微生物限度檢驗方法驗證方案-預覽頁
【正文】 ： 稱取供試品10g置錐形瓶中，加稀釋劑至100ml，混勻后，作為供試液（1：10）?！綦x心沉淀集菌法：取一定量的供試液，3000轉/分離心20分鐘（供試液如有沉淀，先以500轉/分鐘離心5分鐘，取全部上清液再離心），棄去上清液，留底部集菌液約2ml，加稀釋液補至原量。采用平皿法，取試驗用的1ml菌液（約50～100cfu）分別注入平皿中，立即傾入培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個平皿，按平皿法測定其菌落數。至少要一張膜。試驗組的菌回收率＝試驗組的菌回收率—供試品對照組平均菌落數100%菌液組的平均菌落數. 稀釋劑對照組回收率計算試驗組的菌回收率＝稀釋劑對照組平均菌落數100%菌液組的平均菌落數計數方法驗證至少應進行3次獨立平行試驗，并分別計算各試驗菌每次試驗的回收率。. 控制菌檢驗方法驗證當建立藥品的微生物限度檢查時，應進行控制菌檢查方法的驗證，以確認所采用的方法適合于該藥品的的控制菌檢查方法測定。大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、乙型付傷寒沙門菌、銅綠假單胞菌的新鮮培養(yǎng)物至10ml營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，35～37℃培養(yǎng)18～24小時；%無菌氯化鈉溶液，采用10倍遞增稀釋法，稀釋至105~107，制成每1ml含菌數10～100cfu的菌懸液。 ◆大腸埃希菌 取相當于1g或1ml供試品的供試液至100ml膽鹽乳糖培養(yǎng)基中，陽性菌對照加入大腸埃希菌10～100cfu，陰性菌對照加入金黃色葡萄球菌10～100cfu，35～37℃培養(yǎng)18～24小時，取此培養(yǎng)物按《微生物限度檢查SOP》大腸埃希菌項下規(guī)定檢查。 ◆銅綠假單胞菌 取相當于1g或1ml供試品的供試液至100ml膽鹽乳糖培養(yǎng)基中，陽性菌對照加入銅綠假單胞菌10～100cfu，陰性菌對照加入大腸埃希菌10～100cfu，35～37℃培養(yǎng)18～24小時。. 培養(yǎng)基稀釋法 供試品有抑菌作用，放大培養(yǎng)基量，由1：100放大到1：300、1：500或1：1000，由于容器體積限制，一般放大到500ml或1000ml，本法適用于抑菌作用不強的樣品。至少應進行3次獨立平行試驗。，綜合整個驗證過程，得出驗證結論。
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