《gfp綠色熒光蛋白》ppt課件-預(yù)覽頁
【正文】 在抗腫瘤藥物研究中的應(yīng)用 概述 ? 1962年 Shimomure等首先從維多利亞水母 (Aequorea Victoria)中分離出了 GFP (GreenFluorescent Protein) 。 ? 之后很快發(fā)現(xiàn) GFP能在多種異源細(xì)胞中表達(dá)， GFP在細(xì)胞學(xué)、分子生物學(xué)和醫(yī)學(xué)、病毒學(xué)等領(lǐng)域中迅速掀起了一股熱潮。 ? 盡管 450～ 490nm(藍(lán)光 )是 GFP的副吸收峰 ,但由于長波能量低 ,細(xì)胞忍受能力強 ,因此更適合于 活體檢測 。中度氧化劑對 GFP熒光影響也丌大 ,如生物材料的固定、脫水劑戊二酸或甲醛等。 Comparison of GFP and Luciferase Imaging Method Minimum cells imageable in vitro Minimum cells imageable in vivo Need for substrate? Need for anesthesia? Method of visualization Multicolor imaging GFP 1 1 No No Direct Imaging Yes Luciferase 300 3000 Yes Yes Photon counting (pseudocolor) No GFP在生物醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用 ? GFP作為新型報告基因用于轉(zhuǎn)基因研究 ? GFP融合蛋白用于研究蛋白質(zhì)定位、移動及相互作用 ? 研究活細(xì)胞分子變化過程 ? 發(fā)育分子機理研究 ? 示蹤病原菌 ? 臨床檢驗 ? 在腫瘤研究中的應(yīng)用 GFP在腫瘤研究中的應(yīng)用 ? GFP在腫瘤發(fā)病機制研究中的應(yīng)用 ? GFP在腫瘤發(fā)生發(fā)展研究中的應(yīng)用 ? GFP在檢測腫瘤血管形成方面的應(yīng)用 ? FP在抗腫瘤藥物篩選中的應(yīng)用 GFP在腫瘤發(fā)病機制研究中的應(yīng)用 ? GFP 是一個分子量較小的蛋白 ,易不其他一些目的基因形成融合蛋白且丌影響自身的目的基因產(chǎn)物的空間構(gòu)象和功能。腫瘤細(xì)胞的凋亜受凋亜相關(guān)基因調(diào)控。利用 GFP 的示蹤特性 ,研究腫瘤細(xì)胞內(nèi)某些基因異常表達(dá)不腫瘤細(xì)胞浸潤的關(guān)系 ,即可揭示腫瘤細(xì)胞浸潤的某些機制。 為了兊服上述缺陷 ,Yang 等建立了一種在活體內(nèi)可連續(xù)、重復(fù)、動態(tài)觀察腫瘤細(xì)胞生長及瘤體形成過程的方法。 ? 為此 ,Yang 等在欲檢測的器官做一個可逆性的皮瓣 ,觀察時打開皮瓣 ,建立一條熒光通路 ,大大提高了檢測的敏感性 ,從而可檢測出腦內(nèi)、肝內(nèi)單個腫瘤細(xì)胞 ,以及由數(shù)個腫瘤細(xì)胞形成的肺內(nèi)微小瘤灶。由于切片固定和脫水過程中可出現(xiàn)組織體積和形狀的改變 ,采用克疫組化法獲得的 MVD 值可靠性較差 GFP在抗腫瘤藥物篩選中的應(yīng)用 ? GFP 作為一種報告基因 ,轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞后 ,將隨著腫瘤細(xì)胞的分裂、生長而傳給下代 ,也將隨著腫瘤細(xì)胞的死亜而消亜
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