【正文】 時必須在套筒上加插一過濾芯，稍加扭轉地壓緊吸頭使之與套筒間無空氣 間隙。預洗新吸嘴能有效提高移液的精確度和重現(xiàn)性。如實測體積為 ，即偏差 ，則將讀數(shù)調到 并重復一次。 P右下角數(shù)字為加樣器最大容量值 ， 代表加樣器的型號已標明在按鈕上。 3. 操作步驟： 設定容量值 根據(jù)所需取液量選擇相應的加樣器。 儀器不用時，需套好塑料薄膜防塵罩，以免溫度控制器受潮影響使用。 在每次水浴箱使用前，放入標準溫度計同時監(jiān)測實際水溫，以校正溫度。 把電源開關撥至“開”處，控溫儀面板即有數(shù)字顯示表示電源接通，同時將水泵開關撥至“開”處。 RCF 表示相對離心力，單位用重力加速度 g(g =)。由于離心力不僅為轉速函數(shù) , 亦為離心半經(jīng)的函數(shù)，即轉速相同時，離心半經(jīng)越長，產(chǎn)生的離心力越大。 21 離心過程中若發(fā)現(xiàn)異?，F(xiàn)象，應關閉電源，報請有關技術人員檢修。 根據(jù)離心機功能，設置各項要求：速度、時間、溫度、加速度及減速度等；帶電腦控制的機器還需按儲存鍵，以便記憶輸入的各項信息。 2. 適用范圍： 各種普通臺式離心機。 把培 養(yǎng)物放在載物臺上，打開電源開關，調節(jié)光源的亮度，根據(jù)觀察者的瞳距調節(jié)目鏡間距離，調節(jié)粗調直至找到細胞界面。 3. 操作步驟： 檢查電源電壓是否匹配后，并連接可靠地線。 培養(yǎng)箱的不銹鋼內壁及擱板應定期進行消毒，可以 75%酒精檫拭消毒。 維持培養(yǎng)箱恒定的 CO2 濃度，一般是 5%，使培養(yǎng)箱的 PH 值保持穩(wěn)定，適用于開放或半開放培養(yǎng)。 3. 操作步驟： 檢查電源電壓是否匹配后，接通電源。 工作臺使用后操作過程中出現(xiàn)液體不慎泄漏，立即用軟布蘸10%次氯 酸鈉反復清洗，然后再用 70%酒精擦拭，然后紫外燈消毒 30 分鐘后關機。 17 七、生物安全柜操作使用程序 1. 目的： 保證 生物安全柜 內的高潔凈、 無污染。 工作臺使用后操作過程中出現(xiàn)液體不慎泄漏，立即用 75%酒精擦拭。 2. 適用范圍： 各種品牌、型號的凈化工作臺。 4. 對各種有毒化學試劑應用后，要做相應的無害化處理，防止污染環(huán)境。 廢棄物消毒處理：先用 10%的次氯酸鈉消毒，然后進行焚燒處理。 5. 預防措施： 細胞培養(yǎng)工作人員都應穿工作服，戴上手套、口罩、工作帽。 2. 范圍： 細胞培養(yǎng)室工作人員。 10. 對儀器要正確使用和維護 ,節(jié)約消耗品 ,減少浪費。 ,不得隨意更改操作步驟。 ,特殊情況需請假。 12 三、 實驗室人員行為規(guī)范 一、 目的 : 依照實驗室管理規(guī)范來約束實驗室人員日常行為 ,保證細胞培養(yǎng)實驗的順利完成。 . 每天下班前要關門、關窗、檢查空調和儀器的電源是否關閉。 、柜子、文件類物品要作好標記，以方便識別。 . 注意保持儀器衛(wèi)生整潔，嚴禁在實驗室內抽煙，吃零食。 10 二、 實驗室內務管理及清潔 ，按時上下班，不遲到、早退。 ，書寫工整詳細。 ，嚴格執(zhí)行無菌操作，操作時盡量減少室內走動，保持室內安靜。 ，必須在緩沖間內更換拖鞋，工作服，佩帶帽子、口罩。 . 水浴箱：用于培養(yǎng)液， Hanks 液，消化酶等培養(yǎng)用液的溫熱，牛血清的滅活等 8 . 水純化裝置：細胞培養(yǎng)對水質量要求很高，水純化裝置能提供高質量的水，用于配制各種培養(yǎng)液及試劑。 ：進行細胞培養(yǎng)時，常需要制備細胞懸液、調整細胞密度、洗滌、收集細胞等，因此需使用離心機。配置照相系統(tǒng)，以便攝像、記錄細胞的情況，有助于開展科研工作。 ：對儲藏區(qū)的要求是取放方便，主要有冰箱、干燥箱、液氮 罐、培養(yǎng)瓶等，此環(huán)境也需要清潔、無塵。 ：本區(qū)對無菌的要求雖不必如無菌區(qū)那樣嚴格，但仍需清潔而無灰塵。其中無菌操作區(qū)最好能單獨設置。 溫州醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院外科學實驗室 細胞生物學實驗 工作 程序 溫州醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院外科學實驗室 1 溫州醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院外科學實驗室 細胞生物學實驗 工作程序 編制： 審核： 批準： 發(fā)布日期： 實施日期： 2 目 錄 文件編號 名稱 頁碼 修訂頁 45 LABZXXB1 細胞培養(yǎng)室 的設置、設備及管理 69 LABZXXB2 實驗室內務管理及清潔 1011 LABZXXB3 實驗室人員行為規(guī)范 12 LABZXXB4 生物防護 1314 LABZXXB5 實驗室廢棄物處理程序 15 LABZXXB6 凈化工作臺的操作使用程序 16 LABZXXB7 生物安全柜操作使用程序 17 LABZXXB8 CO2 培養(yǎng)箱的操作使用程序 18 LABZXXB9 倒置顯微鏡的操作使用程序 19 LABZXXB10 離心機操作 使用程序 2021 LABZXXB11 恒溫水浴箱操作使用程序 2223 LABZXXB12 加樣器操作使用及校準程序 2427 LABZXXB13 Millipore 水純化系統(tǒng)操作程序 28 LABZXXB14 組織塊培養(yǎng)法操作程序 2931 LABZXXB15 消化培養(yǎng)法操作程序 3234 LABZXXB16 細胞傳代操作程序 3537 LABZXXB17 細胞凍存和復蘇操作程序 3840 LABZXXB18 細胞生長曲線操 作程序 4142 3 目 錄 文件編號 名稱 頁碼 LABZXXB19 四唑鹽試驗比色試驗操作程序 4344 LABZXXB20 實驗耗材的購買、質檢和儲存程序 4546 LABZXXB21 實驗室的清潔程序 4747 4 修訂頁 頁碼 條目 原內容 修訂內容 修訂者 批準者 修訂日期 5 修訂頁 頁碼 條目 原內容 修訂內容 修訂者 批準者 修訂日期 6 一、細胞培養(yǎng)室的設置、設備及管理 ： 細胞培養(yǎng)實驗室應有專人負責，依照實驗室管理規(guī)范實施全面質量管理，保證實驗質量。無菌操作區(qū)與清洗、消毒滅菌區(qū)應分別位于兩端，而制備、儲藏和孵育區(qū)位于兩區(qū)之間。無菌操作間為密閉式，一般無菌操作區(qū)的空氣消毒用紫外線燈。在有天平、 PH 計、磁力攪拌器等設備下完成制備以后，應在無菌操作臺進行過濾除菌。 ；倒置顯微鏡是細胞培養(yǎng)室所必需，是供日常工作常規(guī)使用，為了掌握細胞的生長情況并觀察有無污染燈。 CO2 培養(yǎng)箱能恒定的提供所需要的一定量的 CO2（常用 5％ CO2），使培養(yǎng)液的 PH 值保持穩(wěn)定。細胞培養(yǎng)室的冰箱應屬專用，不得存放揮發(fā)、易燃等對細胞有害的物質，且應保持清潔。外來人員必須經(jīng)本室負責人同意后方可進入。 75％酒精或 3％新潔爾滅溶液镲拭。 ，在緩沖區(qū)脫掉工作服，將手套及鞋套置于專用污物桶中。 ，將使用過的離心管 、吸頭置于盛有 1％施康消毒液或類似消毒液的廢液缸中。 . 所有儀器須有專人負責，有使