標(biāo)記免疫技術(shù)-全文預(yù)覽
【正文】 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 來自 庫下載 ? 均相酶免疫測定 Ag+AbE Ag AbE + AbE 基本原理：利用酶標(biāo)抗體結(jié)合抗原形成復(fù)合物后，標(biāo)記酶的活性發(fā)生改變的原理，在不將復(fù)合物與游離酶標(biāo)抗體分離的情況下，直接測定系統(tǒng)中總的標(biāo)記酶活性的改變，進(jìn)而推算出待檢樣品中的抗原量。 硝酸纖維素膜（ NC）、尼龍膜等微孔濾膜，廣泛應(yīng)用于定性或半定量的斑點(diǎn) ELISA。僅適用于含糖蛋白分子的酶（如 HRP）標(biāo)記物制備。 * AP靈敏性高與 HRP，但不易獲得純品，穩(wěn)定性及酶標(biāo)記物收率 低于 HRP，且價(jià)高，故應(yīng)用不如 HRP普及?？捎糜跈z測細(xì)胞大小、折散率、粘滯度等，更常用于 T細(xì)胞亞群等的檢測。 ? 在寄生蟲感染診斷中，間接免疫熒光試驗(yàn)（ IFAT）是當(dāng)前公認(rèn)的最有效的檢測瘧疾抗體的方法。既可檢測抗原，也可檢測抗體。一般用于固定標(biāo)本的熒光抗體以 F/P＝ ，用于活細(xì)胞染色的以 F/P＝ 。 ④與蛋白質(zhì)結(jié)合后不影響蛋白質(zhì)原有的生化與免疫性質(zhì)，與蛋白質(zhì)的結(jié)合物穩(wěn)定，易于保存。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 來自 庫下載 熒光分子的輻射能力在受到激發(fā)光較長時(shí)間的照射后會(huì)減弱甚至猝滅，一些化合物對熒光有猝滅作用，因此熒光物質(zhì)的保存應(yīng)注意避免光（特別是紫外光）的直接照射和與其他化合物的接觸。最大吸收光波長為 570nm，最大發(fā)射光波長為 595－ 600nm，呈橘紅色熒光 。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 來自 庫下載 第一節(jié) 熒光的基本知識 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 來自 庫下載 異硫氰酸熒光素（ FITC） 為黃色或橙黃色結(jié)晶粉末，分子量為 ，最大吸收光波長為 490495nm，最大發(fā)射光波長 520530nm，呈現(xiàn)明亮的 黃綠色熒光 ，是應(yīng)用最廣泛的熒光素。 問題：放射性污染、常用核素半衰期短、試劑盒穩(wěn)定期不長不易自動(dòng)化儀器分析等。 ? 其他 RIA可以測定大分子量與小分子量的物質(zhì)，雙位點(diǎn)IRMA只能測定在分子上具有 2個(gè)以上抗原表位的物質(zhì)。 ? 檢測范圍 通常 RIA的工作范圍為 23個(gè)數(shù)量級，而RIMA可達(dá) 3個(gè)數(shù)量級以上。在 RIA中抗體量是微量的，所以一定要用高親和力的多克隆抗體，而在 IRMA中應(yīng)用親和力較低的單克隆體也能得到滿意的結(jié)果。在IRMA中 核素標(biāo)記抗體。 晶體閃爍計(jì)數(shù)儀 (γ射線 )或液體閃爍計(jì)數(shù)儀 ( β射線 ) 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算待檢抗原濃度。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 來自 庫下載 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 來自 庫下載 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 來自 庫下載 以未結(jié)合的 Ag*為 F， Ag*Ab復(fù)合物為 B，則 B/F與 Ag的量變存在著函數(shù)關(guān)系。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 來自 庫下載 抗血清鑒定 多克隆抗體的抗血清是放射免疫分析的主要試劑之一，其質(zhì)量直接影響方法的特異性和靈敏度。 ?免疫活性 標(biāo)記過程中，被標(biāo)記物活性損傷程度。標(biāo)記免疫技術(shù) 醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)系臨床微生物學(xué)及免疫學(xué)教研室 二 OO四年三月 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 來自 庫下載 標(biāo)記 免疫技術(shù) = 抗原抗體反應(yīng) 示蹤物標(biāo)記 靈敏性 特異性 標(biāo)記免疫技術(shù)的主要特點(diǎn)： 高特異性 、 高靈敏性 免疫技術(shù) +標(biāo)記技術(shù) 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 來自 庫下載 標(biāo)記免疫技術(shù) 免疫測定技術(shù) 免疫組化技術(shù) 示蹤物及 標(biāo)記技術(shù) 放射免疫技術(shù) 熒光免疫技術(shù) 酶免疫技術(shù) 化學(xué)發(fā)光技術(shù) 金免疫技術(shù) ??? 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 來自 庫下載 第八章 放射免疫技術(shù) 類型： ? 放射免疫分析（ radioimmunoassay,RIA） ? 免疫放射分析（ immunoradiometric assay,IRMA） 廣義放射免疫技術(shù)還包括放射受體分析（使用受體測量抗原）和放射配體結(jié)合分析（使用配體研究受體）。一般要求大于 95％。 比放射性 ↑ 方法更靈敏；過高 輻射自損傷大，對標(biāo)記物免疫活性影響大，儲(chǔ)存穩(wěn)定性差 。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 來自 庫下載 放射免疫分析 （ RIA ） 基本原理 采用定量的標(biāo)記抗原（ Ag＋ ）和非標(biāo)記抗原（ Ag）競爭性結(jié)合有限量特異性抗體（ Ab）的反應(yīng)。要求：分離徹底，迅速；分離試劑和過程不影響反應(yīng)平衡；操作簡便，重復(fù)性好且經(jīng)濟(jì)。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 來自 庫下載 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 來自 庫下載 IRMA與 RIA的異同點(diǎn) ? 標(biāo)記物 在 RIA中 核素標(biāo)記抗原，抗原有不同種類，根據(jù)其化學(xué)結(jié)構(gòu)，標(biāo)記時(shí)需用不同的核素和不同的方法。 ? 反應(yīng)速率 反應(yīng)速度與反應(yīng)物的濃度呈正比，在 IRMA中標(biāo)記抗體是過量的，而且不存在競爭性結(jié)合復(fù)雜的反應(yīng)，所以反應(yīng)速度較 RIA快。 ? 特異性 在雙位點(diǎn) IRMA中，一般均應(yīng)用針對不同位點(diǎn)的單克隆抗體，其交叉反應(yīng)率低于應(yīng)用多克隆抗體的RIA。因此， IRMA的批內(nèi)和批間變異均比較小。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 來自 庫下載 放射免疫技術(shù)的應(yīng)用
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