dān)（含參加）在研的面上項目數(shù)合計 不得超過兩項 。 創(chuàng) 新 點(diǎn)： ① 形態(tài)學(xué)證實在腦下垂體中 確有 神經(jīng)纖維 存在 ② 進(jìn)一步實驗證實 是 肽能神經(jīng) 研究目標(biāo)： 通過各種形態(tài)學(xué)研究充分證明在腦下垂體中 確 有 肽能神經(jīng) 支配 預(yù)期研究結(jié)果： 提出腦下垂體 肽能神經(jīng)和體液雙重調(diào)節(jié) 假說，對原有理論提出挑戰(zhàn)。通過分析這些基因的結(jié)構(gòu)、研究它們的功能，揭示老年性白內(nèi)障晶狀體上皮細(xì)胞變化的分子生物學(xué)機(jī)制，為防治白內(nèi)障提供新的思路。 （ 2）建立差異 cDNA文庫： 從 50例白內(nèi)障手術(shù)患者的前囊膜上取下的晶狀體上皮細(xì)胞作為實驗組，從 25例正常晶狀體前囊膜上取下的晶狀體上皮細(xì)胞作為對照組，利用改良的消減雜交技術(shù) [19， 20]，獲得差異表達(dá)的 cDNA，并建立文庫。 撰寫要求： 以研究項目的需求為前提，盡量采用最適合的方法和手段，并將其操作步驟和關(guān)鍵環(huán)節(jié)體現(xiàn)在技術(shù)路線當(dāng)中。只要嚴(yán)格按操作程序進(jìn)行操作就可以避免發(fā)生差錯。 撰寫要求： 找出關(guān)鍵問題，提出解決辦法。 B、引文信息要全 ：文章題目、作者姓名、具體出處 （包括期刊名、年份、卷期、頁碼等）。同理，利用此方法也能快速、有效地獲得白內(nèi)障晶狀體上皮細(xì)胞與正常晶狀體上皮細(xì)胞間差異表達(dá)的基因，并克隆到全長 cDNA，為進(jìn)一步的結(jié)構(gòu)和功能研究打下基礎(chǔ)。 Kantorow等 [18]利用 RTPCRDD研究老年性白內(nèi)障與正常晶狀體上皮的基因差異性表達(dá)的初步結(jié)果是老年性白內(nèi)障有三個高表達(dá)基因和 12個低表達(dá)的基因。 Carper等 [13]利用 RTPCRDD(reverse transcriptionpolymerase chain reaction differential display)技術(shù)研究 H2O2誘導(dǎo)的晶體上皮細(xì)胞的基因差異性表達(dá)結(jié)果顯示 NADH脫氫酶 4亞基、細(xì)胞色素 b、谷氨酰胺轉(zhuǎn)移酶基因表達(dá)減少以及細(xì)胞因子的核蛋白、替代拼接因子 2 （ alternative splicing factor）、 β三羥基異丁酰輔酶A水解酶基因表達(dá)的增加。不僅如此， 晶狀體上皮細(xì)胞 還是晶狀體中 受外來刺激影響 較早的部位，已有研究證實老年性白內(nèi)障的晶狀體上皮細(xì)胞還發(fā)生 退行性變、細(xì)胞膜通透性增加、細(xì)胞內(nèi)酶活性改變、細(xì)胞數(shù)量減少、凋亡細(xì)胞增多等改變， 與單純老化的晶狀體之間存在差異 [35] 。 需特別注意的問題： 必須對所運(yùn)用的技術(shù)方法的原理、流程尤其是在實際運(yùn)用中可能出現(xiàn)的問題要十分清楚， 絕不能是一種簡單的移植。 D 、 對方法原理理解不夠： 對研究方法不熟悉，簡 單移植或夸大其作用，缺乏實際應(yīng)用的可行性。 所以，一些學(xué)者認(rèn)為通過 預(yù)防白內(nèi)障 發(fā)生或延緩其發(fā)展 的途徑征服白內(nèi)障 已成為一項全球性的社會和社會經(jīng)濟(jì) 問題 [2]。 二、立論依據(jù) 對基礎(chǔ)研究 ， 著重結(jié)合國際科學(xué)發(fā)展趨勢 ， 論述 科學(xué)意義 對應(yīng)用基礎(chǔ)研究 ， 著重結(jié)合學(xué)科前沿 ， 圍 繞國民經(jīng)濟(jì)和社會發(fā)展中的重要科技問題 論述 應(yīng)用前景 在立論依據(jù)的闡述中，對研究領(lǐng)域、研究方向、 具體科學(xué)問題的理解 研究領(lǐng)域： 白內(nèi)障的研究，包括發(fā)病機(jī)制、預(yù)防、診斷、 治療措施等研究 研究方向： 白內(nèi)障發(fā)病機(jī)制的研究，包括環(huán)境因素、致病 靶點(diǎn)、細(xì)胞水平、分子水平研究等 科學(xué)問題： 白內(nèi)障發(fā)病過程中的相關(guān)基因研究，包括致病 基因篩選、功能研究、調(diào)控機(jī)制、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等 在研究領(lǐng)域?qū)用? 從研究方向展開 圍繞某一具體科學(xué)問題 （本項目研究目標(biāo)） 進(jìn)行歸納分析 提出研究 設(shè)想 從研究領(lǐng)域切入 研究意義 項目的研究意義 存在問題： 對科學(xué)意義的闡述不足或夸大 撰寫方法： 從領(lǐng)域入手，提出主要問題，引出熱點(diǎn)研究方向。 作用： 畫龍點(diǎn)睛 效果： 引發(fā)評議專家的興趣，使其產(chǎn)生探個究竟的好奇心 —— “ 他到底是怎么做的 ？ ” 采用改良的消減雜交技術(shù) 建立老年性白內(nèi)障晶狀體上皮細(xì)胞差異表達(dá)基因文庫并制備基因芯片，利用此芯片篩選出白內(nèi)障相關(guān)基因。 迄今為止 , 治療白內(nèi)障唯一有效的 方法是通過手術(shù)摘除混濁的晶狀體并植入人工晶狀體。 國內(nèi)外現(xiàn)狀分析（與綜述的區(qū)別） 存在問題： A、低水平重復(fù)： 不了解最新進(jìn)展，對國內(nèi)外現(xiàn) 狀缺乏真正了解，提出的問題別人已解決。 D、對擬采用的技術(shù)方法進(jìn)行介紹和分析。 就致病的環(huán)境因素講， 氧化因子、紫外線輻射、晶狀體周圍環(huán)境中離子濃度改變及一些生長因子、細(xì)胞因子的改變均與老年性白內(nèi)障的發(fā)生有關(guān)。晶狀體的老化是多種因素相互作用的結(jié)果， 包括基因的和非基因的隨機(jī)變化的不斷積累，也有程序性的、非隨機(jī)性的組織特異性 多種基因表達(dá)的改變。 雖然體外實驗和白內(nèi)障轉(zhuǎn)基因小鼠都提示我們一些基因的變化與白內(nèi)障有關(guān)，但是，這些變化的基因是否與老年性白內(nèi)障形成有關(guān)，目前尚缺乏進(jìn)一步的報告。 經(jīng)過改進(jìn)后的抑制性消減雜交 （ suppression subtractive hybridization ,SSH是 Diatchenko等 1996年建立的方法） …… 簡化了實驗操作，但仍然問題很多。 綜上所述，分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展為研究白內(nèi)障發(fā)生過程中的功能基因及特異調(diào)控基因提供了有利武器。 （ 2）研究白內(nèi)障相關(guān)基因的結(jié)構(gòu) ： …… （ 3）研究白內(nèi)障相關(guān)基因在晶狀體上皮細(xì)胞變化中的作用 ： …… 觀察指標(biāo)如下：