【正文】 已滅過菌的牛皮紙袋內(nèi)．封好袋口，并記錄取樣地點(diǎn)、環(huán)境及日期。為了防止菌絲蔓延干擾菌落計(jì)數(shù)，分離霉菌時(shí)常在培養(yǎng)基中加入化學(xué)抑制劑。其次，應(yīng)考慮各類微生物的不同特性，避免樣品中各類微生物的相互干擾。一般在較干燥，偏堿性、有機(jī)質(zhì)豐富的土壤中放線苗數(shù)量較多；酵母菌在一般土壤中的數(shù)量較少，而在水果表皮、葡萄園、果園土中數(shù)量多些。3．學(xué)習(xí)并掌握平板傾注法和斜面接種技術(shù)，了解培養(yǎng)細(xì)菌、放線菌、酵母菌及霉菌四大類微生物的培養(yǎng)條件和培養(yǎng)時(shí)間。其進(jìn)行混合酸發(fā)酵，故甲基紅試驗(yàn)為陽性。甲基紅試劑、。大腸桿菌不產(chǎn)生丁二醇。細(xì)菌的這種代謝方式可供鑒別細(xì)菌之用。細(xì)菌的菌落為濕潤，其正反面顏色一般一致，普遍比較小。只有一個(gè)濃度符合此范圍時(shí)，以該平均菌落數(shù)為準(zhǔn)；有兩個(gè)濃度的平板菌落數(shù)在30－300之間時(shí)，按兩者的總數(shù)平均決定，比值小于2，取平均，比值大于2則取較少的菌落總數(shù)。同法得10－4－10－6土壤溶液用接種環(huán)沾取102土壤懸液在已經(jīng)凝固的平板表面進(jìn)行劃線分離，用無菌涂棒涂勻（多涂幾遍）。統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)，根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣接種量即可換算出樣品含菌量。（保留小數(shù)點(diǎn)后2位）長軸＝血細(xì)胞計(jì)數(shù)板對(duì)酵母菌懸液計(jì)數(shù)結(jié)果 實(shí)驗(yàn)次數(shù) 各中格中菌數(shù) 總菌數(shù) 稀釋倍數(shù)平均值菌數(shù)(個(gè)/mL)1短軸＝〔實(shí)驗(yàn)討論〕作業(yè)：，必須用鏡臺(tái)測(cè)微尺重新對(duì)目鏡測(cè)微尺校正。5）特殊結(jié)構(gòu)：足細(xì)胞 特殊結(jié)構(gòu)：假根〔實(shí)驗(yàn)討論〕作業(yè)：繪圖說明所觀察到的酵母菌、霉菌的形態(tài)特征。5）放大倍數(shù)：100179。10（179。〔材料用具〕釀酒酵母、紅酵母、假絲酵母；(釀酒酵母和紅酵母菌落平板各一個(gè)。作業(yè)：記錄培養(yǎng)基的成分和名稱分析所配制培養(yǎng)基的碳源、氮源、能源及無機(jī)鹽、維生素的來源。(六)斜面和平板的制作（下次試驗(yàn)完成）(七)培養(yǎng)基的無菌檢查（下次實(shí)驗(yàn)完成）(八)無菌水的制備 同時(shí)制作無菌生理鹽水，置錐形瓶中備用。150平口試管或150mL錐形瓶貼上標(biāo)簽分裝（至試管高度1/41/3，斜面制作用1/5，半固體用1/3）要求：每人制作斜面3支。藥匙、稱量紙、pH試紙、記號(hào)筆、棉花、紗布、線繩、塑料試管蓋、牛皮紙報(bào)紙等。怎樣對(duì)未知菌進(jìn)行革蘭氏染色，以證明你的結(jié)果的正確？與已知菌混合涂片比較。5）染色反應(yīng)：紫色（陽性）圖1 視野觀察下細(xì)菌的革蘭氏染色反應(yīng)圖2 枯草芽孢桿菌芽孢形態(tài)圖〔實(shí)驗(yàn)討論〕嚴(yán)格掌握脫色程度，是成敗的關(guān)鍵。5）放大倍數(shù)：100179。實(shí)驗(yàn)二 細(xì)菌的革氏染色與芽孢染色〔目的要求〕觀察細(xì)菌菌落的特征；掌握簡單染色法、革蘭氏染色法的原理及操作步驟；在油鏡下觀察細(xì)菌個(gè)體形態(tài)；學(xué)習(xí)環(huán)境中微生物的檢查方法，并加深對(duì)微生物分布廣泛性的認(rèn)識(shí)〔器材用具〕（18－24小時(shí)）以及菌落平板各一個(gè)；染液：草酸銨結(jié)晶紫、劃蘭氏染液、盧戈氏碘、95%的乙醇、蕃紅；無菌水、顯微鏡、載片、濾紙、液體石蠟是、擦鏡紙、接種環(huán)。5）放大倍數(shù)：100179?！卜椒ú襟E〕：（一）油鏡的使用鏡檢裝片在中倍（或高倍鏡）下找到目的物，并使位于視野正中聚光鏡上升到最高位置，虹彩光圈開到最大，鏡頭轉(zhuǎn)開成八字形在玻片的鏡檢部位（光斑處）滴一滴香柏油油鏡轉(zhuǎn)入正下方側(cè)視小心上升載物臺(tái)（縮短鏡頭與裝片距離，鏡頭浸入油中，至油圈不擴(kuò)大為止鏡頭幾與裝片接觸）粗調(diào)器徐徐下降載物臺(tái)（密切注視視野，當(dāng)捕捉到物像時(shí)，立即用細(xì)調(diào)器校正）仔細(xì)觀察并繪圖取出裝片，清洗油鏡：擦鏡紙拭去鏡頭上的香柏油擦鏡紙沾少許二甲苯擦去殘留（用手指輔助，迅速拭擦一、二次）用清潔擦鏡紙仔細(xì)擦干二甲苯（23次）。sinα=λ/，但有效放大率取決于鏡口率。4隨著水體的自凈，有機(jī)物缺乏和其他原因（例如陽光照射，溫度，PH變化，毒物及生物的抗?jié)嵶饔玫龋┦辜?xì)菌死亡。3水體中溶解氧在異樣菌分解有機(jī)物時(shí)被消耗，大氣中的氧剛?cè)苡谒捅谎杆儆玫簦M管水中藻類在白天進(jìn)行光合作用放出氧氣，但復(fù)氧速率小于耗氧速率，氧垂曲線下降。92)基因工程操作分5步：1先從供體細(xì)胞中選擇獲取帶有目的基因的DNA片段（基因分離）； 2將目的DNA的片段和質(zhì)粒在體外重組；（體外重組）3將重組體轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞（載體傳遞）；4重組體克隆的篩選與鑒定（復(fù)制表達(dá)）；5外源基因表達(dá)產(chǎn)物的分離與提純（篩選，繁殖）93）天然淡水水體是人類生活和工業(yè)生產(chǎn)用水的水源，也是水生動(dòng)物和植物生長繁殖的場所。90)質(zhì)粒：質(zhì)粒在原核微生物中除有染色體外，還含有另一種較小的，攜帶少量遺傳基因的環(huán)狀DNA分子，稱為質(zhì)粒，也叫染色體外DNA。雜交是通過雙親細(xì)胞的融合，使整套染色體的基因重組；或者是通過雙親細(xì)胞的溝通，使部分染色體基因重組。85)誘發(fā)突變：誘發(fā)突變是利用物理或化學(xué)的因素處理微生物群體，促使少數(shù)個(gè)體細(xì)胞的DNA分子結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，在基因內(nèi)部堿基配對(duì)發(fā)生錯(cuò)差，引起微生物的遺傳性狀發(fā)生突變。82)遺傳和變異的物質(zhì)基礎(chǔ)DNA：P203 83)基因突變：基因突變即微生物的DNA被某種因素引起堿基的缺失，置換或插入，改變了基因內(nèi)部原有的堿基排列順序，從而引起其后代表現(xiàn)型的改變。土壤中微生物的垂直分布與紫外輻射的照射，營養(yǎng)，水，溫度等因素有關(guān)。76)寄生關(guān)系：一種生物需要在另一種生物體內(nèi)生活，從中社區(qū)營養(yǎng)才得以生長繁殖，這種關(guān)系成為寄生關(guān)系。一種微生物在代謝過程中產(chǎn)生一些代謝產(chǎn)物，其中有的產(chǎn)物對(duì)一種（或一類）微生物生長不利，或者抑制或者殺死對(duì)方。72)原始合作關(guān)系：原始合作關(guān)系是指兩種可以單獨(dú)生活的生物共存于同一環(huán)境中，相互提供營養(yǎng)及其他生活條件，雙方互為有利，相互受益。70)微生物之間的關(guān)系：微生物之間的關(guān)系有種內(nèi)的關(guān)系和種間的關(guān)系。65）生長曲線：66)微生物的生存因子：微生物除了需要營養(yǎng)外，還需要環(huán)境中合適的生存因子，例如：溫度，PH，氧化還原電位，溶解氧，太陽輻射，活度與滲透壓，表面張力等。需要代謝能量。這一過程需要滲透酶和消耗能量。58)促進(jìn)擴(kuò)散：細(xì)胞膜上的載體蛋白分子有和被運(yùn)輸物質(zhì)特異結(jié)合的位置，這樣載體在膜的外表面能夠和物質(zhì)結(jié)合，形成的底物載體蛋白復(fù)合體，便從高濃度向低濃度區(qū)域擴(kuò)散或越膜。液體培養(yǎng)基，半固體培養(yǎng)基，固體培養(yǎng)基。53)培養(yǎng)基。分為無機(jī)離子激活劑和有機(jī)化合物兩類。39）傘菌：無毒的有機(jī)廢水可用于培養(yǎng)食用菌的菌絲體。氧化型的酵母菌則是無發(fā)酵能力或發(fā)酵能力弱而氧化能力強(qiáng)的酵母菌。P84 34）真菌：真菌屬低等生物，種類繁多，形態(tài)，大小各異，包括酵母菌，霉菌及各種傘菌。31）主要的原生動(dòng)物：P71 32）微型后生動(dòng)物：原生動(dòng)物以外的多細(xì)胞動(dòng)物叫后生動(dòng)物。分為三類營養(yǎng)菌絲，氣生菌絲，孢子絲。革蘭氏陽性菌的等電點(diǎn)低，與草酸銨結(jié)晶紫結(jié)合的牢固，對(duì)乙醇脫色抵抗力強(qiáng)，所以革蘭氏陽性菌呈紫色。3用碘碘化鉀溶液媒染1MIN，傾去多余染液。合成蛋白質(zhì)20）擬核：細(xì)胞的核因沒有核膜和核仁，故稱為原始核或擬核。脂質(zhì)是由磷脂，甘油，脂肪酸和含氮堿組成。15）細(xì)胞壁：細(xì)胞壁是包圍在細(xì)菌體表最外層的，堅(jiān)韌而有彈性的薄膜。分別稱為球菌，桿菌，螺旋菌和絲狀菌。含有溫和噬菌體宿主細(xì)胞被稱作溶原細(xì)胞。8）朊病毒：朊病毒是一種引起牛，羊疾病的感染因子（蛋白質(zhì)感染顆粒）。沒有核糖體，沒有酶系統(tǒng)，不具備代謝能力，必須專性寄生在活的敏感宿主細(xì)胞內(nèi)。(3)次生代謝產(chǎn)物的大量積累在哪個(gè)時(shí)期？根據(jù)細(xì)菌生長繁殖的規(guī)律，采用哪些措施可使次生代謝產(chǎn)物積累更多？評(píng)論這張第三篇：環(huán)境微生物學(xué)一．緒論1）微生物：微生物是肉眼看不見的，必須在電子顯微鏡或光學(xué)顯微鏡下才能看見的所有微小生物的總稱。該方法準(zhǔn)確度高、操作簡便。從早取出的培養(yǎng)液開始依次測(cè)定，對(duì)細(xì)胞密度大的培養(yǎng)液用LB液體培養(yǎng)基適當(dāng)稀釋后測(cè)定，~(測(cè)定OD值前，將待測(cè)定的培養(yǎng)液振蕩，使細(xì)胞均勻分布)。圖15—6 直接用試管測(cè)OD值(四)操作步驟1．標(biāo)記取11支無菌大試管，用記號(hào)筆分別標(biāo)明培養(yǎng)時(shí)間，即0、1116和20h。如圖15—6所示，只要接種1支試管或1個(gè)帶測(cè)定管的三角瓶，在不同的培養(yǎng)時(shí)間(橫坐標(biāo))取樣測(cè)定，以測(cè)得的klett units為縱坐標(biāo)，便可很方便地繪制出細(xì)菌的生長曲線。測(cè)定細(xì)菌的生長曲線，了解其生長繁殖規(guī)律，這對(duì)人們根據(jù)不同的需要，有效地利用和控制細(xì)菌的生長具有重要意義。(二)基本原理大多數(shù)細(xì)菌的繁殖速率很快，在合適的條件下，一定時(shí)期的大腸桿菌細(xì)胞每20min分裂一次。各種操作條件必須與制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)的相同，否則，測(cè)得值所換算的含菌數(shù)就不準(zhǔn)確。（3）測(cè)OD值 將1至7號(hào)不同濃度的菌懸液搖均勻后于560nm波長、1cm比色皿中測(cè)定OD值。圖15—4 比濁法測(cè)定細(xì)胞濃度的原理（三）器材1．菌種 釀酒酵母培養(yǎng)液2．儀器或其他用具 721型分光光度計(jì)，血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，顯微鏡，試管，吸水紙，無菌吸管，無菌生理鹽水等。但是，由于光密度或透光度除了受菌體濃度影響之外，還受細(xì)胞大小、形態(tài)、培養(yǎng)液成分以及所采用的光波長等因素的影響。然后，以樣品液所測(cè)得的光密度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查出對(duì)應(yīng)的菌數(shù)。2．學(xué)習(xí)、掌握光電比濁計(jì)數(shù)法的操作方法。二者操作基本相同，所不同的是后者先將牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基融化后倒平板，待凝固后編號(hào)，并于37℃左右的溫箱中烘烤30min，或在超靜工作臺(tái)上適當(dāng)吹干，然后用無菌吸管吸取稀釋好的菌液對(duì)號(hào)接種于不同稀釋度編號(hào)的平板上，并盡快用無菌玻璃涂棒將菌液在平板上涂布均勻，平放于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上20～30min，使菌液滲入培養(yǎng)基表層內(nèi)，然后倒置37℃的恒溫箱中培養(yǎng)24～48h。由1010106三個(gè)稀釋度計(jì)算出的每毫升菌液中菌落形成單位數(shù)也不應(yīng)相差太大。待培養(yǎng)基凝固后，將平板倒置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。的稀釋菌懸液各lmL，對(duì)號(hào)放入編好號(hào)的無菌平皿中。用此吸管吸取101菌液lmL，此即為100倍稀釋。將多余的菌液放回原菌液中。（四）操作步驟l．編號(hào)取無菌平皿9套，分別用記號(hào)筆標(biāo)明1010106。平板菌落計(jì)數(shù)法雖然操作較繁，結(jié)果需要培養(yǎng)一段時(shí)間才能取得，而且測(cè)定結(jié)果易受多種因素的影響，但是，由于該計(jì)數(shù)方法的最大優(yōu)點(diǎn)是可以獲得活菌的信息，所以被廣泛用于生物制品檢驗(yàn)(如活菌制劑)，以及食品、飲料和水(包括水源水)等的含菌指數(shù)或污染程度的檢測(cè)。統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)，根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣接種量即可換算出樣品中的含菌數(shù)。A表示五個(gè)中方格中的總菌數(shù)；B表示菌液稀釋倍數(shù)。5．清洗血細(xì)胞計(jì)數(shù)板使用完畢后，將血細(xì)胞計(jì)數(shù)板在水龍頭用水沖洗干凈，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用吹風(fēng)機(jī)吹干。每個(gè)計(jì)數(shù)室選5個(gè)中格(可選4個(gè)角和中央的一個(gè)中格)中的菌體進(jìn)行計(jì)數(shù)。4．顯微鏡計(jì)數(shù)加樣后靜止5min，然后將血細(xì)胞計(jì)數(shù)板置于顯微鏡載物臺(tái)上，先用低倍鏡找到計(jì)數(shù)室所在位置，然后換成高倍鏡進(jìn)行計(jì)數(shù)。2．鏡檢計(jì)數(shù)室在加樣前，先對(duì)計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室進(jìn)行鏡檢。設(shè)五個(gè)中方格中的總菌數(shù)為A，菌液稀釋倍數(shù)為B，如果是25個(gè)中方格的計(jì)數(shù)板，則1mL菌液中的總菌數(shù)=A/525104B=50000A血細(xì)胞計(jì)數(shù)板構(gòu)造如圖l51。本實(shí)驗(yàn)以血球計(jì)數(shù)板為例進(jìn)行顯微鏡直接計(jì)數(shù)。除了用這些計(jì)菌器外，還有在顯微鏡下直接觀察涂片面積與視野面積之比的估算法，此法一般用于牛乳的細(xì)菌學(xué)檢查。2．掌握使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)的方法。測(cè)定細(xì)胞物質(zhì)的方法有細(xì)胞干重的測(cè)定，細(xì)胞某種成分如氮的含量、RNA和DNA的含量測(cè)定，代謝產(chǎn)物的測(cè)定等。4．5．病毒屬于必須在內(nèi)寄生，對(duì)不敏感，對(duì)敏感。3．1956年我國學(xué)者表現(xiàn)為不同的存在形式，一種是，一種是。測(cè)定細(xì)胞數(shù)目的方法有顯微鏡直接計(jì)數(shù)法(direct microscopic count)、平板菌落計(jì)數(shù)法(plate count)、光電比油法(turbidity estimation by spectrophotometer)、最大或然數(shù)法(most probable number MPN)以及膜過濾法(membrane filtration)等。一 顯微鏡直接計(jì)數(shù)法（一）目的要求1．明確血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)的原理。后兩種計(jì)菌器由于蓋上蓋玻片后，因此可用油浸物鏡對(duì)細(xì)菌等較小的細(xì)胞進(jìn)行觀察和計(jì)數(shù)。目前已有一些方法可以克服這一缺點(diǎn)，如結(jié)合活菌染色微室培養(yǎng)（短時(shí)間）以及加細(xì)胞分裂抑制劑等方法來達(dá)到只計(jì)數(shù)活菌體的目的。該計(jì)數(shù)板是一塊特制的載玻片，其上由四條槽構(gòu)成三個(gè)平臺(tái)；中間較寬的平臺(tái)又被一短橫槽隔成兩半，每一邊的平臺(tái)上各列有一個(gè)方格網(wǎng)，每個(gè)方格網(wǎng)共分為九個(gè)大方格，中間的大方格即為計(jì)數(shù)室。圖15—1 血細(xì)胞計(jì)數(shù)板構(gòu)造（一）圖15—2 血細(xì)胞計(jì)數(shù)板構(gòu)造（二）；； 放大后的方格網(wǎng)，中間大方格為計(jì)數(shù)室；；計(jì)數(shù)時(shí)，通常數(shù)五個(gè)中方格的總菌數(shù)，然后求得每個(gè)中方格的平均值，再乘上25或16，就得出一個(gè)大方格中的總菌數(shù)，然后再換算成lml菌液中的總菌數(shù)。（四）操作步驟l．菌懸液制備以無菌生理鹽水將釀酒酵母制成濃度適當(dāng)?shù)木鷳乙?。取樣時(shí)先要搖勻菌液；加樣時(shí)計(jì)數(shù)室不可有氣泡產(chǎn)生。一般樣品稀釋度要求每小格內(nèi)約有5~10個(gè)菌體為宜。計(jì)數(shù)一個(gè)樣品要從兩個(gè)計(jì)數(shù)室中計(jì)得的平均數(shù)值來計(jì)算樣品的含菌量。（五）實(shí)驗(yàn)報(bào)告l．結(jié)果將結(jié)果記錄于下表中。（二）、基本原理平板菌落計(jì)數(shù)法是將待測(cè)樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋之后，其中的微生物充分分散成單個(gè)細(xì)胞，取一定量的稀釋樣液接種到平板上，經(jīng)過培養(yǎng)，由每個(gè)單細(xì)胞生長繁殖而形成肉眼可見的菌落，即一個(gè)單菌落應(yīng)代表原樣品中的一個(gè)單細(xì)胞。為了清楚地闡述平板菌落計(jì)數(shù)的結(jié)果，現(xiàn)在已傾向使用菌落形成單位(colonyforming units，cfu)而不以絕對(duì)菌落數(shù)來表示樣品的活菌含量。3．儀器或其他用具lm1無菌吸管，無菌平皿，試管架，恒溫培養(yǎng)箱等。2．稀釋用lmL無菌吸管吸取lmL已充分混勻的大腸桿菌菌縣液(待測(cè)樣品)，此即為10倍稀釋。吹吸菌液時(shí)不要太猛太快，吸時(shí)吸管伸人管底，吹時(shí)離開液面，以免將吸管中的過濾棉花浸濕或使試管內(nèi)液體外溢。3，取樣用三支1mL無菌吸管分別吸取10105和106。由于細(xì)菌易吸附到玻璃器皿表面，所以菌液加入到培養(yǎng)皿后，應(yīng)盡快倒入融化并于已冷卻至45℃左右的培養(yǎng)基，立即搖勻，否則細(xì)