《基因工程制下》ppt課件-預覽頁
【正文】 載體之間發(fā)生重組會形成二聚體、三聚體，甚至四聚體等所謂的質粒寡聚體，其穩(wěn)定性比單體差。 質粒不穩(wěn)定產(chǎn)生的原因： 3. 細胞中所含質粒載體的拷貝數(shù)： 拷貝數(shù)差別不大時，質粒載體相對地穩(wěn)定；拷貝數(shù)相差懸殊，則很容易造成一些細胞丟失質粒，并逐漸發(fā)展為優(yōu)勢群體。 高拷貝質粒菌中質?？截悢?shù)增加與產(chǎn)物增加往往不成正比，這可能是含高拷貝質粒菌中，蛋白合成的限速步驟是轉錄和翻譯，基因的大量復制加重了轉錄和翻譯的負擔，使得蛋白質合成速度變慢。 通過代謝工程，提高菌體攝氧能力，可減少乙酸的生成。 （ 1）前體供應不足時，會產(chǎn)生“嚴緊反應”，氨酰 tRNA不足，核糖體在密碼子上停留，產(chǎn)生調控物 ppGpp，使 RNA聚合酶在模板上移動產(chǎn)生停頓，mRNA和 rRNA減少，核糖體合成減少。 ： 將培養(yǎng)基用半透膜進行透析，去除其中對菌生長有抑制的物質。 玉米漿培養(yǎng)基 ： 玉米漿 %，牛肉膏 %，谷氨酸鈉 1%。 （ 2）溫度影響蛋白質的活性和包含體的形成。 ：一般在對數(shù)生長期或對數(shù)生長后期誘導表達，此時菌群數(shù)目倍增，對營養(yǎng)和氧需求激增，營養(yǎng)和氧成了菌群旺盛代謝的限制因素。 第九節(jié) 基因工程藥物的質量控制 一、 原材料的質量控制 ：確保編碼藥品的 DNA序列的正確性，重組微生物來自單一克隆，所用質粒純而穩(wěn)定，以保證產(chǎn)品質量的安全性和一致性。 四、 目標產(chǎn)品的質量控制 ：鑒別、純度、活性、安全性、一致性。 注意 ：堿水解會引起精氨酸、胱氨酸及部分賴氨酸被破壞 ；酸水解條件下，色氨酸、酪氨酸易被破壞 。使用這些方法可判斷重組蛋白是否為單體或多聚體。 （ 6）二硫鍵分析 ① 單向 SDSPAGE：存在鏈內二硫鍵的分子在非還原的 SDSPAGE 中沒有完全伸展 ,結構更緊密而較在還原的 SDSPAGE 中泳動快 。 2022年度的諾貝爾化學獎獲得者之一維特里希（ Kurt W252。這些變構體容易抗體的產(chǎn)生，需要嚴格控制。還有長期毒性實驗。 ④加保護劑保存：多數(shù)蛋白質在疏水環(huán)境下穩(wěn)定，可加入穩(wěn)定劑如糖類、脂肪類、蛋白質類、多元醇、有機溶劑；有些蛋白質在高離子強度下穩(wěn)定，可加入中性鹽；有些蛋白質易氧化，可加入一些還原劑。 （ 5）相對分子量測定：還原型 SDSPAGE法，與標準蛋白質 MARKER比較，與理論值誤差不得大于 10
醫(yī)療健康相關推薦
鄂ICP備17016276號-1