重組dna技術(shù)1-預(yù)覽頁
【正文】 形成粘性末端或平端 重組 DNA的操作 ? 限制性內(nèi)切酶 ? 已經(jīng)發(fā)現(xiàn)和鑒定了 200多種 ? EcoRI特異識別GAATTC及其互補堿基組成的雙鏈片段 ? 粘性末端 ? T4連接酶 基因體外重組 The formation of a rebinant DNA molecule 載體 載體是運送目的基因片段進入宿主細胞的工具 ， （ 1） 能夠 自我復(fù)制 ， 并帶動插入的外源基因一起復(fù)制 （ 2） 具有合適的 限制性酶切位點 （ 3） 具有合適的 篩選標記 （ 4） 細胞內(nèi) 拷貝數(shù)要多 （ 5） 載體的 分子量要小 （ 6） 細胞內(nèi) 穩(wěn)定性高 目前最常用的載體包括 細菌質(zhì)粒 、 l噬菌體 、 cosmid質(zhì)粒等 。 這一過程就是 遺傳轉(zhuǎn)化 。 轉(zhuǎn)化受體細胞和轉(zhuǎn)化子的篩選 宿主菌或受體細胞 ? 大腸桿菌 ? 酵母 ? 昆蟲細胞 ? 哺乳動物細胞 ? 感受態(tài)細胞（ petent cell） 受體細胞和重組基因的導(dǎo)入 （ 轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染 ） ? 將目的基因克隆到 大腸桿菌細胞 中的操作步驟： 1． 獲得目的基因和質(zhì)粒載體； 2． 形成重組質(zhì)粒； 3． 制備感受態(tài)細胞 ， 用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌細胞； 4． 培養(yǎng)大腸桿菌 ， 讓重組質(zhì)粒及外源目的基因形成大量拷貝； 5． 篩選含重組質(zhì)粒的大腸桿菌細胞 ， 進行檢查或鑒定 。 The Human Genome Project ? 1988年，美國國家衛(wèi)生院和能源部 迄今為止在生命科學(xué)領(lǐng)域最宏大的研究計劃 — 人類基因組計劃 ? 主要內(nèi)容是完成人體 23對染色體的全部基因的遺傳作圖和物理作圖，完成 23對染色體上 30億個堿基的序列測定 ? 以美國為主、包括英國、法國、日本和中國多國科學(xué)家參加的國際合作計劃 人類基因組計劃 基因組 ?細胞內(nèi)染色體的總和，基因組亦稱染色體組 國際合作計劃 ?美國，英國，法國，德國，日本共同參加人基因組的大規(guī)模測序 ?中國 1999年 7月正式承擔(dān)人基因組的1%的測序工作。 ? 1996年，科學(xué)家們完成酵母其他 15條染色體的堿基序列測定。 ? 科學(xué)家們對人類基因組的性質(zhì)和作用的認識在不斷地深化。 用限制性內(nèi)切酶識別并切開核酸序列特定位點，將外源基因插入到載體中，用重組載體轉(zhuǎn)化宿主細胞，外源基因?qū)㈦S宿主的繁殖而復(fù)制，這種過程稱為基因的克隆。 利用載體法或基因直接轉(zhuǎn)移等技術(shù)將外源目的基因轉(zhuǎn)入合適的宿主細胞中進行表達，獲得所需表達產(chǎn)物或所需性狀。 3． 在 pUC18中有一小段人為設(shè)計和插入的具有多種限制性酶切位點的序列 ， 即 多克隆位點 ? 細菌質(zhì)粒 pUC18 思考題 克隆載體包括哪些基本的結(jié)構(gòu)元 件 , 簡述 DNA克隆的過程 ?
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