nf-kb的激活與檢測方法-全文預(yù)覽
【正文】 ，ERDJUMENTBROMAGE H， et a1． I kappa Bbeta regulates the persistent response in a biphasic activation of NFkappa B【J】．Cell，1995，80(4)：573—582．7 TANAKA M，F(xiàn)UENTES M E，YAMAGUCHIK， et al． Embryonic lethality． 1iverDegeneration，and impaired NFκB activation in IKKbdeficient mice 【J】．Immunity．1999，10(4)：421—429．8 DEVIN A，LIN Y，YAMAOKA S，et a1．The alpha and beta subunits of I kappaB kinase(IKK) mediate TRAF2dependent IKK recruitment to tumor necrosis factor(TNF) receptorl in response to TNF【J】．Mol Cell Biol，2001，21(12)：3986—3994．9 YAMAMOTO Y，YIN M J，GAYNOR R B．I kappa B kinase alpha (IKK Blpha)regulation of IKK beta kinase activity【J】．M0l Cell Biel，2000。結(jié)語自1986年首次發(fā)現(xiàn)NFκB以來，圍繞它的研究日益深入。該報告基因檢測不需要底物，GFP表達穩(wěn)定，加熱、變性劑、去垢劑及一般的蛋白酶均不能使它滅活【22】。βgal基因現(xiàn)常用作轉(zhuǎn)染的參照體系。此試劑盒是一個快速，使用方便且敏感特異的試驗方法。試劑盒內(nèi)有一個96孔板，含有NFkB固有序列結(jié)合位點的寡核苷酸已經(jīng)被固定在板上。非放射性EMSA勿需經(jīng)過放射顯影，采用生物發(fā)光或化學發(fā)光原理進行檢測，敏感度與放射性EMSA相近。EMSA原理：帶標記的與NFκB有共有序列的寡聚核苷酸探針結(jié)合到NFκB后，因其分子量和表面電荷發(fā)生改變，在非變性條件下行凝膠電泳，其泳動率比未結(jié)合的游離探針慢，經(jīng)自顯影后即可檢測TF活性。Western blot可以反映NFκB蛋白表達量的變化情況，從而可作為研究其功能的一種手段。NFκB 參與炎癥反應(yīng)。實驗顯示，辛德畢斯(Sindbis)病轉(zhuǎn)染的細胞，在細胞凋亡的起始階段甚至需要NFκB的參與【20】。此途徑也是NFκB抗細胞凋亡的重要機制。(3)NFκB通過誘導(dǎo)TRAF(TNF受體相關(guān)因子)和IAP(凋亡抑制蛋白)抑制凋亡【18】。(2)NFκB通過誘導(dǎo)或上調(diào)抗凋亡基因抑制凋亡。目前，NFκB主要通過以下三條途徑來抑制凋亡【14】。在B淋巴細胞系中也可發(fā)現(xiàn)NFκB的抗凋亡作用。釋放后的NFkB可以通過例如修飾自身的亞單位的方式來影響自身的轉(zhuǎn)錄激活效能。這種方式的NFκB活化途徑被稱為經(jīng)典的NFκB活化途徑。各種信號通過降解IκBs的方式來活化NFκB，活化的NFκB然后進入細胞核內(nèi)與DNA結(jié)合。IKKα不只是傳統(tǒng)的認為只是IκB激酶，而且以其他的方式影響著基因的表達。IKK是由一個調(diào)節(jié)亞單位，IKKγ(也被稱為NEMO)和兩個催化亞單位IKKα，IKKβ組成。它們共同的結(jié)構(gòu)特征是在c端有一個特征性的錨蛋白重復(fù)序列。另一類為p65(RelA)，Rel（cRel),Rel B和果蠅的dorsal、Dif和Relish,它們沒有前體，除N端的RHD外，其C端有一個或多個轉(zhuǎn)錄活性區(qū)，具有直接作用轉(zhuǎn)錄設(shè)備而激活基因轉(zhuǎn)錄的功能。其RHD內(nèi)含DNA結(jié)合區(qū)，二聚體化區(qū)和核定位序列，分別具有與DNA κB序列結(jié)合、與同源或異源亞基二聚體化以及與NFκB抑制蛋白（IKB）家族成員相互作用并攜帶核定位信號（NLS），參與活化的NFκB由細胞質(zhì)向細胞核的迅速移動等功能。它們可以調(diào)節(jié)許多與免疫功能和炎癥有關(guān)的基因，在機體生理和病理條件下，發(fā)揮重要的功能。生命活動中的一系列重要過程如細胞增殖、分化等是通過基因表達來實現(xiàn)的，這種基因表達控制首先通過特定轉(zhuǎn)錄因子在轉(zhuǎn)錄水平上進行。1986年，Sen 等【2】首次從鼠B淋巴細胞
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