【正文】 原核生物轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的加工 ? rRNA的加工 ? tRNA的加工 ? mRNA的加工 tRNA的加工 tRNA 基因 （ 1） 轉(zhuǎn)錄單元大多是 多基因 同一個 tRNA基因、不同 tRNA基因、與 rRNA基因 三磷酸 有兩個基因拷貝 間隔序列 （各長 350base） （ 2） 有兩種類型的前體 tRNA 基因： ? Ⅰ 型： 具 3’端 CCA序列，（ Prok. 的 tRNA多為 Ⅰ 型） 作 3’修復的信號和最后的界線； 酶的作用下切除 CCA下游一段序列 Ⅱ 型： 沒有 3’端 CCA序列，（少數(shù) Phage、 Euk.） 需要添加 CCA序列 . tRNA的加工 ? 1）剪切 ? 2）核苷修飾 ? 3） 3’末端加上 CCA ? 4) 5’末端單磷酸的產(chǎn)生 t R N AIl e t R N AA l a t R N AA s p t R N AT rp 1 6 S 2 3 S 5 S R N a s e I I I R N a s e I I I R N a s e I I I R N a s e I I I R N a s e R R N a s e R R N a s e R R N a s e R R N a s e R 圖 1 3 r R N A 的加工 RNA的甲基化核苷酸（堿基）修飾 m5C m6A HNH HNH O O HNH HN— CH3 H3C H H H H 常見 tRNA中的修飾核苷酸 Cmnm5U (5羧甲基氨甲基尿苷 ) mCm5U （ 5甲氧基羰甲基尿苷） Xm5s2U （ 5甲基 2硫代尿苷） K2C （ 2賴氨酸胞苷） Com5U （ 5(2)羥羧甲基尿苷） I （次黃嘌呤） m7G (7甲基鳥苷 ) m5C （ 5甲基胞苷） m6A （ 6甲基腺苷） s2C （ 2硫代胞苷） ψ (假尿苷） Um (2’ O甲基尿苷 ) D ( 雙氫尿嘧啶 ) Xo5U (5羥基尿苷 ) 參與 tRNA后加工的酶 （ 1） RNAaseP： 內(nèi)切核酸酶， 負責切割所有 tRNA分子的 5‘端。 ? mRNA很容易從 5’ P降解，有些生物的 mRNA 5’ P端被修飾保護，而不易降解。 ?λ噬菌體基因表達存在 抗終止作用。 2） ρ因子 a. 46KD，活性狀態(tài)是六聚體（ 275KD）。 不依賴 ρ因子的終止 （ 1） 結(jié)構(gòu)特征 : 一個 7~20 bp反向重復序列 IR ； IR內(nèi)富含 GC； 3’端上有 68個 U。 （ 2） RNA聚合酶在 DNA上的移動 速度不均勻 ，在經(jīng)過富含 的序列 8－ 10個核苷酸后，發(fā)生暫停，推測這和轉(zhuǎn)錄終止有關(guān)。 ? 始終保持三元復合物的結(jié)構(gòu) 延伸過程 1）轉(zhuǎn)錄泡： RNApol 結(jié)合和轉(zhuǎn)錄的 DNA模板區(qū)域，有 1217bp左右 DNA形成解鏈區(qū)。 1）原核生物 Prok. ? 起始后， ζ因子解離 , 核心酶構(gòu)象發(fā)生變化。 ? TFⅡ I 具有識別 Inr序列的功能 。 ? 轉(zhuǎn)錄起始過程需要很多 轉(zhuǎn)錄因子（ transcription factor, TF ）參與，按一定順序與 DNA形成復合物，協(xié)助 RNA pol定位于轉(zhuǎn)錄起始點。 ? RNApol II還不清楚是否有明確的終止元件。 ? 終止區(qū)域富含 RNA的二級結(jié)構(gòu) ，也可能有 終止因子 存在。 ? (3) 3’端寡聚 U數(shù)量不定； ? (4) 靠與 ρ的共同作用而實現(xiàn)終止 。 兩種終止子： ? 強終止子 /內(nèi)部終止子 －－無需其它任何因子的幫助就可以終止核心酶 。 RNApolⅡ 的啟動子 RNApol I的啟動子 RNApol III的啟動子 2 真核生物的啟動子 RNApol Ⅲ 啟動子 ? 1）基因內(nèi)啟動子 /下游啟動子 /內(nèi)部控制區(qū) 由 RNApol Ⅲ 識別 Ⅰ 型 ： 5S rRNA基因啟動子 Ⅱ 型： tRNA基因啟動子 ? 2）基因外啟動子 由 polⅡ 或者 pol Ⅲ 轉(zhuǎn)錄 III型： snRNA基因 基因內(nèi)啟動子 起始位點 b o x A b o x C 基因內(nèi)啟動子 b o x A b o x B 基因外啟動子 O CT PS E T A T A 圖 1 2 2 3 真核 RN A Po l Ⅲ 的 基因內(nèi)啟動子和基因外啟動子 I 型： II 型 III型 基因外啟動子的上游保守序列元件： ? TATA框： 起始轉(zhuǎn)錄 ? 次近端序列元件（ proximal sequence element, PSE）：刺激啟動子作用，增加轉(zhuǎn)錄效率； ? 八聚體 OCT元件 ：增加轉(zhuǎn)錄效率。 小結(jié) 與原核生物啟動子的比較： （ 1）多種元件： TATA框， GC框， CAAT框，OCT等； （ 2）不同元件的組合情況： 位置、序列、距離和方向都不完全相同； （ 3）需轉(zhuǎn)錄因子參與轉(zhuǎn)錄的全過程 ：轉(zhuǎn)錄因子先和啟動子結(jié)合，再與 RNA聚合酶一起形成轉(zhuǎn)錄起始復合物，開始轉(zhuǎn)錄的過程。 ? 上游序列 可以吸引拓撲異構(gòu)酶，后者可導致結(jié)合的局部產(chǎn)生有利于轉(zhuǎn)錄起始的超螺旋狀態(tài)。這兩個結(jié)合區(qū)是在DNA分子的同一側(cè)面，此酶結(jié)合在雙螺旋的一面。 功能： ? (1) 為 RNA pol的識別位點。 ? DNA上開始轉(zhuǎn)錄的第一個堿基定為 +1， ? 沿轉(zhuǎn)錄方向順流而下的核苷酸序列均用正值表示； ? 逆流而上的核苷酸序列均用負值表示。 ?RNA pol轉(zhuǎn)錄控制也很簡單，只轉(zhuǎn)錄少數(shù)幾個基因 。 ? 芽孢菌生活周期過程中生活方式的改變也是通過 ?因子的更替完成的。 ? σ亞基 /?因子 ：使全酶識別啟動子并與之結(jié)合 ， 也看作一種 輔助因子 。 β α σ ω α β ’圖 1 2 5 E . c o l i R N A 聚合酶的亞基組成 各亞基的功能 ? β亞基： 由 rpoB編碼 ， 結(jié)合底物 （ NTP及新生 RNA鏈 ） ， 進行聚合作用 。 ? 對一個基因組來說，轉(zhuǎn)錄只發(fā)生在一部分基因，且每個基因的轉(zhuǎn)錄都受到相對獨立的控制。 ? 模板鏈 , 無意義鏈： 在 DNA的兩條多苷酸鏈中只有其中一條鏈作為模板。 大腸桿菌 RNA聚合酶的 組成 β α σ ω α β ’圖 1 2 5 E . c o l i R N A 聚合酶的亞基組成 真核生物的 RNA聚合酶 種類 分布 轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 相對活性 對 α鵝膏蕈堿的敏感性分類 RNA polⅠ 核仁 28S,18S, rRNAs 5070％ 不敏感 RNA polⅡ 核質(zhì) hnRNA，SnRNA 2040％ 敏感 RNA pol Ⅲ 核質(zhì) tRNA， 5S rRNA，SnRNA 10％ 種特異性 典型原核生物啟動子的結(jié)構(gòu) 35 10 轉(zhuǎn)錄起點 TTGACA 1619bp TATAAT 59bp 原核生物啟動子的結(jié)構(gòu)特點 真核生物 RNA pol 啟動子 － 170 － 160 － 150 － 140 － 130 － 120 － 110……….. － 60 － 50 － 40 － 30 － 20 － 10 ＋ 1 ＋ 10 ＋ 20 上游控制區(qū) 核心啟動子 基因內(nèi)啟動子 起始位點 b o x A b o x C 基因內(nèi)啟動子 b o x A b o x B 基因外啟動子 O CT PS E T A T A 圖 1 2 2 3 真核 RN A Po l Ⅲ 的 基因內(nèi)啟動子和基因外啟動子 I 型： II 型 III型 ? 原核生物轉(zhuǎn)錄初始的 tRNA和 rRNA都不是最初的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 因為： (1) 5’端都是單磷酸，而原始的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 5’三磷酸； (2) 分子比初始轉(zhuǎn)錄物?。? (3) tRNA含有特殊的堿基，這些堿基只有通過一些化學修飾才可以得到。 不同生物的復制體系 功能 λ SV40/人 酵母 起始蛋白 DnaA O T抗原 ORC 解旋酶 DnaB DnaB T抗原