【正文】 寄生于人或哺乳動(dòng)物的血管中，成熟雌雄蟲(chóng)合抱交配，在腸壁的小血管中產(chǎn)卵，雌蟲(chóng)每天產(chǎn)卵2000~3000個(gè)，這些蟲(chóng)卵在腸壁血管內(nèi)發(fā)育成熟。尾蚴經(jīng)皮膚感染變成成蟲(chóng)至交配產(chǎn)卵一般需要30天。尾蚴及童蟲(chóng)所致病變：血吸蟲(chóng)尾蚴鉆進(jìn)皮膚后數(shù)小時(shí)至12日，可引起尾蚴性皮炎。常見(jiàn)的有靜脈內(nèi)膜炎、靜脈周?chē)准八ㄈ造o脈炎。最主要的損傷器官是肝臟與腸管。新生蟲(chóng)卵在組織內(nèi)大約經(jīng)過(guò)11天發(fā)育成熟，成熟蟲(chóng)卵釋放可溶性抗原，引起免疫應(yīng)答，形成蟲(chóng)卵肉芽腫，根據(jù)血吸蟲(chóng)病的時(shí)間發(fā)展可將其分為急性蟲(chóng)卵結(jié)節(jié)和慢性蟲(chóng)卵結(jié)節(jié)。隨后蟲(chóng)卵周?chē)a(chǎn)生肉芽組織層，其中除淋巴細(xì)胞，大單核細(xì)胞外，常出現(xiàn)一定數(shù)量的漿細(xì)胞。臨床征象與感染的輕重、宿主的免疫狀態(tài)和病變的部位密切相關(guān)。發(fā)熱是該病重要的癥狀，發(fā)熱期間，多出現(xiàn)食欲減退、腹瀉、惡心等消化道疾病，此外還會(huì)出現(xiàn)一系列的 過(guò)敏性反應(yīng)。血吸蟲(chóng)病發(fā)展晚期，患者在肉芽腫炎癥的長(zhǎng)期作用下，膠原纖維合成增加，原先體內(nèi)的膠原纖維降解減少，促使肝纖維化形成和發(fā)展，最終導(dǎo)致肝硬化，其主要病理特征是形成門(mén)靜脈高壓。然而，2010年統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)全國(guó)有釘螺面積為37 hm2，比去年增加1 hm2；，基本上分布于安徽、湖南和湖北等地區(qū)（雷正龍等，2010)。植被破壞、水土流失導(dǎo)致長(zhǎng)江中下游時(shí)常發(fā)生洪澇災(zāi)害，血吸蟲(chóng)病的威脅一直普遍存在。在我國(guó)除了人類(lèi)，日本血吸蟲(chóng)病的終宿主還有將近40種，尤其以耕牛為主。（4）缺乏有效的組織機(jī)構(gòu)和金錢(qián)投入。(鄭江等,2003)。血吸蟲(chóng)疫苗研究已經(jīng)納入了WHO主要疾病防治研究規(guī)劃（Bergquist et al., 2005），在我國(guó)日本血吸蟲(chóng)病基因工程疫苗項(xiàng)目也已納入國(guó)家863高技術(shù)計(jì)劃范疇，1994年9月國(guó)家劃撥了“總理預(yù)備金”專(zhuān)款支持該項(xiàng)研究。 歷史上出現(xiàn)的銻制劑抗血吸蟲(chóng)藥物出現(xiàn)過(guò)酒石酸銻鉀（鈉）、沒(méi)食子酸銻鈉（銻273）、銻酚等。呋喃丙胺可用于治療各種血吸蟲(chóng)病，對(duì)血吸蟲(chóng)有一定殺滅作用，具有較強(qiáng)的滅童蟲(chóng)作用，對(duì)肝期童蟲(chóng)尤甚，該藥在六七十年代對(duì)于治療血吸蟲(chóng)病有過(guò)重要作用，治愈了大量病人。奧沙尼喹口服副反應(yīng)程度較輕，出現(xiàn)頭暈、嗜睡、惡心、嘔吐等，一般幾小時(shí)內(nèi)可自行消失，半數(shù)患者無(wú)任何反應(yīng)。 硝硫氰胺是一種二苯胺異硫氰酯類(lèi)化合物，瑞士Ciba藥廠(chǎng)研制，國(guó)內(nèi)1975年仿制成功，我國(guó)在全球使用硝硫氰胺治療血吸蟲(chóng)病是最早，最多的國(guó)家，是當(dāng)時(shí)治療血吸蟲(chóng)病中較理想的藥物，在防治血吸蟲(chóng)病工作中發(fā)揮過(guò)重要作用。青蒿素是從自菊科植物黃花蒿（Artemisia annua L.）中提取分離的倍半萜內(nèi)酯，80年代我國(guó)學(xué)者發(fā)現(xiàn)青蒿素及其衍生物（蒿甲醚和青蒿琥酯）具有抗血吸蟲(chóng)童蟲(chóng)的作用。該制劑一般通過(guò)皮膚敷貼方式給藥，此外，廣義的透皮給藥制劑還包括軟膏、涂劑和氣霧劑等。而后硝酸甘油、可樂(lè)定、硝異梨酯、雌二醇、炔諾酮、芬太尼、煙堿和睪酮貼片相繼上市，僅這幾類(lèi)制劑在美國(guó)市場(chǎng)的年銷(xiāo)售額就已超過(guò)30 億美元（Langer, 2004），發(fā)展?jié)摿薮蟆Ｍ钙そo藥系統(tǒng)以其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì), 越來(lái)越受到藥劑學(xué)家的重視。同時(shí)，隨著各種新透皮技術(shù)的不斷開(kāi)發(fā)，多種大分子都有可能透過(guò)皮膚進(jìn)入人體，如蛋白質(zhì)、多肽, 乃至基因片段（Babiuk, 2000）。（4）使用方便，適用于不易口服藥物及長(zhǎng)期用藥的病人，患者可以自主用藥。由于第一種藥物透過(guò)方式的阻力較大，因此藥物主要通過(guò)角質(zhì)層細(xì)胞間隙透過(guò)角質(zhì)層。隨著時(shí)間推移，當(dāng)藥物透過(guò)角質(zhì)層及活性表皮進(jìn)入血液循環(huán)后，則附屬器官的吸收幾乎可以忽略，即透皮吸收中后期，藥物吸收到達(dá)穩(wěn)態(tài)時(shí)，藥物的表皮吸收途徑才是主要途徑。皮膚可以分為角質(zhì)層和活性表皮兩部分。（Pugh, 2000）。 此外，親水性或水溶性好的藥物較難透過(guò)角質(zhì)層；但如果脂溶性過(guò)高的藥物，卻會(huì)在角質(zhì)層中滯留，不利于向活性表皮擴(kuò)散。 藥物經(jīng)皮吸收方式為擴(kuò)散吸收，由于藥物的擴(kuò)散系數(shù)與分子量的平方根或者立方根成反比，所以大分子很難自動(dòng)透過(guò)角質(zhì)層進(jìn)入皮膚，一般分子量大于3000的藥物很難透過(guò)。 藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)影響著藥物的擴(kuò)散率，這是由于細(xì)胞間質(zhì)中的極性頭部會(huì)與藥物中的氫鍵相互作用，所以，用作透皮的藥物中的氫鍵不能超過(guò)2個(gè)。兒童皮膚角質(zhì)層比成人薄，且單位體重皮膚表面積比較大，因此對(duì)透皮吸收的藥物的毒副作用更為敏感，用藥時(shí)需格外小心。例如，東莨菪堿貼劑被設(shè)計(jì)貼于耳后。水和程度增大不但可以使親水性藥物經(jīng)皮吸收速率增加，而且能使親脂性藥物的經(jīng)皮吸收速率增大，但親水性藥物的滲透效果更為顯著。有的制劑成分能在穿過(guò)皮膚的過(guò)程中改變皮膚的屏障性能。此外，不同透皮制劑釋放藥物的速度也不一樣，從而藥物的透皮吸收速率也存在差異。目前，促進(jìn)藥物透過(guò)皮膚的主要技術(shù)如下：以可逆改變皮膚結(jié)構(gòu)為主的化學(xué)促透技術(shù)，如使用天然或合成的透皮劑促進(jìn)劑；以改變藥物物理性質(zhì)為主的載體促透技術(shù)，如將藥物做成脂質(zhì)體、微乳(Chen et al., 2004)、傳遞體(Cevc et al., 1996)、醇質(zhì)體、環(huán)糊精、固態(tài)脂質(zhì)納米粒等；以高新技術(shù)導(dǎo)向?yàn)橹鞯拇偻感录夹g(shù)，如離子導(dǎo)入、電致孔(Brown et al., 2008)、超聲（Wong et al., 2008）、激光、高壓氣體、微針陣列(Prausnitz et al., 2004)等。熔點(diǎn)為136140℃。 Cheng et al., 2011）。 無(wú)論靜脈注射還是口服，吡喹酮都能被組織迅速吸收并分布于全身，藥物主要分布在肝臟，其次為腎臟、肺、胰腺、腎上腺、腦垂體、唾液腺等。絕大多數(shù)代謝物和葡萄糖醛酸或硫酸結(jié)合成鹽排出。 Harder, 2002）。 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，在治療劑量下，試驗(yàn)動(dòng)物的神經(jīng)系統(tǒng)、心、肝等器官無(wú)病理性損害，但電生理研究表明吡喹酮對(duì)心肌細(xì)胞鈣離子內(nèi)流有影響，可以抑制Na+K+ATP酶的作用，當(dāng)分次給藥時(shí)則能明顯降低毒性，提高動(dòng)物半數(shù)致死量（劉一日韋等，1944）。即吡喹酮對(duì)肝實(shí)質(zhì)性細(xì)胞具有一定的毒性作用，其損害比血吸蟲(chóng)感染所致局限性肝細(xì)胞病變較為廣泛。一般認(rèn)為在合理的使用劑量下，幾乎不會(huì)有嚴(yán)重的副作用產(chǎn)生（Xiao et al., 2010），吡喹酮的副反應(yīng)一般較輕且短暫，不影響治療的進(jìn)行和日常工作，常見(jiàn)副反應(yīng)有： 消化系統(tǒng)反應(yīng)較輕而少，多見(jiàn)無(wú)定位腹痛、惡心嘔吐、腹?jié)q腹痛、食欲減弱等，偶有黃疸與便血發(fā)生。過(guò)敏反應(yīng)，主要表現(xiàn)為丘疹、斑丘疹、蕁麻疹、伴有皮膚搔癢，血管神經(jīng)性水腫。由于吡喹酮仍能引發(fā)一些嚴(yán)重副反應(yīng)，且反應(yīng)機(jī)制不完全清楚，所以對(duì)于伴有嚴(yán)重心律不齊或心力衰竭、晚期血吸蟲(chóng)病肝臟代償功能極差、腎功能?chē)?yán)重障礙等疾病的患者，一般不予用藥。（2）吡喹酮對(duì)血吸蟲(chóng)代謝的影響吡喹酮作用的蟲(chóng)體皮層受損的同時(shí)，蟲(chóng)體皮層堿性磷酸酶活力明顯降低，從而影響蟲(chóng)體對(duì)葡萄糖的攝入，促進(jìn)蟲(chóng)體內(nèi)源性糖原分解。經(jīng)核酸代謝研究認(rèn)為吡喹酮可抑制蟲(chóng)體核酸與蛋白質(zhì)合成，但是認(rèn)為這并不是殺滅日本血吸蟲(chóng)的重要環(huán)節(jié)（肖樹(shù)華等，1981b）。 吡喹酮對(duì)蟲(chóng)卵肉芽腫的作用一般認(rèn)為吡喹酮對(duì)日本血吸蟲(chóng)蟲(chóng)卵肉芽腫的作用是間接的，在感染初期服用吡喹酮藥物，感染動(dòng)物肝臟內(nèi)的蟲(chóng)卵肉芽腫的平均數(shù)量和大小均減少，肝臟纖維化進(jìn)程減慢。灌服吡喹酮150 mg/kg，反復(fù)用藥56天，小鼠肺部血吸蟲(chóng)肉芽腫直徑明顯減少，炎性細(xì)胞受到抑制（Huang, 2011）。血吸蟲(chóng)成蟲(chóng)在足量的吡喹酮中暴露充分的時(shí)間是殺滅具有特殊皮層的血吸蟲(chóng)的一個(gè)必要條件（Wahn et al., 1984）。所以，設(shè)法使得體循環(huán)中吡喹酮的濃度增加，可能將會(huì)更好的研究該藥物的抗肉芽腫作用。人們發(fā)現(xiàn)角質(zhì)層的貯藏功能能夠維持吡喹酮恒定的血藥濃度，藥物進(jìn)入體循環(huán)在全身起作用，具有較好的減蟲(chóng)效果（王在華等，1994）。經(jīng)皮給藥能夠進(jìn)一步減少藥物的用量（彭惠玲等，1991）。鄭伯祁等以丙二醇為溶劑配成20%的吡喹酮霜?jiǎng)M(jìn)行穴位涂膚治療慢性血吸蟲(chóng)病，涂膚組的減卵率和副作用出現(xiàn)率均優(yōu)于口服給藥組（鄭伯祁等，1997）。 選題的目的與意義血吸蟲(chóng)病是一種歷史悠久、在世界范圍內(nèi)廣泛傳播的寄生蟲(chóng)疾病，對(duì)人類(lèi)的健康造成了非常嚴(yán)重的危害，同時(shí)嚴(yán)重影響了全球的畜牧業(yè)發(fā)展。一般的給藥途徑，如傳統(tǒng)的口服給藥，由于肝臟強(qiáng)烈的“首過(guò)效應(yīng)”和胃腸滅活，血液中的藥物濃度不能達(dá)到有效的濃度，也不能維持較長(zhǎng)的時(shí)間，藥物較難跨越這道屏障。吡喹酮分子具有較強(qiáng)的親脂性，分子量相對(duì)較小且熔點(diǎn)較低，根據(jù)透皮藥物分子的選擇標(biāo)準(zhǔn)，它是一種比較適合透皮給藥的候選藥物。然后利用透皮給藥能避免肝臟的首過(guò)效應(yīng)、維持長(zhǎng)時(shí)間恒定的血藥濃度等優(yōu)點(diǎn)，通過(guò)透皮給藥與灌胃給藥做對(duì)比，進(jìn)一步深入研究吡喹酮對(duì)日本血吸蟲(chóng)病蟲(chóng)卵肉芽腫的作用并在此基礎(chǔ)上對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行探討。2 材料與實(shí)驗(yàn)方法吡喹酮分析純韓國(guó)SHINPOONG藥物有限公司乙二醇苯醚分析純國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司四氫呋喃分析純天津市化學(xué)試劑三廠(chǎng)二甲亞砜分析純國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司油酸分析純天津市東麗區(qū)泰蘭德化學(xué)試劑廠(chǎng)1,2二氧六環(huán)分析純國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司正辛醇分析純天津天泰精細(xì)化學(xué)品有限公司磷酸氫二鈉分析純上海新華化工廠(chǎng)磷酸二氫鈉分析純上海新華化工廠(chǎng)甲醛溶液分析純湖北大學(xué)化工廠(chǎng) 實(shí)驗(yàn)材料新西蘭家兔 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心陽(yáng)性釘螺江蘇省血吸蟲(chóng)病防治所 主要實(shí)驗(yàn)儀器Nicolet evolution 300紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)美國(guó)Thermo Electron公司 camera DXM1200顯微圖像分析系統(tǒng)日本尼康公司pH計(jì)（pH3C）上海雷磁儀器廠(chǎng) 微孔濾膜天津奧賽恩斯儀器有限公司SHAB型恒溫振蕩器常州國(guó)華電器有限公司低溫冷卻循環(huán)泵DLSB上海衛(wèi)凱儀器設(shè)備有限公司AL204型電子天平梅特勒托利多儀器（上海）有限公司 PZQ混合組分溶媒的篩選及透皮性能預(yù)測(cè) PZQ在混合溶劑中溶解度的測(cè)定（1）飽和溶液濃度的測(cè)定方法 在試管中放一定量的溶劑和PZQ，裝上塞子，置于恒溫振蕩器，恒溫24h，使得試管底部有過(guò)量溶質(zhì)存在。將五種溶劑兩兩混合，按照體積比3：1：1：3的比例互溶，用以上方法測(cè)量混合溶媒中PZQ的質(zhì)量濃度。在UV300分光光度計(jì)319 nm處測(cè)定吸光度。（2）磷酸鹽緩沖溶液的制備精確稱(chēng)取NaH2PO4即制得PH=（許曉文，2005）。（4）PZQ在水正辛醇兩相溶液間分配系數(shù)測(cè)定取100 mg （1）其中，為100 mg灌服給藥時(shí)，將胃管仔細(xì)插入家兔食道，用針筒將懸濁液緩慢注入胃中，再用兩倍體積的純凈水將管內(nèi)殘余藥物全部灌入胃中，以確保灌服藥量的準(zhǔn)確性。20只家兔隨機(jī)分成5組，每組4只并用苦味酸標(biāo)記。第四組（透皮組I ）200mg/kg，PZQ透皮給藥，其余步驟同第二組處理。 肝臟病理切片的制作及病理檢查每只家兔取肝臟左葉邊緣和右葉邊緣相同部位肝組織，大小約1 cm3各2塊，置于10%的甲醛溶液中固定48 h，并經(jīng)流水沖洗，分別依次用50%，60%，70%，80%，90%，95%乙醇溶液及無(wú)水乙醇脫水，二甲苯透明，浸蠟48 h，石蠟包埋。在載玻片上放置一塊10mm10mm的蓋玻片，用解剖針沾取數(shù)滴水于蓋玻片上，再用解剖針粘取含有尾蚴的水滴，解剖鏡下計(jì)數(shù)，每個(gè)載玻片上選取自由活動(dòng)且完整無(wú)損的尾蚴（220177。用礦泉水將剪毛處涂濕，將粘有血吸蟲(chóng)尾蚴的蓋玻片倒貼在剪毛處15 min，使血吸蟲(chóng)尾蚴充分鉆入皮膚。B、C兩組為藥物治療組，按200mg/kg PZQ的劑量給藥。3 結(jié)果與討論 PZQ的溶解度測(cè)定及其在臨床應(yīng)用意義恒溫35℃震蕩24h后，5種溶劑的10個(gè)混合溶媒的PZQ溶液中有部分發(fā)生明顯的顏色變化，推測(cè)其中發(fā)生化學(xué)變化，顏色變化如表31：表31 PZQ混合溶液35℃恒溫24h后的顏色變化Table 31 The changes of the colour of different PZQ solution A：DMSO B：THF C：OA D：EGPE E：1,4dioxane A B C D EA AA淡黃色B AB淡黃色 BB淡黃色C AC淡黃色 BC深紅色 CC淡黃色D AD淡黃色 BD深紅色 CD深紅色 DD淡黃色E A E淡黃色 　 BE淡紅色 CE淡紅色 DE 淡紅色 EE淡黃色 通過(guò)混合溶媒顏色變化可知，二甲亞砜與其他四種溶液配制的PZQ混合溶液，沒(méi)有發(fā)生明顯的顏色變化，性質(zhì)穩(wěn)定。同樣的，由于PZQ和二甲亞砜、1,4二氧六環(huán)、四氫呋喃的分子結(jié)構(gòu)相差較大，且溶解性能也有較大差異，所以PZQ在這三種溶媒中的溶解度較低。當(dāng)二甲亞砜的濃度為25%，PZQ在二甲亞砜和1,4二氧六環(huán)混合溶液中的溶解度比在各單純?nèi)軇┲腥芙舛榷即?，存在最大?20 mg/ml，出現(xiàn)潛溶現(xiàn)象。 PZQ多組分透皮劑在臨床應(yīng)用的意義這次實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，PZQ在1,4二氧六環(huán)二甲亞砜和四氫呋喃二甲亞砜體系的混合溶媒中溶解度可以達(dá)到200~300mg這樣小體積、高濃度的PZQ透皮劑，皮膚容易吸收且能夠準(zhǔn)確定量，因此從溶解度角度考慮，這兩種混合溶液可能是PZQ透皮劑的合適給藥溶媒。透皮給藥過(guò)程中，隨著易揮發(fā)組分的揮發(fā)，總劑量減少，這使得PZQ在非揮發(fā)組分中的濃度維持不變甚至有所增加，能夠維持較高的給藥速率（Morgan et al., 2003）。從圖32中發(fā)現(xiàn)，在二甲亞砜與四氫呋喃的混合溶液中，PZQ的油水分配系數(shù)大致是各單