【正文】 靶點(diǎn)、細(xì)胞水平、分子水平研究等 科學(xué)問(wèn)題： 白內(nèi)障發(fā)病過(guò)程中的相關(guān)基因研究，包括致病 基因篩選、功能研究、調(diào)控機(jī)制、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等 在研究領(lǐng)域?qū)用? 從研究方向展開 圍繞某一具體科學(xué)問(wèn)題 （本項(xiàng)目研究目標(biāo)） 進(jìn)行歸納分析 提出研究 設(shè)想 從研究領(lǐng)域切入 研究意義 項(xiàng)目的研究意義 存在問(wèn)題： 對(duì)科學(xué)意義的闡述不足或夸大 撰寫方法： 從領(lǐng)域入手，提出主要問(wèn)題，引出熱點(diǎn)研究方向。目前， 它已是人類 第一位的致盲疾病。 所以，一些學(xué)者認(rèn)為通過(guò) 預(yù)防白內(nèi)障 發(fā)生或延緩其發(fā)展 的途徑征服白內(nèi)障 已成為一項(xiàng)全球性的社會(huì)和社會(huì)經(jīng)濟(jì) 問(wèn)題 [2]。據(jù)此，本研究擬利用改良的消減雜交技術(shù)和基因芯片技術(shù)準(zhǔn)確、全面、快速的特點(diǎn)，以晶狀體上皮細(xì)胞為研究對(duì)象，一次性篩選出老年性白內(nèi)障全部有差異表達(dá)的基因，從中再篩選出與白內(nèi)障相關(guān)基因，并著重對(duì)其功能進(jìn)行研究，從基因水平闡明白內(nèi)障的發(fā)病機(jī)制，為防治白內(nèi)障提供新思路和理論依據(jù)。 D 、 對(duì)方法原理理解不夠： 對(duì)研究方法不熟悉，簡(jiǎn) 單移植或夸大其作用，缺乏實(shí)際應(yīng)用的可行性。 C、圍繞存在的問(wèn)題，結(jié)合國(guó)內(nèi)外以往的研究 結(jié)果、 當(dāng)前的 現(xiàn)狀 及今后的 發(fā)展趨勢(shì) ， 詳細(xì)論述和分 析 這些問(wèn)題產(chǎn)生的原因， 提出該方面的空白點(diǎn)、 未知數(shù)、以及研究的難點(diǎn)、焦點(diǎn)， 從而為自己 申請(qǐng)項(xiàng)目確立研究目標(biāo)奠定充分的立論基礎(chǔ)。 需特別注意的問(wèn)題： 必須對(duì)所運(yùn)用的技術(shù)方法的原理、流程尤其是在實(shí)際運(yùn)用中可能出現(xiàn)的問(wèn)題要十分清楚， 絕不能是一種簡(jiǎn)單的移植。多年以來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者從不同的角度探討白內(nèi)障的發(fā)生機(jī)理。不僅如此， 晶狀體上皮細(xì)胞 還是晶狀體中 受外來(lái)刺激影響 較早的部位，已有研究證實(shí)老年性白內(nèi)障的晶狀體上皮細(xì)胞還發(fā)生 退行性變、細(xì)胞膜通透性增加、細(xì)胞內(nèi)酶活性改變、細(xì)胞數(shù)量減少、凋亡細(xì)胞增多等改變， 與單純老化的晶狀體之間存在差異 [35] 。 白內(nèi)障的形成與 晶狀體的老化 密不可分，是晶狀體老化的極端表現(xiàn)。 Carper等 [13]利用 RTPCRDD(reverse transcriptionpolymerase chain reaction differential display)技術(shù)研究 H2O2誘導(dǎo)的晶體上皮細(xì)胞的基因差異性表達(dá)結(jié)果顯示 NADH脫氫酶 4亞基、細(xì)胞色素 b、谷氨酰胺轉(zhuǎn)移酶基因表達(dá)減少以及細(xì)胞因子的核蛋白、替代拼接因子 2 （ alternative splicing factor）、 β三羥基異丁酰輔酶A水解酶基因表達(dá)的增加。 Gong等 [16]報(bào)告晶狀體的細(xì)胞膜蛋白連接蛋白 α3（ α3 Connexin）基因敲除小鼠（ knockout mouse）在晶狀體形成的早期及纖維細(xì)胞分化早期不受影響，其后出現(xiàn)與晶狀體蛋白溶解有關(guān)的核性白內(nèi)障。 Kantorow等 [18]利用 RTPCRDD研究老年性白內(nèi)障與正常晶狀體上皮的基因差異性表達(dá)的初步結(jié)果是老年性白內(nèi)障有三個(gè)高表達(dá)基因和 12個(gè)低表達(dá)的基因。 尋找差異表達(dá)基因的經(jīng)典方法是消減雜交技術(shù)（ subtractive hybridization, SH），它是 …… ，但是實(shí)驗(yàn)操作復(fù)雜。同理，利用此方法也能快速、有效地獲得白內(nèi)障晶狀體上皮細(xì)胞與正常晶狀體上皮細(xì)胞間差異表達(dá)的基因，并克隆到全長(zhǎng) cDNA，為進(jìn)一步的結(jié)構(gòu)和功能研究打下基礎(chǔ)。通過(guò)以上兩種技術(shù)的有機(jī)結(jié)合，我們能更快捷、有效、準(zhǔn)確地得到白內(nèi)障相關(guān)基因。 B、引文信息要全 ：文章題目、作者姓名、具體出處 （包括期刊名、年份、卷期、頁(yè)碼等）。制備差異表達(dá)基因的基因芯片，利用基因芯片技術(shù)從多個(gè)標(biāo)本的老年性白內(nèi)障晶狀體上皮細(xì)胞中篩選出白內(nèi)障相關(guān)基因。 撰寫要求： 找出關(guān)鍵問(wèn)題，提出解決辦法。此技術(shù)是本課題組成員主要的研究成果，在應(yīng)用此項(xiàng)技術(shù)中已積累了較豐富的實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)。只要嚴(yán)格按操作程序進(jìn)行操作就可以避免發(fā)生差錯(cuò)。這對(duì)在體晶狀體的基因轉(zhuǎn)染有很大的優(yōu)越性。 撰寫要求： 以研究項(xiàng)目的需求為前提，盡量采用最適合的方法和手段，并將其操作步驟和關(guān)鍵環(huán)節(jié)體現(xiàn)在技術(shù)路線當(dāng)中。 — 詳細(xì)地寫清楚每個(gè)具體步驟。 （ 2）建立差異 cDNA文庫(kù)： 從 50例白內(nèi)障手術(shù)患者的前囊膜上取下的晶狀體上皮細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)組，從 25例正常晶狀體前囊膜上取下的晶狀體上皮細(xì)胞作為對(duì)照組，利用改良的消減雜交技術(shù) [19， 20]，獲得差異表達(dá)的 cDNA，并建立文庫(kù)。利用的 消減雜交技術(shù)是篩選差異表達(dá)基因的有效方法。通過(guò)分析這些基因的結(jié)構(gòu)、研究它們的功能，揭示老年性白內(nèi)障晶狀體上皮細(xì)胞變化的分子生物學(xué)機(jī)制，為防治白內(nèi)障提供新的思路。 研究目標(biāo)、研究?jī)?nèi)容、研究方法的關(guān)系 依據(jù) 目標(biāo)確定研究?jī)?nèi)容 根據(jù)內(nèi)容選擇研究方法 研究?jī)?nèi)容與技術(shù)路線的區(qū)別 研究?jī)?nèi)容 ：根據(jù)總體目標(biāo)分若干分題，重點(diǎn)回答 做什么 — 觀察指標(biāo)、階段目標(biāo) 技術(shù)路線 ：重點(diǎn)回答怎么做 — 在具體步驟中體現(xiàn) 研究?jī)?nèi)容和研究方法 對(duì)擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題與可行性分析撰寫時(shí)的區(qū)別 二者相同之處： 擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題在可行性分析時(shí)也要提及 二者不同之處： 撰寫擬解決關(guān)鍵問(wèn)題， 重點(diǎn)回答 如何解決 。 創(chuàng) 新 點(diǎn)： ① 形態(tài)學(xué)證實(shí)在腦下垂體中 確有 神經(jīng)纖維 存在 ② 進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證實(shí) 是 肽能神經(jīng) 研究目標(biāo)： 通過(guò)各種形態(tài)學(xué)研究充分證明在腦下垂體中 確 有 肽能神經(jīng) 支配 預(yù)期研究結(jié)果： 提出腦下垂體 肽能神經(jīng)和體液雙重調(diào)節(jié) 假說(shuō)，對(duì)原有理論提出挑戰(zhàn)。 重點(diǎn)內(nèi)容、觀點(diǎn)要用黑體強(qiáng)調(diào)。 申請(qǐng)者和具有高級(jí)專業(yè) 技術(shù)職務(wù)的項(xiàng)目組主要成員，當(dāng)年申請(qǐng)及承擔(dān)（含參加）在研的面上項(xiàng)目數(shù)合計(jì) 不得超過(guò)兩