膠體金快速免疫診斷技術(shù)-全文預(yù)覽
【正文】 :BIODOT XYZ系列噴點(diǎn)儀器),C\T線溶液前處理: 1.過濾,0.22um孔徑濾膜 2.離心1萬轉(zhuǎn)10分鐘 C\T線噴點(diǎn)工藝與接觸劃點(diǎn)工藝比較 因劃膜式為軟管將抗體劃到膜表面,而膜本身的物理性質(zhì)為軟脆,劃管會(huì)在其表面留下印痕.劃痕容易對(duì)層析的金標(biāo)復(fù)合物形成阻力,導(dǎo)致假陽性。 （生產(chǎn)階段）,選擇NC膜,NC膜的選擇 爬速(???秒/4cm)對(duì)靈敏度的影響 通過同一T線噴點(diǎn)位置時(shí), 金溶液通過的速度是快速膜慢速膜. 那么通過速度越快和包被在T線的物質(zhì)反應(yīng)時(shí)間也就越短, 讀數(shù)快, 那么靈敏度也就越低. 反之, 反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng), 讀數(shù)慢, 也就靈敏度高。 金標(biāo)記蛋白的特異性與敏感性測(cè)定：采用微孔濾膜免疫金銀染色法?；蛴么姿徕檹?fù)染后觀察。 ⑥包被后的金溶膠也可濃縮后于Sephadex G200柱進(jìn)行凝膠層析分離純化，以含 0.1%BSA的緩沖溶液洗脫。 ②于100ml 金溶膠中加入最佳標(biāo)記量的蛋白質(zhì)溶液攪拌2～3分鐘。 膠體金與蛋白質(zhì)偶聯(lián)后，加入穩(wěn)定劑，以避免產(chǎn)生凝集。如果膠體金的pH值低于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)時(shí)，則會(huì)聚集而失去結(jié)合能力。 蛋白質(zhì)的預(yù)處理: 1.蛋白質(zhì)應(yīng)先對(duì)低離子強(qiáng)度的水透析，去除鹽類成份。同時(shí)良好的膠體金應(yīng)該是清澈透明的，若渾濁或有漂浮物提示有較多的凝集顆粒。將玻璃容器浸泡于５％二氯二甲硅烷的氯仿溶液中１分鐘，室溫干燥后蒸餾水沖洗，再干燥備用 。無效：質(zhì)控區(qū)未出現(xiàn)紫紅色條帶，表明不正確的操作過程或試劑盒已變質(zhì)損壞。陰性（）：?jiǎn)岱仍?00ng/ml以下。,免疫層析法檢測(cè)原理分類介紹 （競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)）,（以嗎啡檢測(cè)為例）,嗎啡偶聯(lián)物和膠體金標(biāo)記的抗嗎啡單克隆抗體固定于膜上測(cè)試區(qū)。在硝酸纖維素膜檢測(cè)區(qū)附近一般再固定上針對(duì)金標(biāo)結(jié)合物相應(yīng)的抗原或抗體作為質(zhì)控帶，無論樣品中有無待測(cè)物，質(zhì)控線都應(yīng)顯示，如無，則檢測(cè)失敗。⑷、吸水紙。免疫層析快速診斷技術(shù),層析法技術(shù)優(yōu)勢(shì):簡(jiǎn)單\現(xiàn)場(chǎng)\快速,1.打開包裝取出試紙條,2.直接插入待測(cè)樣品中,3. 目測(cè)讀出結(jié)果（310分鐘內(nèi)）,與常規(guī)診斷方法相比,技術(shù)應(yīng)用,試紙條組成結(jié)構(gòu),測(cè)試線 （T線）,控制線（C線）,膠體金墊,吸水濾紙,樣品墊,NC膜（硝酸纖維素膜）,層析方向,PVC底板,有4個(gè)組分：⑴、吸水紙（樣品墊）。⑶、硝酸纖維素膜，膜上包被著抗原或抗體條帶和能與標(biāo)記物直接起反應(yīng)的質(zhì)控物條帶（檢測(cè)帶）。如樣品中沒有待測(cè)抗原或抗體，則不發(fā)生結(jié)合，即不顯色。,免疫層析法檢測(cè)原理分類介紹 （雙抗體夾心）,（以HCG檢測(cè)為例）,HCGβ亞基抗體Y2，羊抗鼠二抗固定于硝酸纖維素膜上，金標(biāo)HCGα亞基單抗Y1固定于玻璃纖維素膜上。嗎啡濃度高于300ng/ml時(shí)，膠體金抗體與嗎啡全部結(jié)合，從而不與嗎啡偶聯(lián)物結(jié)合而不出現(xiàn)紫紅色條帶。這樣，膠體金抗體在層析過程中會(huì)被固定在膜上的嗎啡偶聯(lián)物結(jié)合，測(cè)試區(qū)內(nèi)會(huì)出現(xiàn)一條紫紅色條帶。,容器硅化處理：玻璃表面少量的污染會(huì)干擾膠體金 顆粒的生成，一切玻璃容器應(yīng)絕對(duì)清潔，用前經(jīng)過酸洗、硅化。這樣制成的膠體金顆粒則分別為15nm、18～20nm、41nm和50nm 顏色與顆粒的關(guān)系.最佳標(biāo)記顆粒大小40nm.,1％檸檬酸三鈉ml 0.30 0.45 0.70 1.00 1.50 2.00 金溶膠顏色 藍(lán)灰 紫灰 紫紅 紅 橙紅 橙
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