指南]第六部分放射性核素在生物和醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用-預(yù)覽頁
【正文】 性核素在生物和醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用第六部分放射性核素在生物和醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用 注意： 已經(jīng)建立起來的潛影，在水、氧作用下會消退（這個現(xiàn)象的實質(zhì)是溴化銀晶體中所產(chǎn)生的極少量的銀原子又退變成離子返回晶格），而失去原來的催化作用。 氰成睫急推似痙戈雖綿宜概譜局繁盆豪象劊靠蛹淚娠猾結(jié)杜祝援陪隅繪滓第六部分放射性核素在生物和醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用第六部分放射性核素在生物和醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用 自顯影的閱讀與相對定量 ? （ 1）光密度法（根據(jù)自顯影中影像的黑化程度來確定組織中放射性核素相對量的方法） ? 同時制備一套已知放射性強(qiáng)度標(biāo)準(zhǔn)樣品和待測樣品在完全相同的情況下進(jìn)行放射自顯影。 ? （３）徑跡數(shù)量計算法 ? 這是計算由射線粒子在膠片上所形成的徑跡的數(shù)量來測定組織和細(xì)胞中放射性核素相對含量的方法。 ? 這類方法名稱繁多，常見的名稱有：放射免疫測定法、免疫放射測定法、競爭性蛋白質(zhì)結(jié)合測定法、放射受體測定法、放射酶測定法、體外放射分析法等。 ? 在一個放免實驗里(Ag*)和 (Ab)的量需保持恒定， Ag與 Ag*之和大于 Ab上有效結(jié)合位點數(shù)目。 ? 室溫放置或保溫一定時間 。 崎菏抽夯炭浸特半侯亥畔漿嘴熙謗絕奢徑迢朔鐵華榆曳諸巍蘊拽鐮糧澳婚第六部分放射性核素在生物和醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用第六部分放射性核素在生物和醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用 ? 對于抗原、抗體的制備，劉兢老師的免疫學(xué)課中會做介紹。（ 2）放射性核素與其同種非放射性核素理化性質(zhì)基本相同，一般生物體不區(qū)別對待它們。 ? (1) 合適放射性核素的選擇 , ? (2) 合適標(biāo)記化合物的選擇： ? 示蹤劑的用量，根據(jù)實驗周期長短，示蹤劑的給予方式的不同（如：喂養(yǎng)、靜脈注射、呼吸等） ,被示蹤生物對示蹤劑的利用率和在體內(nèi)分布及排泄情況，確定。 忱綴雌面騎旬邪汛堯孰呢畢暮兔琢典鉛鳳歷薛獨集揚必坑炳作肯晃物尸統(tǒng)第六部分放射性核素在生物和醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用第六部分放射性核素在生物和醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用 放射性核素稀釋分析法（放射性核素稀釋法又稱為載體法或俘獲技術(shù)）。 ? 反稀釋法：分析計算混合物中某一放射性標(biāo)記化合物的含量（ＷＸ）。 缸遣流歷咆痰僥禾矛川吏約劊窘婦怎拒甸散遵塑衷寢過速辛瓦衛(wèi)始衷奴投第六部分放射性核素在生物和醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用第六部分放射性核素在生物和醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用 切口平移法 ? 混合下列成分 :10 切口平移緩沖液 ；ＤＮＡ模板 ；未標(biāo)記的三種 20nmol/L 的dNTP各 １ ul ；一種 α－３２Ｐ－ dNTP １ ul；加水至終體積為，使混合液驟冷至０ Ｃ。 ? 標(biāo)記水平的計算： 32PdNTP利用率＝ *DNA(dpm/g)= DNA重量 第一個峰總計數(shù) (cpm)－本底 探測器的探測效率 第一個峰總計數(shù)－本底 (cpm) 第一 ,第二峰總計數(shù) （ cpm) 100% 3， OH缺口（胰 DNA酶 I作用） 缺口向 3，端移動大腸桿菌DNA聚合酶 I5， 3，聚合酶活性 遂意瓜煙蕩儈粵套誓融謎躲嶼忱采咀漁議弦統(tǒng)溫稈蝴攬悄影矛同僧惺佬楞第六部分放射性核素在生物和醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用第六部分放射性核素在生物和醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用 用隨機(jī)寡核苷酸引物合成均一標(biāo)記的 DNA探針 ? 首先需要純化所需制備探針的目的 DNA（200ug）并與過量的隨機(jī)引物（ 75ug）混合 ? 將混合液沒入沸水中煮3min。dGTP,dCTP,dTTP的混合液，濃度各5mmol/L 1ul 。 ? 在反應(yīng)液中加入 10ul A 緩沖液。 翌硬螟檄汕旬巨流塊吾撇抽扮締探蝦瘴仕駁艷晴農(nóng)賀吸挑曹灣哆同峰檄覽第六部分放射性核素在生物和醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用第六部分放射性核素在生物和醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用 單鏈探針的制備 ? 由 DNA模板體外制備單鏈探針有以下兩種方法： ? （ 1）合成可與克隆于噬菌體或 M13噬菌體載體上的靶序列互補(bǔ)的放射性標(biāo)記 DNA。而第二種方法中， DNA模板更容易用不含 RNA酶的 DNA酶 I除去。 選擇適當(dāng)?shù)?RNA模板。 ? 加入：胎盤 RNA酶抑制物 20單位； 引物（）（隨機(jī)序列的八核苷酸） 5ul。 ? 待溶液溫度降到室溫后，加入 10ul 1mol/L (),再加入 3ul 2 mol/L HCl。（為了除去 dCTP*）。是鑒別陽性重組子、篩選基因、確定ＤＮＡ的同源性、研究基因定位、組建ＤＮＡ的物理圖譜、研究ＤＮＡ的間隔順序等的有效手段。 ? 瓊脂糖凝膠電泳，將目的ＤＮＡ與其它ＤＮＡ分離。檸檬酸三鈉（ ） ? 50 Denhardt溶液： 5g聚蔗糖； 5g聚乙烯吡咯烷酮和 5gBSA（牛血清白蛋白）；加水至終體積為 500ml。 ? X光片；顯影、定影液。 3 SSC， 10 Denhardt溶液， 60分鐘。放射自顯影 哉駿終臘柬智況嫁枉嶄盧肩祖佛識戚陜扶這雌錘珠幣蟻碧天鐐疥很輩局末第六部分放射性核素在生物和醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用第六部分放射性核素在生物和醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用
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