對二氯苯對濕地土壤細菌群落多樣性的影響畢業(yè)論文-全文預覽
【正文】 ／ｍｉｎ離心 ５ ｍｉｎ；棄上清液，倒置風干，加５０ μｌ ｐｈ ８．０ ｔｅ緩沖液。１．２ 試驗設(shè)計試驗選擇２０ ｃｍ ４０ ｃｍ的塑料桶，桶內(nèi)加入２ ｋｇ土壤，加入適量去離子水，使水面浸過土壤１～２ ｃｍ。研究排除其他因素，通過提取濕地土壤細菌群落總ｄｎａ，經(jīng)ｐｃｒ擴增、變性梯度凝膠電泳（ｄｇｇｅ），獲得土壤細菌群落１６ｓ ｒｄｎａ ｖ３序列分布，以此研究對二氯苯對土壤細菌群落多樣性的影響。在土壤培養(yǎng)初期，含對二氯苯２４０ ｍｇ／ｋｇ的培養(yǎng)基上出現(xiàn)一條新增條帶，為對照和低濃度對二氯苯土壤所沒有，說明土壤中存在對二氯苯生長優(yōu)勢菌。對二氯苯對濕地土壤細菌群落多樣性的影響摘要：利用聚合酶鏈式反應(yīng)－變性梯度凝膠電泳（ｐｃｒ－ｄｇｇｅ）考查了對二氯苯脅迫對濕地土壤細菌群落多樣性的影響。培養(yǎng)初期對二氯苯對土壤細菌群落抑制作用非常顯著，土壤細菌中某些群落的生長受到抑制；不同處理在處理后期差異很小。伴隨分子生物學技術(shù)在環(huán)境科學領(lǐng)域的不斷應(yīng)用，不經(jīng)傳統(tǒng)培養(yǎng)，直接從土壤中抽取出土壤微生物總ｄｎａ，利用微生物遺傳多樣性及區(qū)系基因變化來進行污染物環(huán)境效應(yīng)的評價，正在被廣泛采用［５－７］。收集１０～２０ ｃｍ處新鮮土壤，室內(nèi)陰干，研磨，充分混勻，過４０目篩。分別在第四天、第１８天和第４５天時，從桶內(nèi)０～１０ ｃｍ深度處取土樣１０ ｇ，采集后的土壤樣品－２０ ℃保存。反應(yīng)條件為：９５ ℃預變性５ ｍｉｎ；９４ ℃變性１ ｍｉｎ，５４ ℃退火１ ｍｉｎ，７２ ℃延伸１ ｍｉｎ，共進行３０個循環(huán)；７２ ℃延伸１0 ｍｉｎ。１．５ 變性梯度凝膠電泳和染色ｐｃｒ產(chǎn)物加入到８％（ｍ／ｖ）聚丙烯酰胺凝膠中，凝膠的變性范圍為４０％～６０％。１．６ 指紋圖譜生物信息學分析采用ｗａｒｄ法計算各樣品間的相似指數(shù)，ｄｇｇｅ指紋圖譜分析借助于ｂｉｏ－ｒａｄ公司的凝膠成像系統(tǒng)進行條帶判讀，以配套軟件ｑｕａｎｔｉｔｙ ｏｎｅ進行遷移率、強度、面積計算，并計算樣品間的相似指數(shù)、繪制泳道間遺傳圖。表明濕地土壤中大多數(shù)細菌群落對低濃度對二氯苯有一定的耐受性，基本不受影響，甚至對某類微生物具有一定的刺激作用，產(chǎn)生新條帶，如條帶ｅ。值得注意的是，在土壤處理４ ｄ時，２４０ ｍｇ／ｋｇ對二氯苯濃度下，出現(xiàn)一條新增條帶，而對照及其他濃度下土壤都沒有，說明土壤中可能有在對二氯苯較高濃度下良好生長的微生物種。由處理１８ ｄ時電泳圖譜泳道間的遺傳簇關(guān)系（圖４）可見，第２、第３和第４泳道與對照的相似性為７３．４％～７６．５％，較處理初期相比有所提升，而對二氯苯含量６００ ｍｇ／ｋｇ的相似性也從處理初期的６２．７％提高到了６９．４％。圖６中不同處理譜型與對照的相似性都在７０．０％以上，其中１２０ ｍｇ／ｋｇ處理時更是達到８４．３％。說明土壤細菌群落中各個種群是相互作用的，各土壤樣品細菌群落遺傳多樣性是對各種群的群體性反映。考慮到細菌種群之間諸如偏利、協(xié)同、共生、偏害、競爭等復雜的關(guān)系，可能是一定程度的對二氯苯污染改變了群落內(nèi)部種群之間的關(guān)系，某些對對二氯苯敏感的細菌的消亡或者一些耐受對二氯苯的細菌產(chǎn)生的抗性保護了其他種群的細菌。參考文獻：［
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