【正文】 ecific Th generation ? OVA 特異性和非特異性 Th表位 多肽免疫 C57BL/6小鼠以產(chǎn)生特異性和非特異性 Th細(xì)胞； ? mCTL transfer ? 記憶性 CTL轉(zhuǎn)輸已產(chǎn)生特異性和非特異性 Th的 C57BL/6 小鼠 ； ? tumor challenge ? 接種表達(dá) OVA抗原的腫瘤細(xì)胞 EG7； Generation of Ovalbuminspecific Memory CD8 T Cells. OT1 lymph nodes cells were transferred to RAG/ mice through tail vein injection, and mice were immunized with 50ug of SIINFEKL peptide in CFA 1 day later. At day 7 , 14 , 21, mice were sacrificed, and splenocytes or lymph nodes cells were isolated and analyzed. The percentage of CD44high, SIINFEKLspecific CD8 T cells was assessed by threecolor FACS staining with SIINFEKL MHC class I tetramer and antibodies to CD8 and CD44. Plots shown are gated on the SIINFEKL tetramer positive lymphocytes。 ? 通過同源重組產(chǎn)生目標(biāo)基因缺失或失活的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物可以確定被敲除的基因在體內(nèi)代謝過程中的作用，還可確定被敲除基因在分化、發(fā)育、生存等過程中的作用和必要性。 ? 抗原特異性四聚體能與樣品中的特異性 T細(xì)胞的 TCR結(jié)合，由于四聚體能同時(shí)結(jié)合一個(gè) T細(xì)胞表面的 4個(gè) TCR，親和力大大提高。 ? 將特異性抗體 (如抗 CD抗 CD抗 CD8等 )吸附在鐵顆粒 (磁珠 )上，加至細(xì)胞懸液中，具有相應(yīng)抗原的細(xì)胞與磁珠上的特異性抗體結(jié)合。這些小粒徑的金顆粒，經(jīng)銀顯影液處理后，金粒子還原銀離子生成銀顆粒而吸附在金顆粒周圍呈黑褐色，從而放大了金顆粒的顯色效果，又稱免疫金銀法。堿性條件下，金顆粒表面帶負(fù)電荷，與蛋白質(zhì)正電荷基團(tuán)結(jié)合。s syndrome 天皰瘡免疫熒光染色 放射免疫測(cè)定法 ? 用放射性同位素標(biāo)記抗原或抗體進(jìn)行的免疫測(cè)定。 免疫熒光技術(shù) ? 用熒光素標(biāo)記一抗或二抗，檢測(cè)特異性抗原或抗體的方法。 ? 將抗原 — 抗體反應(yīng)的高度特異性與酶對(duì)底物的高效催化作用有效地結(jié)合起來，通過酶分解底物產(chǎn)生有色物質(zhì) (也可作用于熒光底物，產(chǎn)生熒光 )，肉眼觀察顏色深淺或酶標(biāo)儀測(cè)定光密度值 (OD)，以反映抗原或抗體的含量。因此 SDSPAGE中， SDS多肽復(fù)合物的電泳遷移率只與其分子質(zhì)量有關(guān)，而不受所帶電荷及分子形態(tài)的影響。 ? 檢測(cè)前白蛋白、酸性蛋白酶、巨球蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、尿微量蛋白及 IgG、 IgM、 IgA及補(bǔ)體，藥物含量分析。 ? 檢測(cè)腫瘤標(biāo)記物 CAl9 CEA、 CAl2AFP、性激素、甲狀腺素 TT+、葉酸、HIV抗體、 HCG等微量可溶性抗原。 ? 酸堿度 ? 抗原抗體反應(yīng)的最適 pH在 6— 8之間， pH過高或過低，即過堿或過酸，均可影響抗原、抗體的理化性質(zhì)。免疫新技術(shù)在科研中的應(yīng)用 廈門大學(xué)醫(yī)學(xué)院 高豐光 抗原或抗體的檢測(cè) ? 抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn) ? 抗原抗體反應(yīng)的影響因素 ? 常用的抗原抗體反應(yīng) 抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn) ? 高度的特異性 ? 可逆性 ? 抗原抗體結(jié)合除了空間構(gòu)象互補(bǔ)外，主要以氫鍵、靜電引力、范德華力和疏水鍵等分子表面的化學(xué)基團(tuán)之間的非共價(jià)方式結(jié)合。 ? 溫度 ? 適當(dāng)?shù)臏囟瓤稍黾涌乖c抗體分子的碰撞機(jī)會(huì)，加速抗原抗體復(fù)合物的形成。 微粒捕獲酶免疫分析技術(shù) ? 將已知特異性抗體致敏的免疫微粒與生物素 — 親和素 — 酶放大系統(tǒng)相結(jié)合，最后酶作用于熒光底物，使之發(fā)熒光，通過檢測(cè)熒光強(qiáng)度判斷待測(cè)抗原的含量。 ? 提高了靈敏度，通過自動(dòng)化，可同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣品并進(jìn)行精確的定量分析。 免疫印跡法的基本步驟 ? 電泳分離蛋白抗原， SDS是一種陰離子去污劑，與蛋白質(zhì)牢固結(jié)合，十二烷基磺酸根帶負(fù)電荷，使樣品中各種蛋白質(zhì)與 SDS形成 SDS蛋白質(zhì)復(fù)合物，由于蛋白質(zhì)表面均帶有相同密度的負(fù)電荷，使分子構(gòu)型幾乎相同 (線性 )。 免疫標(biāo)記技術(shù) ?免疫酶測(cè)定法 ?免疫熒光技術(shù) ?放射免疫測(cè)定法 ?免疫膠體金技術(shù) 免疫酶測(cè)定法 ? 是一種用酶標(biāo)記一抗或二抗檢測(cè)特異性抗原或抗體的方法。 ? 一般選擇硝酸纖維素膜 (NC)或聚偏二氟乙烯 (PVDF)膜覆蓋微量反應(yīng)板作為固相 ， 在分泌相應(yīng)細(xì)胞因子的細(xì)胞所在局部呈現(xiàn)有色斑點(diǎn) ， 一個(gè)斑點(diǎn)表示一個(gè)分泌相應(yīng)細(xì)胞因子的細(xì)胞 ， 通過計(jì)數(shù)可推算出分泌某種細(xì)胞因子細(xì)胞的頻率 。 Immunofluorescent stain of immunoglobulin G (IgG) showing linear pattern in Goodpasture39。 免疫膠體金技術(shù) ? 氯金酸 (HAuCl+)在還原劑作用下，產(chǎn)生分散狀態(tài)的膠體金顆粒。 ? 不同還原劑作用于氯金酸，產(chǎn)生的膠體金粒徑大小不相同 (5—50nm)，小粒徑的膠體金由于穿透性好，電子密度高，常被用于免疫電鏡技術(shù)。 免疫細(xì)胞的檢測(cè) ? 免疫細(xì)胞的分離 ? 磁珠分離法 ? fluorescenceactivated cell sorter， FACS ? 免疫細(xì)胞功能的測(cè)定 ? T細(xì)胞 ? B細(xì)胞 磁珠分離法 ? 特異性分離所需淋巴細(xì)胞的方法。 fluorescenceactivated cell sorter， FACS T細(xì)胞鑒定及功能測(cè)定 ? 使用酶、免疫熒光標(biāo)記單抗進(jìn)行鑒定 ? 淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn) ? E花環(huán)形成試驗(yàn) ? 混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng) ? CTL介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗(yàn) 抗原肽 —MHC分子四聚體技術(shù) tetramer ? 用生物素化的抗原肽 — MHC分子復(fù)合物與熒光標(biāo)記的親合素結(jié)合，由于 1個(gè)熒光素標(biāo)記的親合素可結(jié)合 4個(gè)生物素分子，能使 4個(gè) MHC／抗原肽復(fù)合物形成一個(gè)復(fù)合體，將該復(fù)合體標(biāo)記熒光素后，即成抗原特異性四聚體。 B細(xì)胞的鑒定及功能測(cè)定 ? 檢測(cè) B細(xì)胞分化抗原 ? 測(cè)定 B細(xì)胞產(chǎn)生抗體的能力 ? 溶血空斑試驗(yàn) ? ELISPOT 細(xì)胞因子的檢測(cè) ? 生物活性檢測(cè) ? 細(xì)胞增生或增生抑制法 ? 細(xì)胞病變抑制法 ? 趨化作用測(cè)定法 ? 免疫學(xué)檢測(cè)法 ? 分子生物學(xué)技術(shù) 基因敲除技術(shù)和轉(zhuǎn)基因動(dòng)物 ? 應(yīng)用基因同源重組，將外源有功能基因 (基因組中原先不存在、或已失活的基因 )，轉(zhuǎn)入細(xì)胞與基因組中的同源序列進(jìn)行同源重組，插人到基因組中，在細(xì)胞內(nèi)獲得表達(dá)。 ? 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物可作為 “ 生物反應(yīng)器 ” 生產(chǎn)