定量分析方法的方法學(xué)驗(yàn)證-全文預(yù)覽
【正文】 的被測(cè)組分和內(nèi)標(biāo)樣品的混合物做色譜分析，測(cè)量峰面積，做重量比和面積比的關(guān)系曲線，此曲線即為標(biāo)準(zhǔn)曲線。化學(xué)方面的因素包括：內(nèi)標(biāo)物在樣品里混合不好；內(nèi)標(biāo)物和樣品組分之間發(fā)生反應(yīng)，內(nèi)標(biāo)物純度可變等。首先你要了解何為內(nèi)標(biāo)法內(nèi)標(biāo)法是一種間接或相對(duì)的校準(zhǔn)方法。外標(biāo)法簡(jiǎn)便，但進(jìn)樣量要求十分準(zhǔn)確，要嚴(yán)格控制在與標(biāo)準(zhǔn)物相同的操作條件下進(jìn)行，否則造成分析誤差，得不到準(zhǔn)確的測(cè)量結(jié)果。內(nèi)標(biāo)法是將一定量的純物質(zhì)作內(nèi)標(biāo)物，加入到準(zhǔn)確稱量的試樣中，根據(jù)被測(cè)試樣和內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量比及其相應(yīng)的色譜峰面積之比，來計(jì)算被測(cè)組分的含量。5次重復(fù)實(shí)驗(yàn)的 RSD范圍為 % ~ %, 回收率范圍為 % ~ %, 可以滿足定量需要。方法的線性關(guān)系及檢測(cè)限準(zhǔn)確稱取 7種目標(biāo)物的標(biāo)準(zhǔn)品, 用甲醇稀釋配制成 7種目標(biāo)物的標(biāo)準(zhǔn)溶液, 根據(jù)需要用甲醇分別稀釋配制成 5級(jí)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液, 濃度范圍如表 3所示,在選定的色譜條件下,分別進(jìn)樣分析。至于天與天之間的重現(xiàn)性也不應(yīng)大于10%、當(dāng)上述重復(fù)性滿足要求后，說明該方法在你的實(shí)驗(yàn)室是可靠的。如果樣品要經(jīng)過預(yù)處理，還應(yīng)測(cè)定同一樣品多次處理的重復(fù)性。重現(xiàn)性和重復(fù)性都用多次分析所得結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)來表示。與此近似的另一個(gè)術(shù)語是重復(fù)性(repeatability)，常指同一個(gè)人在同一臺(tái)儀器上重復(fù)進(jìn)樣所得結(jié)果的一致性。處理后測(cè)得的組分含量與處理前加入量的比率乘以100就得到了回收率?；厥章士捎孟率龊?jiǎn)單方法測(cè)定：配置一定濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品，將其兩等分，其中一份按方法步驟進(jìn)行預(yù)處理，然后用GC分析。如果樣品未經(jīng)任何預(yù)處理，則回收率一般可不考慮。作為分析方法，檢測(cè)限無疑是越低越好。憶驗(yàn)證定量方法時(shí)，還將10倍信噪比所對(duì)應(yīng)的樣品濃度叫做最小定量限，當(dāng)用于法規(guī)分析時(shí)，這一數(shù)據(jù)應(yīng)等于或低于法規(guī)方法所要求的實(shí)際樣品中待測(cè)組分的最低允許濃度。當(dāng)相關(guān)系數(shù)大于0．99時(shí)，就可認(rèn)為足線性的，小于0．99時(shí)，就超出了線性范圍。1．方法的線性范圍即檢測(cè)器響應(yīng)值與樣品量(濃度)成正比的線性范圍，它主要由檢測(cè)器的特性所決定。通過后有動(dòng)態(tài)批送檢，合格就送到國(guó)家局 等批件，這就要很久了 穩(wěn)定性考察還要繼續(xù)進(jìn)行一般長(zhǎng)期到36個(gè)月 上面是一個(gè)項(xiàng)目的主要流程、制劑還要進(jìn)行處方篩選，一般在小試、中試是進(jìn)行、方法學(xué)也在這個(gè)時(shí)候進(jìn)行（主要含量、有關(guān)物質(zhì)）固體還有釋放度，原料有殘留溶劑、其他已知雜質(zhì)都要有方法學(xué)的支持 針劑也要有處方的篩選、臨床稀釋液相容性、管道相容性固體分速釋、緩釋、口崩、混懸等這些都不同、從工藝到方法學(xué)都不同實(shí)驗(yàn)室的所有儀器都必須通過驗(yàn)證、校準(zhǔn)才能用、外教一般是華南計(jì)量所的每隔一年一次（液相兩年一次）這中間、每半年應(yīng)該有一次內(nèi)部校準(zhǔn)、每一年又一次驗(yàn)證（做了驗(yàn)證可不做內(nèi)角）紫外、紅外也一樣第三篇：色譜方法學(xué)驗(yàn)證色譜方法學(xué)驗(yàn)證所謂方法驗(yàn)證(validation，又叫認(rèn)證)就是要證明所開發(fā)方法的實(shí)用性和可靠性。薄層色譜的變動(dòng)因素有：不同廠牌的薄層板，點(diǎn)樣方式及薄層展開時(shí)溫度及相對(duì)濕度的變化等。如果測(cè)試條件要求苛刻，則應(yīng)在方法中寫明。常用信噪比法測(cè)定定量限。當(dāng)用 GC 和 HPLC 法時(shí)，可用已知低濃度樣品測(cè)出的信號(hào)與空白樣品測(cè)出的信號(hào)進(jìn)行比較，計(jì)算出能被可靠地檢測(cè)出的最低濃度或量。五，檢測(cè)限檢測(cè)限是指試樣中被測(cè)物質(zhì)能被檢測(cè)出的最低濃度或量。（reproducibility）是指在不同的實(shí)驗(yàn)室由不同分析人員測(cè)定結(jié)果的精密度。一般在一天之內(nèi)進(jìn)行的精密度考察稱為日內(nèi)精密度(interday variability)；在三天之內(nèi)進(jìn)行的精密度考察稱為日間精密度(intraday variability)。在規(guī)定范圍內(nèi)，取同一濃度的供試品，用 6 個(gè)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)；或設(shè)計(jì) 3 個(gè)不同濃度，每個(gè)濃度各分別制備 3 份供試品溶液進(jìn)行測(cè)定，用 9 個(gè)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)，一般中間濃度加入量與所取供試品含量之比控制在 l ∶ 1 左右，其他兩個(gè)濃度分別約為供試品含量的 80% 和 120%。可用已知純度的對(duì)照品做加樣回收率測(cè)定，即于已知被測(cè)成分含量的供試品中再精密加入一定量的已知純度的被測(cè)成分對(duì)照品，依法測(cè)定。對(duì)于有毒的、具特殊功效或藥理作用的成分，其范圍應(yīng)大于被限定含量的區(qū)間。用 HPLC 法測(cè)定時(shí)，以對(duì)照品配制一定濃度范圍的對(duì)照品系列溶液，濃度點(diǎn) n ＝ 5 ～ 7，用濃度 C 對(duì)峰高 h 或峰面積 A 或被測(cè)物與內(nèi)標(biāo)物的響應(yīng)值之比進(jìn)行線性回歸或非線性擬合（如 HPLCELSD），建立方程，方程的截距應(yīng)趨于零，相關(guān)系數(shù) r 應(yīng)大于 ?？捎靡毁A備液經(jīng)精密稀釋，制備一系列供試品的方法進(jìn)行測(cè)定，至少制備五份供試樣品；以測(cè)得的響應(yīng)信號(hào)對(duì)被測(cè)物濃度作圖，觀察是否呈線性，再用最小二乘法進(jìn)行線性回歸。第一篇：定量分析方法的方法學(xué)驗(yàn)證定量分析方法的方法學(xué)驗(yàn)證 定量分析方法的方法學(xué)驗(yàn)證定量分析方法驗(yàn)證的目的是證明采用的含量測(cè)定方法適合于相應(yīng)分析要求，在進(jìn)行定量分析方法學(xué)研究或起草藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，分析方法需經(jīng)驗(yàn)證。應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)測(cè)定線性關(guān)系。用 UV 法測(cè)定時(shí)，以對(duì)照品配制一定濃度范圍的對(duì)照品系列溶液，吸光度 A 一般在 ～ ，濃度點(diǎn) n ＝ 5，用濃度 C 對(duì) A 作線性回歸，得一直線方程，方程的截距應(yīng)接近于零，相關(guān)系數(shù) r 應(yīng)大于 。范圍應(yīng)根據(jù)分析方法的具體應(yīng)用和線性、準(zhǔn)確度、精密度結(jié)果及要求確定。用于定量測(cè)定的分析方法均需做準(zhǔn)確度驗(yàn)證。回收率 % = [(CA)/B]*100%式中，A 為供試品
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