realtimepcr詳解--免費閱讀
【正文】 ? 為了確保引物和探針的特異性，最好將設(shè)計好的序列在，如果發(fā)現(xiàn)由非特異性互補區(qū)，建議重新設(shè)計引物探針。定量 —— 絕對標準曲線方法 ?標準品：純化的質(zhì)粒 dsDNA，體外轉(zhuǎn)錄的 RNA ?準確配制標準系列并且注意其穩(wěn)定性，最好分裝后保存于 80℃ ?熒光材料：雜交探針、水解探針或 SYBR Green I ?不可以使用 DNA作為標準品對 RNA進行定量 ?應(yīng)用于定量病毒荷載量等 定量 —— 相對 標準曲線方法 ?指在測定目的基因的同時測定某一內(nèi)對照基因，用一系列已知外參物做標準曲線，根據(jù)該標準曲線得到目的基因和內(nèi)對照基因的量，再將目的基因的同內(nèi)對照基因的比值作為定量的最后結(jié)果 ?標準品：含有目標基因的 DNA或 RNA ?一般選用看家基因校正 ?常選擇看家基因 GAPDH 、 β actin、 rRNA ?在假設(shè)樣品逆轉(zhuǎn)錄效率相同的前提下， 可以使用 DNA的標準曲線對 RNA進行定量 ?較常用的一種方法 比較 Ct法 ? 假設(shè)目的基因與看
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