【正文】 的可能有： SS、SPx、 Px Px、 Py Py,、 Pz Pz 。 分子軌道與能級 五種分子軌道所對應(yīng)的能級示意 能 量 π*反鍵軌道 σ*反鍵軌道 n非成鍵軌道 π成鍵軌道 σ成鍵軌道 高 低 分子軌道與能級 分子中外層電子的能級結(jié)構(gòu)由五種分子軌道所對應(yīng)的能級組成 ， 能量由低到高排列次序?yàn)?σ πnπ*σ* 。 分子軌道與能級 二、能級躍遷與分子光譜信息 （一）、分子中軌道躍遷與光譜特點(diǎn) σ→σ* 躍遷：主要為有機(jī)分子中的 C— C鍵與 C— H鍵電子 (單鍵 )。 躍遷的能量間距約 6電子伏特左右 ， 產(chǎn)生這類躍遷需要吸收光子的波長在真空紫外區(qū)與石英紫外區(qū)之間 ， 約 200nm左右 ， 可被普通的紫外可見光譜分析利用 。 這些雜原子中的孤對電子在非成鍵分子軌道 n上 ， n與 σ*分子軌道的能量間距也約 6電子伏特 ， 因此產(chǎn)生這種躍遷需要吸收的光子與 π→π* 躍遷相似 ， 但發(fā)生這類躍遷的幾率較低 ， 其摩爾吸光系數(shù)約 102~103 。 如： C=C、 C≡C、 C=O、 C=N、 N=N、 —COOH等 。 ① R吸收帶： 由 n → π * 躍遷產(chǎn)生 。 K吸收帶的波長位置及吸收強(qiáng)度與共軛體系數(shù)目 、 位置 、 取代基的種類有關(guān) 。 吸收峰在 230～ 270nm之間 ，k≈ 102。 當(dāng)苯環(huán)上有發(fā)色團(tuán)且與苯環(huán)共軛時(shí) ， E帶與 K帶合并向長波方向移動 ， B吸收帶的精細(xì)結(jié)構(gòu)簡化 ， 吸收強(qiáng)度增加 、向長波方向移動 。 隨著共軛體系的加長 ， 吸收峰的波長和吸收強(qiáng)度會呈現(xiàn)規(guī)律性的改變 。 吸收光譜影響因素 n→π* 躍遷的吸收峰向短波方向移動，稱短移或紫移效應(yīng)。 光源 單色器 吸收池 檢測器 顯示器 光源是提供激發(fā)所需入射光的裝置 。 紫外－可見分光光度計(jì) 光源 常用光源：鎢燈、氫燈、氘燈、氙燈 (1)、鎢燈：可見光區(qū)光源。 在空氣中 ， 用石英作燈管的氫燈或氘燈 ， 由于受石英與空氣透過特性的影響 ， 工作波長范圍約為 190～ 360nm(普通玻璃不能通過紫外線 ， 只能通過可見光 )。 單色器的功能： 通過色散器件 ， 將光源產(chǎn)生的包含多種波長成分的 、 波長連續(xù)的復(fù)色光 ， 在空間上分開 ， 呈按一定波長順序排列的單色光 ， 然后取出所需波長的單色光用于分析 。 成像物鏡：將色散原件產(chǎn)生的單色平行光，在其焦平面的不同位置聚焦，成為出射狹縫對應(yīng)波長的單色光。 紫外－可見分光光度計(jì) 狹縫大小的影響 ① 棱鏡：棱鏡材料對不同波長光的折射率不同 ， 波長短光的折射率大 ， 波長長的光折射率小 。 有凹面光柵和平面光柵 。 單色性是指單色光波長成分的純度 ， 用光譜帶寬表示 ， 簡稱帶寬 。 紫外－可見分光光度計(jì) 絕對分辨率：指最低實(shí)際能分開的兩條譜線之間的絕對距離 ，也稱為分辨波長 。 紫外－可見分光光度計(jì) 檢測器 分光光度計(jì)中檢測信號的器件稱為檢測器。 波長掃描時(shí) ， 檢測器逐個(gè)檢測各個(gè)單色光波長單元的強(qiáng)度 ， 因此 ， 掃描一個(gè)樣品的光譜要有足夠長的時(shí)間 。 光電檢測器：有光電池 、 光電管 、 光電倍增管 、 硅二極管 。將產(chǎn)生的自由電子通過外電路與空穴復(fù)合即可產(chǎn)生電流。 又稱真空光電二極管 。光電流在負(fù)載電阻兩端產(chǎn)生一個(gè)電位降 ， 經(jīng)放大即可進(jìn)行測量 。 依次類推 ， 在陽極上最后收集到的電子數(shù)將是陰極發(fā)出電子數(shù)的105～ 108倍 。 由于反向偏置 ， 其導(dǎo)電性幾乎為零 。 紫外－可見分光光度計(jì) ⑤ 、硅二極管 顯示器的類型因儀器的檔次不同而有較大差異 ， 常見的有：指針表頭式 ， 數(shù)值管表頭式 ， 液晶表頭式 ， 計(jì)算機(jī)配套顯示器等 。 這種分光光度計(jì)結(jié)構(gòu)簡單 、 價(jià)格便宜 ， 主要用于定量分析 。 當(dāng)吸光面進(jìn)入光路時(shí) ， 檢測器的輸出為零 ， 以便檢查或控制零點(diǎn) 。最適于測定存在相互干擾組分的混合試樣，不僅操作簡單，精確度也較高。（ 已經(jīng)應(yīng)用在高級的液相色譜上 ） 。 表示分光光度計(jì)分析測試性能的參數(shù)有：儀器中傳送信息的 保真度 、 對信息采集的 選擇性 以及儀器的 測試范圍 、速度 與 靈敏度 等 。 定性分析 ，波長準(zhǔn)確度直接影響光譜吸收峰的位置 。 對分析影響的大小與待測樣品光譜特征及所用方法有關(guān) 。帶寬過大時(shí) ， 吸收光譜峰高度變小 ， 峰寬變大 ，靈敏度降低 。 一般 分析用單色光應(yīng)選擇被測物質(zhì)溶液的最大吸收波長 ， 這樣吸光度值大 、 靈敏度較高 ， 受分析波長誤差的影響較小 。 可通過：改變試樣的稱量 、 改變?nèi)芤旱南♂尪?， 選擇適當(dāng)光程的比色皿等控制溶液的吸光度值大小 。 試液空白： 被測試液存在其他有色離子時(shí) ， 應(yīng)采用不加顯色劑的被測試液作為參比溶液 。 因?yàn)樽贤饪梢姽馕展庾V包含的信息量較少 ，在定性分析中受到一定限制 。 二、 定量分析 在紫外～可見光區(qū)有吸收的物質(zhì) ， 可直接測定 ， 測定的靈敏度受樣品摩爾吸光系數(shù)的限制 。 （一）、單組分物質(zhì)的定量分析 定量分析方法 ： 利用間接的方法測定待測物質(zhì) 。 公式計(jì)算法屬于絕對測量 ， 因此分析測定吸光度 A的條件應(yīng)當(dāng)與公式要求的條件一致 ， 儀器的性能如波長精度 、 單色器帶寬 、 雜散光等對測量的準(zhǔn)確度有直接影響 。 定量分析方法 比較法： （一）、單組分物質(zhì)的定量分析 標(biāo)準(zhǔn)曲線法和工作曲線法是用數(shù)學(xué)方程或曲線的形式 ， 建立待測組分的濃度與吸光度間的關(guān)系 。 標(biāo)準(zhǔn)曲線法 定量分析方法 樣品處理過程 (如分離 、 顯色等 )會造成測定過程的系統(tǒng)誤差 ， 為了消除這些誤差 ， 可以按照樣品處理過程的步驟和條件 ，測定標(biāo)準(zhǔn)樣品的吸光度隨濃度變化的曲線(或回歸方程 )， 稱為工作曲線 。 第二種 ， A在 λ2處無吸收 ， 不干擾 B的測定 ， B的測定同單組分測定 。 評價(jià)分光光度法定量分析的常用參數(shù)是 靈敏度 、 檢測限 、 測定結(jié)果的精確度與準(zhǔn)確度 、 測定的線性范圍與回收率 等 。 測定結(jié)果的絕對誤差是指測定值和真實(shí)值之差；相對誤差是指絕對誤差和真值的比值。 測定結(jié)果的準(zhǔn)確度 精確度： 對同一樣品多次重復(fù)測定值之間相符合的程度 。 測定結(jié)果的精確度