【正文】 化基因擴增儀 (MGL96G/Y,杭州朗基科學(xué)儀器有限公司 )的載物合上 ,用 PCR儀控制熱循環(huán)溫度。JapanLabview)程序控制 )熒光照片。xu233。n)上液滴的熒光強度值 ,得到熒光強度隨反應(yīng)循環(huán)數(shù)增加的變化曲線。（ tǒnɡ芯片清洗及注意： 每次使用后 ,使用醫(yī)用脫脂棉蘸洗海刻搓洗芯片表面 ,再分別用去離子水及娃哈哈純凈水沖洗。C80176。實驗中經(jīng)清洗后的芯片不會產(chǎn)生 PCR污染 ,可反復(fù)使用。玻璃研磨過程中要帶 防護眼鏡 以保護眼睛。利用 (l236。此外 ,該系統(tǒng)可在試劑消耗、檢測通量及系統(tǒng)集成化微型化等方面進一步優(yōu)化改進 ,有望在大規(guī)模高通量分析領(lǐng)域發(fā)揮重要的作用。)納升級液滴陣列的自動化單細胞實時定量 RT由于這種細胞異質(zhì)性的存在 ,轉(zhuǎn)錄組研究需要在單細胞水平進行。 běi)永年銳洋色譜器件有限公司Tygon（聚乙烯） Plastics,Franceo微量注射器 (10Switzerland。LifeGibco,PBS（磷酸鹽緩沖液） LifeCalceinAMLife實驗芯片： 采用AutoCADmmx13mm的方形芯片。li232。（了解 (liǎojiě)）自動化液滴生成及操控系統(tǒng)的構(gòu)建：液滴生成及操控系統(tǒng)主要由液滴定量 量取 、液滴 儲存 及樣品儲存平臺等結(jié)構(gòu)構(gòu)成 ,并采用 um。nɡ)系統(tǒng)示意圖第三十 頁 ，共九十一 頁 。實時定量 RTPCR檢測系統(tǒng)的構(gòu)建： 采用兩只 藍色發(fā)光二極管 (LED,3W,Gree,深圳立諾科技有限公司 )作為熒光激發(fā)光源。Tokyo,USA（圖）第三十二 頁 ，共九十一 頁 。)定量 RTPCR檢測系統(tǒng)示意圖第三十三 頁 ，共九十一 頁 。實時定量 RTPCR焚光檢測系統(tǒng) (x236。RTPCR將細胞消化后 ,重懸于 1C水浴中染色 15采用血球計數(shù)板 (上海求精生化試剎儀器有限公司 )進行細胞計數(shù) ,并調(diào)整細胞懸液濃度。PCRC30s,60數(shù)據(jù)釆集處理：釆用自編的 Labview程序讀取各個循環(huán)焚光照片上液滴的焚光強度值 ,得到熒光(y237。c232。nɡ優(yōu)化條件：擾動振幅 uS/cm、掃描頻率范圍為 的條件下，大腸桿菌的測試范圍為 mL，檢出限為 CFUpi224。將所建立的方法應(yīng)用于某污水中細菌檢測，結(jié)果與國標(biāo)法基本一致。儀器與試劑： VersaSTAT3電導(dǎo)率儀(日本奧林巴斯公司 ) LB甘露醇 (AR，重慶川東化工 )):PBS)大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)合成樣本 : 技術(shù)在玻璃基片上沉積的電極，對電極間距 k50d2為 20um， Dmm2，增加響應(yīng)靈敏度的同時提高信號均勻性和重現(xiàn)性。陽膜制作的帶有微管道網(wǎng)絡(luò)的聚二甲基硅氧烷 (um，寬度為 um，微管道體積 將玻璃基片和蓋片對位粘合，即構(gòu)成復(fù)合式玻璃 PDMS微流控芯片電化學(xué)阻抗檢測芯片，彭金蘭 (jīn～ 1.6Hz，新制大腸桿菌標(biāo)本靜置 50下大腸桿菌標(biāo)本 (mL) min，測定不同擾動振幅(mV)因此選擇 (xuǎnz233。作為擾動振幅。)下細菌標(biāo)本阻抗檢測 /|Z|Z的關(guān)系曲線。102～ 104Hz定量 (d236。shuǐ)為分析樣本，進行采樣、計數(shù)、預(yù)處理及檢測。充滿管道，液差驅(qū)動大腸桿菌懸浮液進入微管道，大腸桿菌懸浮液進樣量約 uL/min。和 數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)采集并保存數(shù)據(jù)。可以完成單樣本檢測， 20血糖濃度如果超過正常水平 ,表示體內(nèi)糖的利用 (l236。本實驗將 葡萄糖氧化酶 直接 固定 在微流控芯片通道的 內(nèi)壁 上 ,使 酶反應(yīng)和電極反應(yīng) 過程都集中的微流控芯片通道中進行 ,實現(xiàn)反應(yīng)器的 集成化 ,并由于芯片表面較粗糙 ,可增加酶的擔(dān)載量 ,提高了該生物傳感器的靈敏度 。微量注射泵 (Bioanalytical石英毛細管 (河北永年 (yǒnɡ銀 /氯化銀參比電極 (上海辰華儀器有限公司 )。試劑：葡萄糖氧化酶 (GOD,xi224。戊二酸 (分析純 ,沈陽化學(xué)試劑廠 )。乙酸鈉 (分析純 ,沈陽市試劑四廠 )。氯化鈉 (分析純 ,天津市博迪化工有限公司 )。氯化鉀 (分析純 ,國藥集團試劑有限公司 )。原理：基于葡萄糖經(jīng)過固定有葡萄糖氧化酶的 酶反應(yīng)器 時產(chǎn)生 過氧化氫 ,過氧化氫在一定的正的工作電位下在工作電極表面被氧化 ,釋放出電子 ,產(chǎn)生 氧化電流 。d236。pi224。n)焊接后 ,作為電極 ,制成 微流控芯片檢測池 ,在微流控芯片的通道內(nèi)壁通過共價鍵合法固定 葡萄糖氧化酶 ,制成 酶微反應(yīng)器 。nj237。不同濃度的葡萄糖的響應(yīng) (xiǎngy236。)工作電位 :+.uL/min第五十九 頁 ，共九十一 頁 。ibiǎo)堿基對； nj236。 （了解）第六十一 頁 ，共九十一 頁 。、第一代測序方法：雙脫氧鏈終止法（ Sanger法）原理：由于 ddNTP（ 雙脫氧核苷三磷酸 ）與 dNTP（ 對硫磷 ）相比缺乏 3`OH，參與 DNA鏈不能形成下一個磷酸二脂鍵，因此，被用來中斷 DNA合成。Roche、第一代測序方法：熒光自動測序技術(shù)原理：基于 Sanger雙脫氧鏈終止法的原理，只是用四種不同的 熒光染料 (rǎnli224。、第二代測序方法： GS ngguāng)素氧化 (yǎnghu224。主要步驟：文庫 (w233。nǐ)圖第七十二 頁 ，共九十一 頁 。o)進行電泳，分析結(jié)果快速、準(zhǔn)確、靈敏度高且實現(xiàn)了自動化。這個過程可能產(chǎn)生誤差。將 DNA片段變成單鏈后通過接頭與芯片表面的引物堿基互補而使一端被固定在芯片上，另外一端隨機和附近的另外一個引物互補，也被固定住，形成 橋狀結(jié)構(gòu) 。用激光掃描反應(yīng)板表面，在讀取每條模板序列第一輪反應(yīng)所聚合上去的核苷酸種類后，將這些熒光集團 (j237。這樣統(tǒng)計每輪收集到的熒光信號結(jié)果，就可以得知每個模板 DNA片段的序列。nk249。u)：利用物理方法將待測樣品 DNA打碎，在單鏈DNA碎片兩端加上接頭 (jiē表面結(jié)合：Solexa的測序時利用微注射系統(tǒng)將已經(jīng) (yǐ第七十七 頁 ，共九十一 頁 。通過不斷循環(huán)，將會在Flow Cell的固相表面上獲得上萬條成簇分布的雙鏈待測片段。r)獲得待測片段的序列信息。 )： Heliscope單分子測序儀原理： 將基因組 DNA切割成隨機的小片段 DNA分子并且在每個片段末端加上 polyA（ 多聚腺嘌呤核糖核苷酸 ）尾巴。 洗脫未參與合成的 dNTP和 DNA聚合酶，檢測雜交位置的熒光信號化學(xué)試劑去熒光標(biāo)記重復(fù)合成、洗脫、成像、猝滅過程，完成測試。Scope的優(yōu)勢：單分子 (fēnzǐ)測序減少了試劑的使用，測序成本價格大大降低。SMRT法原理： SMRT芯片是一種帶有很多 ZMW(zeromode waveguides)孔的厚度為 100 nm的金屬片。在下一個 dNTP被添加到合成鏈之前，這個 dNTP的磷酸基團會被氟聚合物（fluoropolymer）切割并釋放，熒光分子離開熒光信號檢測區(qū)。ng)第八十五 頁 ，共九十一 頁 。由于 dNTP在熒光信號檢測區(qū)停留的時間（毫秒級）與它進入和離開的時間（微秒級） 相比 (xiānɡ bǐ)會很長，所以信號強度會很大。他們設(shè)計了一種以 α溶血素為材料制作的納米孔，在孔內(nèi)共價結(jié)合有分子接頭 環(huán)糊精 。而且納米孔單分子技術(shù)可直接讀取甲基化的胞嘧啶，而不像傳統(tǒng)方法那樣必須要用重亞硫酸鹽處理。（了解）第八十七 頁 ，共九十一 頁 。納米孔單分子測序的特點：準(zhǔn)確度高，納米孔單分子技術(shù)準(zhǔn)確率能達到 %，且一旦發(fā)現(xiàn)替換錯誤也能較容易 (r243。）另外由于每次只測定一個核苷酸因此該方法可以很容易地解決同聚物長度的測量問題。謝謝觀 看第九十 頁 ，共九十一 頁 。牛磺酸能 夠 使 細 胞聚集從而改善 檢測 靈敏度 ,將少量的牛磺酸添加到 懸 浮液中。