《細(xì)胞工程final》ppt課件-全文預(yù)覽
【正文】 8年， Okada發(fā)現(xiàn)紫外滅活仙臺(tái)病毒可引起艾氏腹水瘤細(xì)胞彼此融合。 棄上清，加入預(yù)冷的凍存液，吹打均勻。不易發(fā)現(xiàn)，對(duì)青霉素有抗藥性。 —— ② 不死性，接觸抑制，不致癌 從原代培養(yǎng)向傳代培養(yǎng)的原因？ 細(xì)胞會(huì)因 密度過大 和代謝消耗引起 營(yíng)養(yǎng) 枯竭，不能正常生長(zhǎng) 動(dòng)物原代細(xì)胞分離培養(yǎng)代 35 細(xì)胞培養(yǎng)過程中的污染不僅僅指微生物，而且還包括所有混入培養(yǎng)環(huán)境中的、對(duì)細(xì)胞生存有害或造成細(xì)胞不純的物質(zhì)，包括生物和化學(xué)物質(zhì)。 1951年， Gey建立了人體宮頸癌 Hela細(xì)胞系。 （不同種生物之間存在著生殖隔離，所以用傳統(tǒng)的有性雜交方法是不可能做到這一點(diǎn)的） 19 體細(xì)胞融合產(chǎn)生遠(yuǎn)緣雜交 植物體細(xì)胞雜交 20 植物體細(xì)胞雜交過程 植物細(xì)胞 A 植物細(xì)胞 B 去掉細(xì)胞壁 去掉細(xì)胞壁 原生質(zhì)體 A 原生質(zhì)體 B 原生質(zhì)體融合 雜合的原生質(zhì)體 再生出細(xì)胞壁 雜種細(xì)胞 細(xì)胞分裂 分化發(fā)育 愈傷組織 雜種植株 21 植物體細(xì)胞雜交過程 原生質(zhì)體制備 取材與除菌 ： 肥皂水 70%酒精 3%次氯酸鈉 —無(wú)菌水沖洗 —無(wú)菌濾紙吸干 酶解： 纖維素酶、果膠酶等 分離 ： 過濾、離心 洗滌 ： 去除酶等物質(zhì) 鑒定 ： 22 植物體細(xì)胞雜交過程 原生質(zhì)體制備 原生質(zhì)體融合（人工誘導(dǎo)） 化學(xué)誘導(dǎo)融合 ： 聚乙二醇結(jié)合高鈣高 pH 缺點(diǎn)：具有細(xì)胞毒性 物理法誘導(dǎo)融合： 離心、振動(dòng)、電刺激等 23 植物體細(xì)胞雜交過程 原生質(zhì)體制備 原生質(zhì)體融合（人工誘導(dǎo)） 雜種細(xì)胞的篩選和培養(yǎng)（形成愈傷組織） 雜合細(xì)胞再生出細(xì)胞壁后轉(zhuǎn)移到合適的培養(yǎng)劑，待長(zhǎng)出愈傷組織再按常規(guī)方法誘導(dǎo)其長(zhǎng)芽、生根、成苗。 ?固定化的細(xì)胞密集而緩慢的生長(zhǎng)，利于分化。目前發(fā)現(xiàn)的植物天然代謝物已經(jīng)超過 2萬(wàn)種。 8 9 植物組織培養(yǎng)的過程 離體的植物器官、組織或細(xì)胞 1. 選擇外植體，以幼嫩的組織或器官為宜 2. 除去病原菌及雜菌 自來(lái)水漂洗 —消毒 —無(wú)菌水沖洗 —吸干 3. 培養(yǎng)基制備 蔗糖和葡萄糖、氮、磷、鉀、鎂 微量元素，如鐵、錳、硼酸 微量有機(jī)物：吲哚乙酸、激動(dòng)素、肌醇 10 植物組織培養(yǎng)的過程 離體的植物器官、組織或細(xì)胞 脫分化（誘導(dǎo)去分化） 細(xì)胞脫分化 （ dedifferentiation) 是指失去已分化細(xì)胞的典型特征，或消除了細(xì)胞分工，重新處于旺盛的有絲分裂狀態(tài) 。 原因： 是生物體的每一個(gè)細(xì)胞都含有該物種所特有的全套遺傳物質(zhì)及發(fā)育為完整個(gè)體所必需的全部基因。 動(dòng)物細(xì)胞工程 植物細(xì)胞工程 微生物細(xì)胞工程 2 基本操作技術(shù) ? 無(wú)菌操作技術(shù) ? 細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù) ? 細(xì)胞融合技術(shù) 細(xì)胞工程的基本操作技術(shù) 操作前將界面上的細(xì)菌和病毒等微生物殺滅； 操作過程中使界面與外界隔離 ,避免微生物的侵入 3 細(xì)胞工程的研究范疇 ? 植物細(xì)胞與組織培養(yǎng) ? 動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng) ? 細(xì)胞融合 ? 細(xì)胞核移植 ? 染色體工程 ? 胚胎工程 ? 干細(xì)胞與組織工程 ? 轉(zhuǎn)基因生物與生物反應(yīng)器 4 第一節(jié) 植物細(xì)胞工程 植物細(xì)胞工程的理論基礎(chǔ)是： 植物細(xì)胞的全能性 植物細(xì)胞工程常用的技術(shù)是 植物組織培養(yǎng) 植物體細(xì)胞雜交 概念： 細(xì)胞的全能性是指生物體的細(xì)胞具有使后代細(xì)胞形成完整個(gè)體的潛能。 6 植物細(xì)胞工程的范疇 植物組織培養(yǎng) 植物細(xì)胞培養(yǎng)和次生代謝物的生產(chǎn) 植物細(xì)胞原生質(zhì)體的制備與融合 單倍體植物的誘發(fā)與利用 人工種子 7 植物組織培養(yǎng)的概念 在離體條件下，將植物組織在無(wú)菌和人為控制外因（營(yíng)養(yǎng)成分、光、溫度、濕度）的條件下，培養(yǎng)獲得大量的細(xì)胞群體， 最終形成完整的植株的一種技術(shù)。 13 植物組織培養(yǎng)的過程 離體的植物器官、組織或細(xì)胞 脫分化（誘導(dǎo)去分化
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