20xx年醫(yī)學(xué)專題—第七章-細(xì)胞融合與體細(xì)胞雜交61-預(yù)覽頁
【正文】 ：基因型相同的細(xì)胞融合成的融 合細(xì)胞稱為。,三 發(fā)展(fāzhǎn)歷史,自發(fā)融合現(xiàn)象(xi224。動物體內(nèi)的破骨細(xì)胞也是自發(fā)融合形成的多核 細(xì)胞。,第十三頁，共六十二頁。n)通道,——細(xì)胞橋,第十四頁，共六十二頁。)形成細(xì)胞橋 （4）胞質(zhì)滲透,（5）細(xì)胞核融合(r243。b232。 ch,第十六頁，共六十二頁。使植物細(xì)胞融合技 術(shù)得以建立。,4 分離(fēnl237。)離心，收集沉淀。FDA（二乙酸熒光素）能自由地穿 越細(xì)胞質(zhì)膜，在活細(xì)胞內(nèi)，F(xiàn)DA被酯酶裂解即發(fā)熒光（熒 光素），由于熒光素不能自由通過質(zhì)膜，因而可以在熒光 顯微鏡下通過具熒光的細(xì)胞的觀察確定細(xì)胞活性。ng)成為 嵌合細(xì)胞。但是這種有絲分裂只有當(dāng) 兩個核的DNA合成基本同步時才 能發(fā)生：兩個核同時進行有絲分 裂，形成一個紡錘體，全部染色 體都排列在一個赤道板上，結(jié)果 伴隨著細(xì)胞分裂就形成了單核的 子細(xì)胞，其細(xì)胞核中含有雙親細(xì) 胞的染色體。主要是由于 病毒會與宿主細(xì)胞膜直接融合，同時進入兩個細(xì)胞就會打破兩個 細(xì)胞膜的隔閡，引發(fā)細(xì)胞質(zhì)的交流，進而達到細(xì)胞融合的目的(m249。,仙臺病毒、皰疹病毒、牛痘病毒和副黏液病毒等。因此，目前已經(jīng)很少使用病毒誘導(dǎo)法進行細(xì)胞融合。)附著在 細(xì)胞膜上起搭橋作用，使細(xì)胞 聚集在一起。,（3）有絲分裂，細(xì)胞核融合， 形成雜種細(xì)胞。,細(xì)胞膜電荷平衡被打破(dǎ p242。udǎo)融合,1909年，凱斯特（Kuster）發(fā)現(xiàn)機械分離(fēnl237。,NaNO3的鈉離子可以中和原生質(zhì)體表面負(fù)電荷， 引起原生質(zhì)體聚集，促進細(xì)胞融合。zǐ)誘導(dǎo)融合,1973年，凱勒（Keller）和梅爾切斯（Melchers） 發(fā)現(xiàn)采用(cǎiy242。,（3）PEG誘導(dǎo)(y242。nɡ)的PEG平均分子量在,200－20,000之間，分子量1,000以下者為液體，1,000以 上者為固體。,第二十五頁，共六十二頁。zǐ)誘導(dǎo)融 合方法成為一種較常用的細(xì)胞融 合方法。,第二十六頁，共六十二頁。,第二十九頁，共六十二頁。lǐ)法,電融合誘導(dǎo)法（Electrofusion）：利用電場來誘導(dǎo)細(xì)胞彼此連接 成串，再施加(shījiā)瞬間強脈沖促使質(zhì)膜發(fā)生可逆性電擊穿，促進細(xì)胞融 合的技術(shù)。o ch233。n hua)細(xì)胞電融合,BLS細(xì)胞融合儀 （1）聚集：在直流電脈沖 的誘導(dǎo)下，極化產(chǎn)生偶極子 ，彼此靠近，定向排列成串 球狀。 （4）融合細(xì)胞：細(xì)胞核融 合。)薄荷親本原生質(zhì)體（59105） ，0.7M山梨醇。結(jié)合后產(chǎn)生的 熒光基團的吸收峰是358nm而散射峰是461nm，正好 UV（紫外光）的激發(fā)波長正好是356nm。,脈沖時間：3060S，每次增加10S，40S最佳。bāo)篩選,因融合的隨機性而成為細(xì)胞融合的關(guān)鍵(guānji224。,1篩選(shāixuǎn)的原因與必要性,細(xì)胞融合是一個隨機的物理過程，經(jīng)融合后細(xì)胞 將以多種形式出現(xiàn)，需要通過培養(yǎng)和篩選，除去 不需要的細(xì)胞，分離出需要的雜種(z225。ng)中，你能預(yù)見有哪些 形式的細(xì)胞嗎？ AB，AA，BB。,2雜種細(xì)胞(x236。親本原生質(zhì)體生長要求外源激素，而有的雜 種細(xì)胞由于雙親互補作用會產(chǎn)生內(nèi)激素，從而(c243。,細(xì)胞融合 例子3： 利用抗性標(biāo)記進行(j236。,第四十一頁，共六十二頁。jiāo)培育新品種,動物：單克隆抗體生產(chǎn)(shēngchǎn)（動物細(xì)胞生物制藥講授）,第四十二頁，共六十二頁。 jiāo y249。nt237。,第四十五頁，共六十二頁。,三 植物新品種培育(p233。n)討論,第四十七頁，共六十二頁。 z236。,第五十一頁，共六十二頁。,KM8P主要用于原生質(zhì)體培養(yǎng)(p233。,雜種植物(zh237。d236。ngh233。nlǐ)、方法、關(guān)鍵環(huán)節(jié),體細(xì)胞雜交育種：克服有性不親和性，實現(xiàn)遠(yuǎn)源(yuǎn yu225。dx237。ir243。n)不親和或獲得的遠(yuǎn)緣雜種表現(xiàn)(biǎoxi224?！?xì)胞橋。——薄荷的電誘導(dǎo)融合。
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