【正文】 粒的 oriT類(lèi)似的 bom位點(diǎn)和可移動(dòng)基因mob(mobilization)， 因而能夠被帶有 tra基因的質(zhì)粒誘動(dòng)轉(zhuǎn)移 。 因此 ， 在進(jìn)行轉(zhuǎn)移時(shí) ， 必須利用位于同一細(xì)胞內(nèi)的自主轉(zhuǎn)移質(zhì)粒編碼合成的性菌毛才能進(jìn)行 。 (2) oriT位點(diǎn)： oriT位點(diǎn)不僅是質(zhì)粒轉(zhuǎn)移的起始位點(diǎn) ， 也是質(zhì)粒轉(zhuǎn)移后 DNA末端再環(huán)化的位點(diǎn) ， 因此質(zhì)粒必須具有oriT位點(diǎn)才能進(jìn)行自主轉(zhuǎn)移 。 ?許多 G細(xì)菌中的自主轉(zhuǎn)移質(zhì)粒需要大于 30kb的 DNA來(lái)編碼與接合轉(zhuǎn)移有關(guān)的蛋白質(zhì)，如 F質(zhì)粒的轉(zhuǎn)移操縱子 (tra)就包含 23個(gè)基因，大小為 33 kb。 六、質(zhì)粒的轉(zhuǎn)移性 分為轉(zhuǎn)移性和非轉(zhuǎn)移性?xún)纱箢?lèi)型 有些質(zhì)粒雖然不能自主轉(zhuǎn)移，但能被其他一些自主轉(zhuǎn)移質(zhì)粒所轉(zhuǎn)移，這類(lèi)質(zhì)粒又被叫做可移動(dòng)質(zhì)粒 (mobilizable plasmid)。 盡管在大腸桿菌培養(yǎng)物中出現(xiàn)無(wú) pBR322質(zhì)粒細(xì)胞的可能性較低 ， 但在一定的條件下 ， 如培養(yǎng)基耗盡或是寄主細(xì)胞快速生長(zhǎng)分裂的過(guò)程中 ， 仍有可能產(chǎn)生出無(wú)質(zhì)粒的細(xì)胞 。 (random distribution) ColEl等多數(shù)高拷貝質(zhì)粒一般沒(méi)有 par基因 ， 它們依賴(lài)于高拷貝質(zhì)粒的隨機(jī)分配來(lái)實(shí)現(xiàn)分裂過(guò)程中的穩(wěn)定性 。毒劑 CcdB和解毒劑 CcdA具有不同的穩(wěn)定性，是導(dǎo)致分裂后細(xì)胞致死的關(guān)鍵因素。 ?在含質(zhì)粒的細(xì)胞中 ， CcdA蛋白作為解毒劑專(zhuān)門(mén)與毒劑CcdB蛋白結(jié)合 ， 并使之失效 。 細(xì)菌質(zhì)粒 DNA的分配模型圖 質(zhì)粒 DNA在位于細(xì)胞中央的復(fù)制體 (replisome)的作用下進(jìn)行復(fù)制。 sopA和 sopB構(gòu)成一個(gè)轉(zhuǎn)錄單位，其產(chǎn)物 SopA和SopB兩種蛋白協(xié)同抑制 sopAB操縱子的轉(zhuǎn)錄，屬于自體阻遏蛋白。 par區(qū)叫做分配區(qū) (partition region)或分配座位 (partition locus)： 是指在細(xì)胞分裂過(guò)程中使質(zhì)?？截悢?shù)均等的分配到子 細(xì)胞中的質(zhì)粒 DNA序列。 要使質(zhì)粒能夠保持穩(wěn)定的遺傳，至少需要滿(mǎn)足下面兩個(gè)方面的條件： 在細(xì)胞分裂過(guò)程中，質(zhì)粒分配到子細(xì)胞的途徑可分為： 隨機(jī)分配 (random distribution) 主動(dòng)分配 (active distribution) 這些質(zhì)粒的穩(wěn)定性是通過(guò)兩種機(jī)制來(lái)實(shí)現(xiàn)的： （ 1） 質(zhì)粒編碼的基因產(chǎn)物 ， 如質(zhì)粒編碼的致死蛋白來(lái)抑制不含質(zhì)粒的子細(xì)胞 。 帶有不同復(fù)制子的質(zhì)粒屬于不同的不相容群，它們可以共存于同一細(xì)菌中。 例如， F質(zhì)粒和 ColE1質(zhì)粒二者是相容的，也就是說(shuō)，它們分別屬于不同的不相容群（ different inpatibility group）。由于性狀相近的質(zhì)粒通常具有相同或相似的復(fù)制調(diào)控機(jī)制，其阻遏物 (抑制物或重復(fù)序列 )亦相似，在調(diào)控時(shí)，它們也能隨機(jī)地與其中的任一質(zhì)粒的復(fù)制區(qū)結(jié)合而阻遏了其復(fù)制過(guò)程，并進(jìn)而使之在子代細(xì)胞中丟失。 四、 不相容性和質(zhì)粒的類(lèi)群 質(zhì)粒不相容性： 是指親緣關(guān)系相近的兩種質(zhì)粒，在非選擇性條件下常不能穩(wěn)定地存在于同一個(gè)細(xì)胞中，經(jīng)過(guò)若干代的培養(yǎng)，只含有同一種質(zhì)粒的細(xì)胞越來(lái)越多，而含有兩種質(zhì)粒的細(xì)胞相對(duì)減少。 ?重復(fù)子能與復(fù)制必需的 RepA蛋白競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合，從而抑制了質(zhì)粒的復(fù)制和拷貝數(shù)的增加。 ?質(zhì)粒復(fù)制起始所必需的 RepA蛋白能在兩個(gè)啟動(dòng)子的作用下轉(zhuǎn)錄。它促使這兩種 RNA分子的互補(bǔ)結(jié)合物由不穩(wěn)定的中間體變?yōu)楦€(wěn)定的結(jié)構(gòu)。 ROM蛋白通過(guò)促進(jìn) RNAⅠ 和 RNAⅡ 雜交體的形成，增強(qiáng) RNAⅠ 的負(fù)調(diào)節(jié)作用。 ?這一平衡的改變主要由 RNAⅠ 來(lái)控制， RNAⅠ 是由RNAⅡ 基因的反義鏈編碼的 108個(gè)堿基小分子轉(zhuǎn)錄物。 ?colE1復(fù)制子不能影響質(zhì)粒復(fù)制所必需的宿主酶的活性，因此，一旦 DNA合成啟動(dòng)后，便不能改變其速度或進(jìn)程。此約 750個(gè)核苷酸的起始轉(zhuǎn)錄物的 5’端折疊成復(fù)雜的二級(jí)結(jié)構(gòu)，從而使 RNA產(chǎn)生一個(gè)富 G環(huán)，后者與位于模板鏈復(fù)制起點(diǎn)上游 20個(gè)核苷酸處的質(zhì)粒 DNA富 C區(qū)正好匹配?？刂拼朔N質(zhì)粒 DNA復(fù)制啟動(dòng)的兩種關(guān)鍵因素 RNAI和 RNAⅡ ，以及另一種負(fù)調(diào)控因子Rop蛋白，都是由 ColE1 DNA轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的。 ?屬于這一類(lèi)復(fù)制調(diào)控的質(zhì)粒有 ColE pT18p15A、 pMB RSF10 CloDF1 R1等。 三、 質(zhì)粒復(fù)制的調(diào)控 質(zhì)粒的復(fù)制機(jī)理與細(xì)菌染色體的基本相同，但二者之間的復(fù)制調(diào)控則有區(qū)別。質(zhì)粒的寄主范圍通常是由 ori區(qū)決定的。 2. 復(fù)制起點(diǎn) (ori)區(qū)的功能 ? 將 ori區(qū)克隆到一個(gè)不能自主復(fù)制的環(huán)狀雙鏈 DNA分子上并引入到原核細(xì)胞后 ， 該重組 DNA具有自主復(fù)制能力 。 在革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌中大多數(shù)質(zhì)粒是以滾環(huán)方式復(fù)制。 質(zhì) 粒 復(fù) 制 子 拷 貝 數(shù) pBR322及其衍生質(zhì)粒 pMB1 1520 pUC系列質(zhì)粒 pMB1 500700 pACYC及其衍生質(zhì)粒 p15A 1012 pSC101及其衍生質(zhì)粒 pSC101 ∽ 5 ColE1 ColE1 1520 幾種常見(jiàn)質(zhì)粒載體所攜帶的復(fù)制子 質(zhì)粒的復(fù)制主要是通過(guò) θ型復(fù)制和滾環(huán)復(fù)制兩種方式之一進(jìn)行的，其中以 θ型復(fù)制為主。 ? 控制拷貝數(shù)的基因存在質(zhì)粒上，同時(shí)也是宿主和質(zhì)粒相互作用的結(jié)果。通常每個(gè)細(xì)胞含有 10100個(gè)拷貝，屬于高拷貝質(zhì)粒。 ? 質(zhì)粒在細(xì)胞內(nèi)復(fù)制時(shí)受到控制而與染色體復(fù)制同步進(jìn)行，被稱(chēng)為嚴(yán) 謹(jǐn) 型質(zhì)粒。 質(zhì)粒的拷貝數(shù)是指同一質(zhì)粒在每個(gè)細(xì)胞中的數(shù)量，不同的質(zhì)粒在同一細(xì)胞中的拷貝數(shù)有差異。 其規(guī)則是： ?質(zhì)粒的名稱(chēng)一般由三個(gè)英文字母及編號(hào)組成，第一個(gè)字母一律用小寫(xiě) p表示，后兩個(gè)字母應(yīng)大寫(xiě)，可以采用發(fā)現(xiàn)者人名、實(shí)驗(yàn)室名稱(chēng)、表型性狀或其他特征的英文縮寫(xiě)。 一、質(zhì)粒的發(fā)現(xiàn) 二、質(zhì)粒的命名原則 質(zhì)?？梢砸罁?jù)其表型效應(yīng)、大小、復(fù)制特性、轉(zhuǎn)移性或親和性差異劃分為不同的類(lèi)型。 ?日本學(xué)者 (1957年 )報(bào)道了志賀菌 (Shigella)中質(zhì)粒介導(dǎo)抗生素抗性的轉(zhuǎn)移現(xiàn)象。 在基因工程和分子生物學(xué)的發(fā)展過(guò)程中 ， 質(zhì)粒也起著非常重要的作用 。 自 20世紀(jì) 80年代中期以來(lái) ， 在鏈霉菌 、 酵母 、 絲狀真菌等微生物中都發(fā)現(xiàn)了線(xiàn)狀 DNA質(zhì)粒 ， 甚至還有 RNA質(zhì)粒 。 a、 可以整合到染色體上 ， 又可以游離于染色體外 （ 附加體 ） b、 質(zhì)粒通常是共價(jià) 、 閉合 、 環(huán)狀雙鏈 DNA(covalent closed circular DNA， 簡(jiǎn)稱(chēng) cccDNA)， c、 分子大小范圍從 l kb左右到 1000 kb。 質(zhì)粒也像染色體一樣攜帶編碼多種遺傳性狀的基因 ， 并授予宿主細(xì)胞一定的遺傳特性 ， 許多與醫(yī)學(xué) 、 農(nóng)業(yè) 、 工業(yè)和環(huán)境密切相關(guān)的重要細(xì)菌的特殊特征便是由質(zhì)粒編碼的 ， 如植物結(jié)瘤 、 固氮 、 對(duì)有機(jī)物的代謝等 。 第一節(jié) 質(zhì)粒的發(fā)現(xiàn)和命名 ?大腸桿菌的 F因子是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn) (1946年 )的細(xì)菌質(zhì)粒，它的發(fā)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌遺傳學(xué)的發(fā)展產(chǎn)生了深遠(yuǎn)的影響。對(duì)很多不同微生物中的質(zhì)粒進(jìn)行了基因克隆和生物學(xué)功能分析，使質(zhì)粒的生物學(xué)跨入了空前繁榮的研究時(shí)期。直至 1976年 Novick等才提出一個(gè)可為質(zhì)粒研究者普遍接受和遵循的命名原則。 質(zhì)粒的大小 一般在 1200kb，最大的可達(dá)1400kb(如苜蓿根瘤 菌 質(zhì)粒 pRm141a)。 質(zhì)?？筛鶕?jù)其拷貝數(shù)分為 嚴(yán)謹(jǐn)型質(zhì)粒（ Stringent plasmid）和 松弛型質(zhì)粒（ Relaxed plasmid） 。 ? 另一