【正文】 tant 7 repeats 8 repeats AATG Homozygote = both alleles are the same length Heterozygote = alleles differ and can be resolved from one another 170 bp 195 bp Different primer sets produce different PCR product sizes for the same STR allele TCAT repeat unit 復(fù)雜重復(fù)序列舉例 ? —[AGAT]m GAT [AGAT]n [AGAC]o [AGAT]p [AGAC]q— m=3 ， n=3 ， o=3， p=11， q=8 PowerPlex174。 “ DNA fingerprints” 重復(fù)序列的特點(diǎn) The characters of the repetitive sequence 1. 廣泛分布 , 常在非編碼區(qū)，內(nèi)含子 。但不是多位點(diǎn)（基因座）探針。 16 Ladders D3S1358 D16S539 D21S11 D18S51 Penta D D13S317 CSF1PO D7S820 Penta E TH01 D5S818 VWA D8S1179 TPOX AMEL FGA (9) (9) (25) (22) (20) (10) (9) (9) (9) (10) (14) (13) (12) (8) (27) 13 CODIS Core STR Loci with Chromosomal Positions CSF1PO D5S818 D21S11 TH01 TPOX D13S317 D7S820 D16S539 D18S51 D8S1179 D3S1358 FGA VWA AMEL AMEL 遺傳標(biāo)記舉例 DNA多態(tài)性的分類 (1) 1. 片段長(zhǎng)度多態(tài)性 (染色體 DNA，包括 X、 Y染色體 DNA) 以重復(fù)序列為主 :VNTR, STR 2. 序列多態(tài)性 1) 線粒體序列多態(tài)性 2) 基因多態(tài)性 : ABO血型 , HLA 3) MVR序列多態(tài)性 4) 單核苷酸多態(tài)性 (SNPs, single nucleotide polymorphism) (片段兩翼的序列相同 ) 以上均指以某一 位點(diǎn) (locus)來(lái)考慮的， 線粒體 DNA控制區(qū)則以 nt位置 進(jìn)行比對(duì)。如外傷缺指。按基因座劃分，低頻等位基因 ?????。 3. 干燥后可以長(zhǎng)期保存 （ 9400 y） 。 2. 完全個(gè)體特異的 DNA序列包含了人的 全部遺傳信息 。 3. 遺傳變異 ABO血型遺傳變異 B+O→A 、 CisAB、 Oh 4. 基因表達(dá)過程中影響因素多 生理病理過程基因表達(dá)受時(shí) ， 空 （ 組織特異性 ） 限制 。 3. 回文 可以倒讀，舉例 ： 池蓮照曉月，幔錦拂朝風(fēng)。 2. 蛋白質(zhì)具有兩性性質(zhì)， 等電點(diǎn)（ pI） 偏酸的溶液中帶正電，反之帶負(fù)電；可以電泳分離； 3. 加熱、加入乙醇、強(qiáng)酸強(qiáng)堿、重金屬離子或生物堿等試劑可以使其 變性 ；（酶的活性喪失） 4. 有 4級(jí)結(jié)構(gòu)， 可 以成 為抗原， 刺激產(chǎn)生抗體； 5. 酶（包括限制性核酸內(nèi)切酶）屬蛋白質(zhì) ，其催化功能依賴完整的酶蛋白功能域（ domain）， 底物有高度專一性 ，要求最適溫度和最適 pH， 有激活劑和抑制劑。 5． 限制性核酸內(nèi)切酶 （識(shí)別特異性序列） 、 特點(diǎn)、意義。第三章 ： 法醫(yī)物證 DNA分析 的生化基礎(chǔ) 伍新堯 法醫(yī)物證檢驗(yàn)： 分析檢材中的“ 個(gè)人特征” ——“遺傳特征” (Geic Characters) ， 群體 /個(gè)體的關(guān)系 ——“遺傳多態(tài)性”的個(gè)人特征 遺傳標(biāo)記的分類 1. 蛋白質(zhì)類 ： 糖蛋白－ RBC表面抗原 WBC— HLA 血清蛋白型 同工酶型 結(jié)構(gòu)蛋白－外貌特征 2. 核酸類 ： DNA RNA(mRNA, miRNA) 多態(tài)性遺傳標(biāo)記 遺傳多態(tài)性的定義：遺傳特征在個(gè)體間存在的差異。 4． 核酸 5‘端可以被標(biāo)記 ： 標(biāo)記物 (放射性、非放射性 )，標(biāo)記要點(diǎn)，顯示方法的差異。 DNA RNA 轉(zhuǎn)錄、剪接、重排 蛋白質(zhì) 翻譯 調(diào)控 反轉(zhuǎn)錄 逆轉(zhuǎn)錄 病毒 反義治療 抗生素 化療 放療 化療 放療 核酶 microRNA 復(fù)制 蛋白質(zhì)構(gòu)像的改變瘋牛?。ㄔ略? 中心法則 蛋白質(zhì)的特性 1. （毛發(fā)、精子、指甲等含胱氨酸量高，胱氨酸（ SS） 由兩個(gè)半胱氨酸脫氫（氧化）后形成 , 加入 b巰基乙醇 還原后變成半胱氨酸（ —SH），才易受蛋白酶分解。 堿基配對(duì) 限制性核酸內(nèi)切酶 （ Restriction endonuclease） 1. 單鏈多肽，最適 pH為 6～ 8， NaCl有抑制作用，被 Mg2+ 激活 ，巰基有保護(hù)作用，對(duì)熱不穩(wěn)定，于含 50％甘油的緩沖液－ 20℃ 保存； 2. 識(shí)別序列 多為回文結(jié)構(gòu)，水解磷酸二酯鍵，切端分平頭（鈍端）和突出（黏性）末端兩種 。 使定型困難 ，或無(wú)法解釋 。 細(xì)胞不斷分裂 ， DNA不斷自我復(fù)制：嚴(yán)格按照半保留 法則，保證個(gè)體全部有核細(xì)胞的 DNA組成與受精卵的 完全一致 。 單個(gè) STR位點(diǎn)的等位基因數(shù)量多； 個(gè)體分辨率 (discriminating power)高 2. 沒有兩個(gè)人 (單卵雙生除外 )的 DNA序列是完全相同的 。 外在（相貌）和內(nèi)在（血型 , DNA等） 遺傳多態(tài)性 geic polymorphism : 遺傳決定的 。 非遺傳多態(tài)性 環(huán)境因素 和 非遺傳性因素 造成的。 基因座和等位基因的命名 1. 多態(tài)性基因座的命名 (nomenclature) D8S1179 D8代表第 8號(hào)染色體的 DNA片段 S 表示單拷貝 (single copy)片段 1179 WHO、 Genbank 給出的序號(hào) 2. 等位基因的命名 按等位基因含有的 重復(fù)單位（又稱核心序列）數(shù)量命名 ,如 D8S1179 位點(diǎn) , 基因型 20/19, 表示一個(gè)等位基因含有 20個(gè)重復(fù)單位 ,另一個(gè)含有 19個(gè)重復(fù)單位 . (core sequence, repetitive unit) 特殊現(xiàn)象： TH01 ； Penta E ； Short Tandem Repeats (STRs) the repeat region is variable between samples while the flanking regions where PCR primers bind are constant 7 repeats 8 repeats AATG Homozygote = both alleles are the same length Heterozygote = alleles differ and can be resolved from one another PowerPlex174。 Jeffreys使用內(nèi)切酶 Hinf I、 探針是肌紅蛋白內(nèi)含子一段重復(fù)序列（也可以用其他系列作探針）。 有人將其歸入 “ 長(zhǎng)度多態(tài)性 ” ，實(shí)際是不對(duì)的。 2. 同基因座的不同等位基因，核心序列 (core sequence)數(shù)量不同 ,因而表現(xiàn)為長(zhǎng)度差異 . 衛(wèi)星 DNA(串聯(lián)重復(fù)序列 ),其 G/C含量高 ,少數(shù)為 A/T,沉降系數(shù)偏高或偏低 . 小衛(wèi)星 (minisatellite) DNA(核心序列 1070bp) 微衛(wèi)星 (microsatellite)DNA(核心序列 26bp) 通過 PCR可以檢測(cè)到。 DNA多態(tài)性的遺傳與變異 1。 DNA多態(tài)性在遺傳過程中仍然會(huì)出現(xiàn)變異。 16 fully validated for CODIS/NDIS casework and database applications ? PowerPlex174。 乙二胺四乙酸 （ EDTA） , Captan 殺真菌劑 ,