牛欄山酒廠清香大曲及酒醅中地衣芽孢桿菌的分離鑒定-預(yù)覽頁
【正文】 ：CMCNa 510g，酵母膏 1g，KH2PO4 ，瓊脂15g，將上述物質(zhì)溶解后,用蒸餾水定容到1000ml，加入5ml 10mg/ml的剛果紅溶液，121℃，滅菌20min，冷卻倒平板，凝固后待用。 明膠是一種動(dòng)物性蛋白，明膠的水解是由于有些細(xì)菌具有明膠酶（亦稱類蛋白水解酶），能將明膠先水解為多肽，又進(jìn)一步水解為氨基酸，失去凝膠性質(zhì)而液化。每天觀察結(jié)果，液化為陽性，否則為陰性。 培養(yǎng)基：酪素水解物20g，NaC1 5g，巰基醋酸鈉HS?CH2COONa 2g，甲醛合次硫酸鈉HOCH2?SO2Na 1g，瓊脂15g，蒸餾水1000ml，調(diào)節(jié)pH ，分裝試管121℃滅菌20min，培養(yǎng)基不擺斜面。 用1環(huán)肉湯菌液，穿刺接種到上述培養(yǎng)基中，必須穿刺到管底。試劑：40％NaOH（或KOH），肌酸。 接種于上述培養(yǎng)液中，適溫培養(yǎng)46d。適溫培養(yǎng)35d，記錄菌落周圍和下面酪素是否已被分解而呈透明。 有些細(xì)菌具有酪氨酸酶，能使含酚類的化合物如酪氨酸、酚等氧化成醌，再經(jīng)脫水、聚合等一系列反應(yīng)，最后形成黑色沉淀物質(zhì)。該培養(yǎng)液要求十分澄清，pH必須準(zhǔn)確，用pH計(jì)調(diào)測(cè)。 由于不同菌類耐鹽性不同，故常以此作為鑒別特征。若在接近0℃的低溫培養(yǎng)，則觀察時(shí)間可延長(zhǎng)710d或更長(zhǎng)。 地衣芽孢桿菌在醬香型白酒生產(chǎn)中的一個(gè)重要作用就是產(chǎn)生醬香物質(zhì)，這與其產(chǎn)生蛋白酶類有關(guān)，蛋白酶將蛋白質(zhì)分解成肽類和氨基酸，經(jīng)過發(fā)酵會(huì)產(chǎn)生醬香物質(zhì)。接入液體培養(yǎng)菌種10％，恒溫箱培養(yǎng)35d，取出，鑒定是否產(chǎn)生醬香物質(zhì)。 本實(shí)驗(yàn)中糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)選取葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、乳糖、果糖、甘露醇、阿拉伯糖、木糖等。透明圈如圖1,2,3,4,5,6。 在實(shí)驗(yàn)菌株中，1＃、3＃、7＃、9＃菌株產(chǎn)生的透明圈最大，其中接種9＃菌株的平板完全變?yōu)橥该鞯?，說明水解酪素的能力最強(qiáng)。 在明膠液化實(shí)驗(yàn)中，1＃、2＃、3＃、4＃、7＃、8＃、9＃、11＃、12＃、16＃、17＃菌株液化明膠的能力最強(qiáng)，接種7d后就將明膠全部液化。 對(duì)以上經(jīng)過生理生化實(shí)驗(yàn)篩選出來的地衣芽孢桿菌進(jìn)行分子鑒定。采用美國ABI 9700型PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增。 由上海生工生化公司測(cè)序，將測(cè)定的序列處理后提交到NCBI的Gene Bank進(jìn)行序列比對(duì)，與Bacillus licheniformis（地衣芽孢桿菌）的一致率達(dá)到100％。 ，60℃水浴30min可以排除酵母、霉菌等的干擾，而芽孢桿菌也不會(huì)死亡，所以該方法比較容易分離得到純芽孢桿菌菌株。 ，所以是否利用丙酸鹽可以作為鑒定地衣芽孢桿菌的一個(gè)重要依據(jù)，但是其他生理生化實(shí)驗(yàn)同樣是必不可少的。 在產(chǎn)酶實(shí)驗(yàn)中，所有菌株均產(chǎn)生過氧化氫酶，這與芽孢桿菌的性質(zhì)相符合，但是分離得到的所有芽孢桿菌均不產(chǎn)纖維素酶。 ，蔡妙英等編著，：8 /
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