【正文】 5. 其他方法： 如超聲免疫法等，該法是在浸泡法基礎(chǔ)上外加超聲作用而實(shí)施的接種方法，目前尚在探索中。 免疫： 免疫學(xué)原理的應(yīng)用 4. 亞單位疫苗： 病原微生物中能使機(jī)體產(chǎn)生免疫保護(hù)力的成分只占病原體小部分，將這些 成分分離 出來制成的疫苗為亞單位疫苗。該法只能用于病體已產(chǎn)生抗體的診斷。這種方法兼具有發(fā)光分析的高靈敏性和抗原抗體反應(yīng)的高度特異性。 (3) 用層析等方法將 Ag*Ab和 AgAb復(fù)合物 (bind, B)與游離 Ag*和 Ag (free, F)分離，測(cè)定 B和 F的放射活性。 6. 常用方法： 目前應(yīng)用最多的為 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) （ enzyme linked immusorbent assay, ELISA) ：是利用抗原或抗體能非特異性吸附于聚苯乙烯等固相載體表面的特性，使抗原 抗體反應(yīng)在固相載體表面進(jìn)行的一種免疫酶技術(shù)。 (1) 過程： +待測(cè)抗原 熒光素 +抗體 ? 熒光抗體 (一段時(shí)間后沖洗 ) 熒光鏡檢測(cè)結(jié)果： (2) 結(jié)果： 陽性 — 可見帶熒光的抗原抗體復(fù)合物； 陰性 — 無熒光 (因?yàn)閹晒獾目贵w不能與抗原結(jié)合，被沖洗掉 ) (3) 用途： 用以檢測(cè)病毒感染細(xì)胞、細(xì)菌和沉積于組織中的免疫復(fù)合物等。 免疫應(yīng)用： 免疫學(xué)方法 （三）補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn) 1. 定義： 有補(bǔ)體參與，以綿羊紅細(xì)胞和溶血素作指示系統(tǒng)的抗原抗體反應(yīng) 2. 組成： 有 2個(gè)系統(tǒng)共 5種成分 1) 檢測(cè)系統(tǒng)： 包括已知抗原 (或抗體 )和待測(cè)抗體 (或抗原 ) 2) 指示系統(tǒng)： 包括綿羊紅細(xì)胞和溶血素 (綿羊紅細(xì)胞的特異性抗體 ) 3) 補(bǔ)體： 取自豚鼠的新鮮血清 3. 補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)的基本原理 1) 補(bǔ)體可與任何抗原抗體復(fù)合物相結(jié)合； 2) 指示系統(tǒng)遇補(bǔ)體后就出現(xiàn)明顯的溶血反應(yīng) 免疫應(yīng)用： 免疫學(xué)方法 4. 操作過程和結(jié)果 1) 陽性反應(yīng) ： + 補(bǔ)體 抗原 (體 )+待測(cè)抗體 (原 ) ?抗原抗體復(fù)合物 抗原抗體和補(bǔ)體復(fù)合物 + 指示系統(tǒng) (綿羊紅細(xì)胞和溶血素復(fù)合物 ) 結(jié)果：（因此時(shí)無游離的補(bǔ)體與指示系統(tǒng)結(jié)合） 不發(fā)生溶血 2) 陰性反應(yīng) ： + 補(bǔ)體 抗原 (體 )+待測(cè)抗體 (原 ) ?抗原 +抗體 抗原 +抗體 +補(bǔ)體 (游離 ) + 指示系統(tǒng) (綿羊紅細(xì)胞和溶血素復(fù)合物 ) 發(fā)生溶血 綿羊紅細(xì)胞、溶血素及補(bǔ)體復(fù)合物 3）作用： 用于檢測(cè)血清中抗體的存在與否？ 免疫應(yīng)用： 免疫學(xué)方法 （四） 中和反應(yīng) 定義： 特異性抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后，能抑制抗原的多種生物學(xué)活性（ 如：毒性、酶活性和病毒感染性等 ）的反應(yīng)。若反應(yīng)中有兩種或兩種以上抗原抗體系統(tǒng)，在瓊脂中即可出現(xiàn)兩條或兩條以上的沉淀線。 免疫應(yīng)用： 免疫學(xué)方法 (2) 間接凝集反應(yīng) (indirect or passive agglutination) ： 將可溶性抗原先吸附于一種與免疫無關(guān)的載體顆粒表面，再與相應(yīng)抗體作用，在合適電解質(zhì)存在時(shí)，出現(xiàn)載體顆粒被動(dòng)凝集現(xiàn)象。 可逆性是 免疫吸附層析法 提取免疫純抗原或抗體的理論基礎(chǔ)。 (3) 是少數(shù)在消化道中不被消化的 Pr之一； (4) 嬰兒出生 46個(gè)月后才能合成，但可從母乳中獲得 SIgA (5) SIgA主要分布于呼吸道、消化道、泌尿生殖道粘膜表面以及唾液、淚液、初乳和與粘膜相關(guān)的分泌液中，是局部粘膜防御感染的重要因素； (6) 血清型 IgA具有中和毒素、調(diào)理吞噬的作用。 (2) 不少自身抗體和引起 II、 III型變態(tài)反應(yīng)的抗體也屬 IgG。 b. 兔： IgG, IgA, IgM。 2. 作為抗體必須具備的條件： 1) 只有脊椎動(dòng)物的漿細(xì)胞才能產(chǎn)生； 2) 必須有抗原刺激； 3) 能與相應(yīng)抗原產(chǎn)生特異性結(jié)合； 4) 其化學(xué)本質(zhì)是一種具免疫功能的球蛋白。 (2) 膜表面免疫球蛋白 (Surface membrane immunoglobulin, SmIg)：B細(xì)胞膜上可作為 抗原識(shí)別受體 的免疫球蛋白。 C. 抗原的其它分類方法： 如依性能分完全抗原和半抗原，依組分分蛋白質(zhì)抗原、脂蛋白抗原、糖蛋白抗原、多糖抗原和核蛋白抗原等，依獲得方式分天然、人工和合成抗原等 。其中： 類屬抗原： 存在于同一種屬或近緣種屬中的共同抗原稱 類屬抗原 ； 異嗜性抗原： 存在于不同種屬生物間的共同抗原稱 異嗜性抗原 。 1) 抗原決定簇（ antigenic determinant）： 指位于抗原分子表面、決定抗原特異性的特定化學(xué)基團(tuán)，它是決定免疫應(yīng)答和免疫反應(yīng)呈現(xiàn)高度特異性的物質(zhì)基礎(chǔ)。 具有異物性的物質(zhì)包括以下三類： a. 異種物質(zhì)：如細(xì)菌、病毒、異種血清、植物蛋白等； b. 同種異體物質(zhì)：如人類紅細(xì)胞表面血型抗原（ A、 B、 O、 Rh）等； c. 改變和隱蔽的自身物質(zhì)：主要包括在外傷、感染、輻射或藥物作用下，組織結(jié)構(gòu)發(fā)生改變的“自身”物質(zhì)和釋放入血的自身抗原，如甲狀腺蛋白，等。 免疫類型： 特異性免疫 2. 抗原的特性 1) 特異性： 具有與相應(yīng)抗體發(fā)生特異性反應(yīng)的能力； 2) 異物性： 正常情況下，能引起機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的抗原都是異種或 異體物質(zhì)，機(jī)體本身的物質(zhì)或細(xì)胞不能刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答；并且， 親緣關(guān)系越遠(yuǎn)、組織結(jié)構(gòu)間差異越大，抗原性越強(qiáng)。 b. 免疫反應(yīng)性： 指抗原分子能與相應(yīng)的免疫應(yīng)答產(chǎn)物在體外或體內(nèi)發(fā)生特異性結(jié)合產(chǎn)生免疫反應(yīng)的性能。 ： 通過激活巨噬細(xì)胞 ,產(chǎn)生呼吸爆發(fā) ,釋放氧自由基，通過氧自由基攻擊 脂質(zhì)膜，寄生蟲體被破壞。 作用： 與哺乳動(dòng)物 NK細(xì)胞類似，能夠殺傷病毒感染的 靶細(xì)胞，從而具有抗感染作用 免疫： 非特異性免疫 4. 非特異性體液因子 1) 補(bǔ)體： A. 來源與成分： 存在于血清中，由多種非特異性血清蛋白 (肝細(xì)胞、單核細(xì)胞 產(chǎn)生 )組成，它對(duì)熱敏 感， 45℃ 20min失活 B. 作用： a. 在抗原抗體反應(yīng)中通過補(bǔ)體第二激活通路（ 經(jīng)典 途徑 ）補(bǔ)充抗體作用（ 增強(qiáng)吞噬 ）； b. 激活后的補(bǔ)體 (形成 膜攻擊復(fù)合物 )能溶解細(xì)胞膜，殺 滅病原（ 溶解 ）； c. 激活后的補(bǔ)體可促進(jìn)吞噬細(xì)胞的吞噬和釋放組 胺等多種功能協(xié)助殺滅病原（有助于 炎癥應(yīng)答 ）， 。 細(xì)胞因子種類繁多，具有多種生物學(xué)活性，在免疫系統(tǒng)的調(diào)控中作用重大。 免疫： 水產(chǎn)動(dòng)物免疫的基本概念 3. NK細(xì)胞 它為發(fā)現(xiàn)較晚的一群淋巴細(xì)胞，最主要功能為非特異性殺傷靶細(xì)胞，對(duì)多種腫瘤細(xì)胞和病毒感染的細(xì)胞具較強(qiáng)殺傷作用。 1。 b. 與頭腎相比，脾在體液免疫反應(yīng)中處于相對(duì)次要的地位，其受抗原刺激后的增殖反應(yīng)以彌散的方式發(fā)生在整個(gè)器官上。 c. 紅髓：分布在白髓周圍，由 脾索 和 脾竇 組成。魚類的胸腺是 T細(xì)胞分化成熟為具免疫活性的 T細(xì)胞的場(chǎng)所， T細(xì)胞移至外周免疫器官后，可接受抗原刺激增殖分化產(chǎn)生免疫效能。 3) 免疫監(jiān)督： 機(jī)體免疫系統(tǒng)識(shí)別、清除體內(nèi)突變、畸形的細(xì)胞和病毒感染細(xì)胞的一種生理保護(hù)作用。 Chapter 3. 免疫學(xué)原理 與 應(yīng)用 2. 抗原與抗體的概念 1) 抗原： 凡是能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體和致敏淋巴細(xì)胞，并能與之結(jié)合引起特異性免疫反應(yīng)的物質(zhì)，稱為抗原。 2) 抗體： 機(jī)體免疫活性細(xì)胞受抗原刺激后，在體液中出現(xiàn)的由漿細(xì)胞產(chǎn)生的一類能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合的球蛋白。 正常： 識(shí)別和消除突變細(xì)胞 異常： （過低）易生惡性腫瘤、病毒持續(xù)感染。 魚類胸腺的結(jié)構(gòu)與功能隨著季節(jié)和年齡的變化而變化。脾索主要是 B細(xì)胞集居區(qū)，也有巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞。 c. 硬骨魚類受免疫接種后，其 脾、腎 和 肝 等器官的黑色素巨噬細(xì)胞增多，并與淋巴細(xì)胞和抗體生成細(xì)胞聚集在一起形成黑色素巨噬細(xì)胞中心，它的作用有：參與體液免疫和炎癥反應(yīng)；對(duì)異物進(jìn)行貯存、破壞和脫毒；記憶細(xì)胞原發(fā)中心；保護(hù)組織免受自由基損傷。 T 淋巴細(xì)胞： 它由一群功能不同的異質(zhì)性淋巴細(xì)胞組成，在胸腺內(nèi)分化成熟，為胸腺依賴性淋巴細(xì)胞 (Thymus dependent lymphocyte)的簡(jiǎn)稱。約占 5~10%。 免疫： 水產(chǎn)動(dòng)物免疫的基本概念 三、免疫的主要類型 1. 天然免疫 定義： 指機(jī)體先天具有的正常生理防御功能，對(duì)各種不同的病原微生物與異物都有排斥和屏障作用，也稱 非特異性免疫 。 免疫： 非特異性免疫 2) 干擾素： A. 定義： 是一類在同種細(xì)胞上具有抗病毒活性的蛋白質(zhì) . (其活性的發(fā)揮受細(xì)胞基因組的調(diào)節(jié)和控制，涉及 RNA和 DNA的合成 ) B. 來源與成分： 主要為由巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞分泌的蛋白質(zhì)； 機(jī)體產(chǎn)生干擾素的數(shù)量產(chǎn)生受溫度影響明顯。 免疫： 非特異性免疫 3) 溶菌酶 A. 來源與成分： 存在于粘液、血清和巨噬細(xì)胞中，是一種 水解酶（低分子堿性多肽） B. 作用： 可直接溶解殺死 G+菌等病原微生物 4) C反應(yīng)性蛋白 （ CRP） A. 來源與成分： 組織損傷、感染或炎癥所誘導(dǎo)的第一個(gè) 蛋白，需 Ca2+，如鰈、虹鱒、日本鰻等。 免疫原性和免疫反應(yīng)性統(tǒng)稱為 抗原性 。 3) 大分子膠體性： 抗原的分子量較大 (1萬 Da以上 )，分子量小于 4000 Da的物質(zhì)一般不具抗原性。 4) 免疫途徑： 相同抗原因免疫途徑不同，產(chǎn)生的免疫效果也不同 多數(shù)抗原須經(jīng)非消化道 (皮下、肌肉、體表或血液等 )途徑才能產(chǎn)生良好免疫效果； 有些抗原 (如須刺激腸粘膜相關(guān)淋巴組織的抗原 )，只有口服免疫才有良好效果。又稱 表位 （ epitope） 具體說，抗原決定簇就是與相應(yīng)淋巴細(xì)胞上的抗原受體結(jié)合的部位，并且，只有兩者結(jié)合才能激活淋巴細(xì)胞并引起免疫反應(yīng) 免疫： 特異性免疫 2) 抗原決定簇的種類與組成 a. 種類： 一個(gè)抗原表面可以有一種或多種不同的抗原決定簇； 功能性 (抗原 )決定簇： 指位于抗原分子表面易被相應(yīng)淋巴細(xì)胞識(shí)別、啟動(dòng)免疫應(yīng)答，同時(shí)能與相應(yīng)抗體或致敏 T細(xì)胞特異性結(jié)合發(fā)生免疫反應(yīng)的決定簇。 交叉反應(yīng)： 由共同抗原決定簇刺激機(jī)體產(chǎn)生的抗體可和兩種抗原結(jié)合發(fā)生反應(yīng)。 免疫： 特異性免疫 6. 細(xì)菌抗原 細(xì)菌是重要的病原體，其成分十分復(fù)雜，每種結(jié)構(gòu)及其代謝產(chǎn)物均有不同的抗原成分，每種細(xì)菌都是一個(gè)由多種抗原組成的復(fù)合體。 (3)抗體 (Antibody, Ab)： 機(jī)體免疫細(xì)胞被抗原激活后，由分化成熟的終末B細(xì)（漿細(xì)胞）所合成與分泌的一類能與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。 免疫： 特異性免疫 3. Ig的化學(xué)結(jié)構(gòu) H鏈 V區(qū) Ig 分子是由一個(gè)或多個(gè)單體組成； L鏈 V區(qū) 如： IgG、 IgD和 IgE 均為單體分子 L鏈 C區(qū) 每個(gè) Ig單體呈 Y形對(duì)稱結(jié)構(gòu)。 c. 其他： IgG, IgA, IgM, IgE。 (3) IgG與補(bǔ)體結(jié)合后可通過傳統(tǒng)途徑激活補(bǔ)體； (4) IgG能與巨噬