《基因工程工具酶》ppt課件-預(yù)覽頁(yè)
【正文】 的外源 DNA(如噬菌體 DNA等 )，使得外源DNA對(duì)生物細(xì)胞的入侵受到限制； 而生物細(xì)胞 (如宿主 )自身 DNA分子通過(guò)甲基化酶的作用，在堿基特定位置上發(fā)生了甲基化，可免遭自身限制性內(nèi)切酶的破壞。第二章 基因工程工具酶 ? 自然界的許多微生物體內(nèi)存在著一些具有特異功能的酶類 。 基因工程的工具酶（ instrumental enzyme of gene engineering）是應(yīng)用于基因工程各種酶的總稱，包括核酸序列分析、標(biāo)記探針制備、載體構(gòu)建、目的基因制取、重組體 DNA制備等所需要的酶類。 功能：降解不同源 DNA， 而不降解同源 DNA。如果從同一菌株分離到多種酶，則依次用羅馬數(shù)字 I、 II、 III、 IV來(lái)表示。 絕大多數(shù)的 Ⅱ 型限制性核酸內(nèi)切酶都能夠識(shí)別由 4~8個(gè)核苷酸組成的特定的核苷酸序列。 A B C C’ B’ A’ A’ B’ C’ C B A A’ B’ N’ B A A B N B’ A’ A B B’ A’ A B B’ A’ 或 或 ? 回文結(jié)構(gòu)（ palindrome）：序列正讀和反讀是一樣的，即有一個(gè)中心對(duì)稱軸，從這個(gè)軸朝兩個(gè)方向讀序列是完全一樣的。 環(huán)狀 DNA分子上，若某種限制性內(nèi)切酶有 n個(gè)識(shí)別序列，則完全切割后可獲得 n個(gè)片段。 產(chǎn)生同樣的切割 ， 形成同樣的末端 。 如 BamH I 、 BclI、 BglII和 Xho I 是一組同尾酶。 限制性內(nèi)切酶不會(huì)切割僅含有識(shí)別序列的寡核苷酸時(shí)，識(shí)別序列兩端必須要有若干個(gè)核苷酸才能切割。 ? buffer （ pH=） ： ? 50mmol/L TrisHCl 10mmol/L MgCl2 ? 1mmol/L DTT或巰基乙醇 100μg BSA/ml ? （ DDT：二硫蘇糖醇 BSA：牛血清蛋白 ) DNA濃度高 ， 則酶的用量高；識(shí)別序列出現(xiàn)的頻率高 ， 酶的用量也要高 。 生產(chǎn)廠家的目錄中會(huì)提供不同緩沖液中酶活力的詳
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