《植物dna分子標(biāo)記》ppt課件-全文預(yù)覽
【正文】 選擇擴(kuò)增，帶型穩(wěn)定，帶紋豐富，靈敏度高，重復(fù)性好 （ 5）不需事先知道 DNA序列信息 ? 缺點：操作復(fù)雜，費用較高 SSR標(biāo)記 ?SSR：簡單重復(fù)序列（ simple sequence repeat）多態(tài)性，也叫微衛(wèi)星標(biāo)記。 如： EcoRI引物和 MseI引物 EcoRI 5 180。 AFLP的基本原理 植物基因組 DNA經(jīng)限制性內(nèi)切酶消化形成相對分子量大小不等的隨機(jī)限制性酶切片段，隨后將特定的接頭連接在這些 DNA片段兩端，接頭序列和鄰近限制性酶切位點作為引物進(jìn)行 PCR擴(kuò)增，最后通過 PAGE分離擴(kuò)增的特異限制性片段。模板濃度、 Mg 2+濃度， PCR反應(yīng)中條件的變化等。 （ 5）可以對 RFLP難以分析的基因組區(qū)域做遺傳連鎖圖。具有廣泛適用性和通用性。 5. 將凝膠浸于 1ug/ml的 EB中 30min~60min，用水清洗約 10min，觀察、拍照。 RFLP標(biāo)記缺點 （ 1） DNA需要量大。然而，各限制片段在凝膠中還是分開的，但不能分辨。酶識別位點堿基對 越少 ， DNA分子中被識別的位點 越多 ，所產(chǎn)生的限制片段 越短 。實際上，在植物的自然群體中存在大量的 DNA序列變異。 染色體原位雜交 是指 DNA探針與染色體上的 DNA雜交，并在染色體上直接進(jìn)行檢測的分子技術(shù)，其原理是兩條核苷酸 單鏈片斷 在適宜的條件下，通過 氫鍵結(jié)合，形成 DNADNA， DNARNA， RNARNA雙鍵分子，用帶有標(biāo)記的 DNA或者 RNA片斷作為核酸探針，與細(xì)胞內(nèi)染色體雜交，用放射自顯影等方法予以顯示，在熒光顯微鏡下觀察目的 mRNA或者 DNA的存在與定位。 隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，現(xiàn)在 DNA分子標(biāo)記技術(shù)已有數(shù)十種，廣泛應(yīng)用于遺傳育種、基因組作圖、基因定位、物種親緣關(guān)系鑒別、基因庫構(gòu)建、基因克隆等方面。植物 DNA 分子標(biāo)記 分子標(biāo)記的概念 ?廣義的分子標(biāo)記 （ molecular marker）：可遺傳的并可檢測的 DNA序列或蛋白。 DNA分子標(biāo)記（ DNA molecular marker）直接在 DNA分子水平上檢測生物間的差異，是 DNA水平上遺傳變異的直接反應(yīng)。 分子雜交 ：由具有互補(bǔ)堿基順序的任何兩條 單鏈 核酸分子片斷形成 雙鏈 的過程。 生物能快速、精確地復(fù)制自身的 DNA，但這種精確性是相對的。 限制性內(nèi)切酶酶解 DNA長鏈，是識別 DNA上的特異的位點并在這些位點上切斷的過程。 用限制性酶來酶解植物核 DNA會產(chǎn)生數(shù)萬個片段，其大小變化是連續(xù)的，如進(jìn)行電泳分離，只能看到彌散狀的連成一片的電泳結(jié)果。 （ 3）瓊脂糖凝膠電泳 （ 4） Southern印跡轉(zhuǎn)移 （ 5） DNA雜交及放射自顯影 RFLP標(biāo)記優(yōu)點 （ 1）不受性別、年齡局限，不會受表達(dá)的組 織、發(fā)育階段或外界環(huán)境的不同而受影 （ 2）標(biāo)記座位的等位基因間是 共顯性 的，通過 雜交后電泳帶型可直接區(qū)別雜合子和顯性 純合子 （ 3） RFLP標(biāo)記源于基因組 DNA自身變異，在 數(shù)量上幾乎不受限制。 RAPD的基本概念和原理 RAPD的引物： （ 1）為隨機(jī)引物 （ 2）序列較短（通常為 10個核苷酸） （ 3）為一個寡核苷酸單鏈引物 品系 1 品系 2 RAPD的基本實驗程序
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