【正文】 會(huì)對它進(jìn)行修飾； ? 重組缺陷型，不會(huì)產(chǎn)生體內(nèi)重組； ? 容易導(dǎo)入重組 DNA分子； ? 符合重組 DNA操作的安全標(biāo)準(zhǔn)。 每個(gè)細(xì)胞中存在的質(zhì)粒數(shù)稱為該質(zhì)粒的拷貝數(shù) 。 ? 原生質(zhì)體融合受接合型或致育型的限制較小，因此 有利于不同種屬間微生物的雜交。 ? 原生質(zhì)體的制備 ：用相應(yīng)的酶脫去菌體的細(xì)胞壁，制得完整的原生質(zhì)體。 或者將大量異核體孢子分離于基本培養(yǎng)基平板上從中長出野生型原養(yǎng)性菌落，將其挑出分離純化，即得雜合雙倍體。作為直接親本的遺傳標(biāo)記有多種，如營養(yǎng)突變型、抗藥突變型、形態(tài)突變型等。 霉菌的雜交育種 ? 霉菌的雜交育種主要是通過體細(xì)胞的核融合和基因重組，即通過準(zhǔn)性生殖過程而不是通過性細(xì)胞的融合。 在鼠傷寒沙門氏菌、綠膿桿菌、肺炎克氏桿菌、霍亂弧菌等許多細(xì)菌中也發(fā)現(xiàn)了接合現(xiàn)象，但是 至今未在革蘭氏陽性菌中發(fā)現(xiàn)接合現(xiàn)象 。 細(xì)菌的雜交 ? 細(xì)菌的雜交行為是于 1946年首次在大腸桿菌 K12菌株中發(fā)現(xiàn)并證實(shí)的。由于紫外線穿透力不強(qiáng)，要求照射液不要太深，約 ～ ，同時(shí)要用電磁攪拌器或手工進(jìn)行攪拌，使照射均勻。 出發(fā)菌株選擇應(yīng)考慮的問題 ? 出發(fā)菌株的穩(wěn)定性 ? 選用具備優(yōu)良特性的菌株 ? 挑選對誘變劑敏感的菌株 ? 注意菌株的生理狀態(tài)及生長發(fā)育時(shí)間 出發(fā)菌株 ? 野生菌株 ? 自發(fā)突變后獲得的高產(chǎn)菌株 ? 已經(jīng)誘變過的菌株 ? 考慮試驗(yàn)菌株的遺傳背景：各種誘變劑有不同的作用機(jī)制，一種誘變劑的作用常主要集中在DNA的某些特異部位上，多次反復(fù)用一種誘變因子易出現(xiàn) “飽和”或恢復(fù)突變現(xiàn)象，因此誘變時(shí)常采用多種不同的誘變因子或復(fù)合誘變因子。 ? 致死突變型 ： 生活力下降的突變型。 誘變劑 物理：紫外線 ， 快中子 化學(xué)：硫酸二乙酯 ， 亞硝基胍 生物：噬菌體 誘變育種的主要環(huán)節(jié) （ 1）以 合適的誘變劑 處理細(xì)胞懸浮液 —— 誘變 （ 2）用 合適的方法 淘汰負(fù)效應(yīng)變異株， 選出性能優(yōu)良的正變異株 —— 篩選 按照生產(chǎn)的要求，根據(jù)生物的遺傳和變異的理論，用人工的方法造成菌種變異，再經(jīng)過篩選、而達(dá)到菌種誘變選育的目的 。 從最后稀釋菌液中吸取 ，置入準(zhǔn)備好的無菌瓊脂內(nèi)。 步驟十 需要使用的儀器 —— 震蕩機(jī) 固體培養(yǎng)基的稀釋涂抹接種法 吸取準(zhǔn)備好欲稀釋的菌液 吸取充分均勻后的菌液 取含有 9mL無菌水之試管，將試管口過火滅菌。 步驟七 重復(fù)第六以及第七步驟，由第七步驟的第二區(qū)中劃出第三區(qū)，如右上圖。 步驟三 更換一個(gè)新的無菌營養(yǎng)平板 步驟四 將接種針上的細(xì)菌劃于一個(gè)新的營養(yǎng)平板上。 ?采土方式： 在選好適當(dāng)?shù)攸c(diǎn)后 ， 用小鏟子除去表土 ， 取離地面 515cm處的土約 10g， 盛入清潔的牛皮紙袋或塑料袋中 ， 扎好 ， 標(biāo)記 ， 記錄采樣時(shí)間 、 地點(diǎn) 、 環(huán)境條件等 ， 以備查考 。 第三節(jié)、菌種的選育 一、自然選育 采樣 采樣對象 以 采集土壤 為主 。 藥理活性化合物生產(chǎn)菌的篩選 ： 一種化合物如果能在體外抑制某種關(guān)鍵的人體酶，它就可能在體內(nèi)具有藥理作用。 堿性蛋白酶的產(chǎn)生菌能消化平板的不溶性蛋白，產(chǎn)生一清晰圈。 ?解決辦法 ：把富集培養(yǎng)物接種到新鮮的同一種培養(yǎng)基中可以重新建立選擇壓力，重復(fù)移植幾次后，將富集培養(yǎng)物再接到固體培養(yǎng)基上。 二、重要工業(yè)微生物的分離方法 ?施加選擇壓力的分離方法： 1 、富集液體培養(yǎng) ：指能增加混合菌群中所需菌株的數(shù)量的一種技術(shù)。 ?復(fù)印平板法 將菌落復(fù)印在平板上的辦法來研究它們對一系列試驗(yàn)菌的作用。它能夠產(chǎn)生耐熱性蛋白質(zhì)，在高溫條件下，普通生物的蛋白質(zhì)就會(huì)失活、變性，但是嗜熱菌蛋白質(zhì)不會(huì)變性，生命活動(dòng)也不會(huì)終止。 ?在分離培養(yǎng)基中廣泛采用加入抗生素的方法，來增加選擇性。 ?廣泛應(yīng)用的三種培養(yǎng)基即 幾丁質(zhì)瓊脂 、 淀粉一酪素培養(yǎng)基和 M3培養(yǎng)基 。 ? 所謂誘 餌技術(shù) 是將固體基質(zhì)加到待檢的土壤或水中，待其菌落長成后再鋪平板。然后將濾膜置于培養(yǎng)基的表面，放置乃個(gè)小時(shí)后移去，或一直留在上面，如處理放線菌繁殖體含量很低的海水 ,有人先將樣品離心然后才過濾。 藻 類 工 廠 第二節(jié) 菌種的來源 一、微生物選擇性分離方法 ?含微生物材料的選擇 ?材料的預(yù)處理 ?所需菌種的分離 ?菌種的培養(yǎng) ?菌種的選擇和純化 含微生物材料的選擇 ?微生物主要來自土壤 ?尋找已經(jīng)適應(yīng)苛刻環(huán)境壓力的微生物類群 ?例如： 從鹽場分離嗜鹽鏈霉菌，從污泥中分離甲烷菌，從酒糟中分離酵母菌等。 C：藻類（ alga）： 培養(yǎng) 螺旋藻 ，每公頃可收獲 60噸，而種植大豆每公頃才可獲 4噸； 從蛋白質(zhì)產(chǎn)率來看，螺旋藻是大豆 28倍。 2. 沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu)，主要由核酸和蛋白質(zhì)構(gòu)成。土霉素、四環(huán)素、鏈霉素、紅霉素 其他生物： A: 擔(dān)子菌：所謂的擔(dān)子菌就是人們通常所說的菇類生物。 ?工業(yè)上常用菌種舉例： 常用的細(xì)菌 ? 大腸桿菌 應(yīng)用：生產(chǎn)天冬氨酸、蘇氨酸、纈氨酸。第二章 菌種的選育、保藏與復(fù)壯 ?第一節(jié)、微生物工業(yè)用菌種 ?第二節(jié)、菌種的來源 ?第三節(jié)、菌種的選育 ?第四節(jié)、菌種保藏 ?第五節(jié)、菌種的提純與復(fù)壯 第一節(jié)、微生物工業(yè)用菌種 一、微生物工業(yè)對菌種的要求 微生物資源豐富，廣布于土壤、水和空氣等自然界中，其中土壤中最多。微生物具有巨大的潛力可挖掘。 啤酒酵母 紅酵母 面包酵母 霉菌 ?曲霉屬 ?應(yīng)用：生產(chǎn)有機(jī)酸、生產(chǎn)淀粉酶、果膠酶、葡萄糖氧化酶 ?應(yīng)用：醬油、醬類（淀粉酶） 應(yīng)用：生產(chǎn)甲義丁二酸 ? 米曲霉 ? 應(yīng)用：產(chǎn)糖化酶和蛋白酶、主要用于釀酒制曲和醬油制曲 毛 霉 ?應(yīng)用：可以產(chǎn)生蛋白酶，我國多用于豆腐乳、豆豉等的制作 ?根霉 ? 種類：米根霉、華根霉、少根根霉、爪哇根霉 ? 應(yīng)用：釀酒 青霉菌 放線菌 種類：龜裂鏈霉菌、金霉素鏈霉菌、灰色鏈霉菌、紅霉素鏈霉菌 應(yīng)用：各類抗生素。 B：病毒 (virus) 其特點(diǎn)如下： 1. 形體微小，體積比細(xì)菌小的多。 噬菌體在寄主細(xì)胞中的生長繁殖過程可分為吸附、浸入、增殖、成熟和釋放。 國外還有人從“藻類農(nóng)場” 獲取氫能 的報(bào)道，大量培養(yǎng)藻類，利用其光合放氫作用來取得氫能。 ? 采用膜過濾法濃縮水中的細(xì)胞 。 ? 在分離前添加一些固體基質(zhì) (如把幾種基質(zhì)加在土壤中 )或?yàn)⑿┛扇苄责B(yǎng)分來強(qiáng)化培養(yǎng)基。 所需菌種的分離 ?分離效率取決于培養(yǎng)基的養(yǎng)分、 pH、加入的選擇性抑制劑。有人從堿性的加拿大土壤中分離出嗜堿鏈霉菌，它不能生長在低于pH 6. ，估計(jì)嗜堿性放線菌也可能存在于其它堿性環(huán)境中。 ? 嗜熱菌： 4555 ℃ 。 菌落的選擇 ?鋪菌法 于分離平板上鋪上一層單一的試驗(yàn)菌的辦法用來測定各個(gè)菌落的抗生素生產(chǎn)能力。菌落復(fù)印平板法對不長孢子的鏈霉菌則不能使用，也不適用于游動(dòng)細(xì)菌的篩選。 ?注意 ：所需類型的菌株生長的結(jié)果，有時(shí)會(huì)改變培養(yǎng)基的性質(zhì)，從而改變選擇壓力，使其他微生物生長。土壤必須經(jīng)過巴氏滅菌消毒，以減少不產(chǎn)孢子的微生物，然后鋪在 pH為 9~10的瓊脂培養(yǎng)基（含有均勻的不溶性蛋白質(zhì)）表面。