大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備-全文預(yù)覽
【正文】 于 70℃ 條件下 ， 可保存半年至一年 。 一般將抗生素 、 Xgal和 IPTG配制成 1000?儲(chǔ)備液 ， 用時(shí)按培養(yǎng)基的量再加入 ） ； 預(yù)冷 CaCl2溶液 （ ／ L） 4．操作步驟 1）大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備 (CaCl2法 ) （ 1） 從新活化的 DH5α菌平板上挑取一單菌落 ， 接種于 3～ 5ml LB液體培養(yǎng)中 ，37℃ 振蕩培養(yǎng) 12h左右 ， 直至對數(shù)生長期 。 重組 DNA轉(zhuǎn)化細(xì)菌過程示意圖 3． 儀器 、 材料和試劑 無菌超凈臺(tái) ， 電熱恒溫水浴 ， 分光光度計(jì) ， 離心機(jī) ， 移液器 ， 微型離心管等； 菌株： DH5α 質(zhì)粒： pBluscript KS+DNA 片段的質(zhì)粒以及 pBluscript KS 空質(zhì)粒； LB培養(yǎng)基；含抗菌素的 LB平板培養(yǎng)基 （ 氨芐青霉素 ， 濃度 50100181。 當(dāng)這種載體轉(zhuǎn)入可編碼 ?－半乳糖苷酶 C端部分序列的宿主細(xì)胞中時(shí)，在異丙基 ?D硫代半乳糖苷（ IPTG）的誘導(dǎo)下， 宿主可同時(shí)合成這兩種肽段， 雖然它們各自都沒有酶活性，但它們可以融為一體形成具有酶活性的蛋白質(zhì)。雖然只有那些含有被轉(zhuǎn)化質(zhì)粒的細(xì)菌才能在含有抗生素的平板上生長和繁殖，但對于連接混合物而言，此時(shí)并不能確定哪個(gè)克隆含有插入片段。 轉(zhuǎn)化的方法： 1. 化學(xué)的方法 (熱擊法 )；使用化學(xué)試劑（如CaCl）制備的感受態(tài)細(xì)胞，通過熱擊處理將載體 DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞； 2. 電轉(zhuǎn)化法：使用低鹽緩沖液或水洗制備的感受態(tài)細(xì)胞，通過高壓脈
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