血吸蟲病免疫診斷技術(shù)規(guī)范-全文預(yù)覽
【正文】 1支 ? 10）陰性對照品（凍干品） 1支 ? 11）使用說明書 1份 5）實驗器材： ? 移液器 20μl 、 100μl 、 1000μl 各一支、 200μl 、 1000μl 吸頭及吸頭盒和移液器架 ? 樣品稀釋板 ? 酶標板架 ? 塑料洗瓶（裝蒸餾水） ? 恒溫水浴箱一臺 ? 吸水紙、廢棄物杯 ? 實驗記錄紙、記錄筆、記號筆、剪刀 6）血清樣本檢查，要求： 1 待檢血清要新鮮，不能有溶血或混有紅細胞或脂血或嚴重黃膽或已污染， 3 操作程序 1 ） 樣本編號：樣本編號 1～ n號，排列，并做好記錄。 2 實驗操作準備 1) 穿戴好工作服、口罩和手套，做好基本實驗準備工作。 有效期 6個月。 2） 檢測帶出現(xiàn)深紫藍色帶（反應(yīng)強），對照帶顯色減 弱甚至不顯色。 4 要求 1） 標記液混均要輕，倒置時沒有沉淀物后再顛倒 2次； 2）一個樣品一支吸頭；加血清時要集中注意力 切不可漏加或跳管或重疊； 3）取試紙條時， 用手捏住吸水墊（較長的一端），嚴禁觸摸檢測膜或倒捏 。 7） 將整板放手上輕輕震蕩， 加血清一分鐘（含混勻時間）后加試紙條。 加液完畢，檢查每孔是 否有漏加孔或加雙倍孔，并及時糾正。做好相應(yīng) 實驗記錄。要求試劑批號與有效期符合產(chǎn)品 說明；器材符合相關(guān)質(zhì)量要求。從冰箱取出使用時先要 放室濕平衡一定時間。 5） 使用加樣器加樣，每測 1個樣本要更換滴頭，在倍比稀釋待檢血清中，混勻時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡 （混勻吸打都在第一檔進行）而影響吸量準確性。 3） 待測血清或血漿不能混有紅細胞或被細菌污染。 ? ＋＋：孔底中心可見少量紅細胞下沉的小圓點，多數(shù)凝集紅細胞在孔底周圍形成小薄層 ? ＋＋＋：紅細胞形成薄層凝集 ,邊緣呈現(xiàn)不規(guī)則的皺褶。如出現(xiàn)異常則說明實驗操作有誤或血球 本身有自凝現(xiàn)象，試驗結(jié)果不能成立。 13） 先試一試震蕩器，正常運轉(zhuǎn)后將反應(yīng)板震搖 1～ 2分鐘，蓋上蓋子， 置 37℃ (水 浴 )30min后下墊白紙觀察結(jié)果。倍比稀釋 一個樣本一個吸頭。 9） 在第 1孔吸出 25μ l于第 2孔（縱向），同上混勻使血清成 1:10稀釋。血凝反應(yīng)板的縱向（列）第 2～ 4孔各加標本稀釋液 25μ l。 5) 啟開標本稀釋液 （生理鹽水、蘭瓶） 安瓶。 2） 取一塊 96孔“ V” 型反應(yīng)板 橫向平放縱向使用 。 ? 應(yīng)選擇“ V” 型，底角為 90度的 反應(yīng)板 。 2） 實驗試劑和器材檢查和擺放。為此一般在致敏前先將紅細胞醛化，先用甲醛或戊二醛，再用鞣酸處理。致敏紅細胞與病人血清中特導(dǎo)性抗體（抗 SEA特異性抗體）相遇時，在適宜的條件下（電解質(zhì)、溫度、 pH），抗原與特導(dǎo)性的抗體相結(jié)合，使紅細胞出現(xiàn)肉眼可見的凝集反應(yīng)。 ? 用剪刀剪塑料管時應(yīng)保持剪刀的清潔，避免交叉污染 ?；騼啥朔饪诤蠓疟浔４?zhèn)溆?。 4）用塑料管進血口靠近血滴讓血液自行流入管內(nèi)，采集＞ 3cm血液 (一次檢測 )。 3．采血方法 1）以手指按摩采血部位，使局部充血，再用 75%酒精棉球消毒皮膚。血吸蟲病免疫診斷技術(shù) 現(xiàn)場應(yīng)用技術(shù)規(guī)范 一、目前常用的血吸蟲病免疫診斷類型與方法 1) 凝集反應(yīng) 直接凝集試驗 間接凝集試驗 正向間接凝集試驗 間接紅細胞凝集試驗（ IHA） 反向間接凝集試驗 間接凝集抑制試驗 2) 沉淀反應(yīng) 環(huán)卵沉淀試驗（ COPT） 3) 免疫電泳技術(shù) 經(jīng)典的免疫電泳技術(shù) 對流免疫電泳 酶標記抗原對流免疫電泳 雙向酶標對流免疫電泳 免疫印跡技術(shù) 4) 免疫標記技術(shù) 酶免疫測定 酶聯(lián)免疫吸咐試驗（ ELISA） 免疫熒光法 放射免疫測定法 免疫膠體金技術(shù) 斑點金免疫滲濾試驗（ DIGFA滲濾法） 免疫膠體染料試驗 膠體染料試紙條試驗（ DDIA層析法） 化學發(fā)光免疫分析 二、未稍采血（塑料管法）操作規(guī)程 1．采血部位 通常取手指或耳垂。 2．采血器材 一次性三棱針或彈簧刺血針、 75%的酒精、無菌脫脂棉球、聚乙烯塑料管（直徑 2mm，長 8cm）、鑷子、酒精燈等。 3）用消毒干棉球擦去第一滴血液，以后流出的血即可采用。 7）塑料管封口端朝下垂直于容器中，待血清自然析出或離心后，剪去塑料管之 血球部分，將血清移至中部， 用于檢測。 ? 塑料管封口要嚴密，防止血液流失。 三、間接紅細胞凝集試驗 ( IHA)操作規(guī)程 1 基本原理 抗原吸附于經(jīng)適當處理的紅細胞表面，使紅細胞致敏。新鮮紅細胞能吸附多糖類抗原，但吸附蛋白質(zhì)抗原或抗體的能力較差。 3 實驗操作準備 1) 穿戴好工作服、口罩和手套等，做好基本實驗準備工作。 4） 實驗試劑和器材準備 ? 實驗試劑盒： ? 1. 凍干致敏紅細胞（紅瓶）
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