【正文】 病害的種類、分布及重要性，掌握植物檢疫性病原病毒的檢驗方法，掌握番茄環(huán)斑病、馬鈴薯帚頂病的癥狀、病原特性、寄主范圍、病害的發(fā)生發(fā)展規(guī)律以及這兩種病害的檢驗措施。其中預(yù)先分離純化或合成的已知核酸序列片段叫做雜交探針 (probe)，由于大多數(shù)植物病毒的核酸是 RNA，其探針為互補 cDNA也稱為 cDNA探針。一般包括： ?系統(tǒng)侵染的寄主 ?局部侵染的寄主 ?不受侵染的寄主 例 1， TMV和 CMV在田間煙草植株上都呈花葉癥，為了確定是否有 TMV，或是將兩者區(qū)分開，便可通過下列三種植物的接種來確定。 ？ 6．試述細菌病害的檢驗與診斷要點。也有報道用土霉素－鹽酸注射液對病株的樹干進行注射處理，能抑制植原體病的癥狀，處理過的植株又能重新健康生長，每 4個月處理一次能保持植株不表現(xiàn)癥狀。 防治昆蟲介體。 ?檢疫措施 嚴(yán)禁從疫區(qū)進口椰子果和苗木。 ?檢驗與檢測 1． 產(chǎn)地檢疫 根據(jù)植物受侵染后的癥狀，鑒定是否感病。葉蟬介體在美洲的地理分布與病害植原體的分布相吻合。在感病椰子樹韌皮部篩管細胞內(nèi)可見植原體的存在，形狀包括絲狀、念珠狀及近球狀，大小為 4002020 nm。在葉部呈現(xiàn)黃化癥狀時， 根系 出現(xiàn) 壞死，不久腐爛 ，根系受害死亡。開花的花序軸從頂端開始壞死、變黑，佛焰苞未成熟就提前開放，然后 凋萎、落花、落果 。在墨西哥和坦桑尼亞，成千上萬公頃的椰子已被病害侵襲而死亡。感病寄主屬包括： Allagoptera，桄榔屬 Arenga， Arikuryroba，Boraxxus， 魚尾屬 Caryota， 散尾屬 Chrysalidocarpus，椰子屬 Cocos， Corypha， Dictyosperma， Gaussia，Hyophorbe， Latania， 薄葵屬 Livistona， Mascarena，Nannorrhops， 刺葵屬 Phoenix， Pritchardia， 棕櫚屬 Trachycrpus， Veitchia。該病害在加勒比海地區(qū)至少已有 100年的歷史，在西非也有 50年的歷史。新梢期噴布 1－ 2次殺蟲劑。 ? 檢驗與檢測： ：每年 10～ 12月癥狀表現(xiàn)最明顯 ：鑒別寄主法 ： ：黃色熒光 ：染色法 ： ? 檢疫與防治： 實行檢疫 禁止病區(qū)苗木及一切帶病材料進入新區(qū)和無病區(qū)，新開辟的果園要種植無病苗。根據(jù)其對熱的反應(yīng)和傳病木虱的不同，分為兩個株系：在亞洲，其發(fā)病的最適溫度為 27－ 32℃ ，傳播介體為亞洲木虱（ Diaphorina citri）， 病原為柑桔黃龍病原亞洲株系 （ L. asiaticum）； 在非洲，其發(fā)病的最適溫度為20－ 24℃ ,傳播介體為非洲木虱 （ Trioza aryteae） 病原為柑橘黃龍病非洲株系（ L. africanum）。 ? 癥狀： 典型癥狀是在濃綠的樹冠中出現(xiàn) 1－2條或多條的發(fā)黃枝梢，有兩種類型：一種是整張葉片均勻黃化 ，另一種是葉片呈黃綠相間的斑駁狀 。 （ 4）抗菌素溫浸法： ： ： 柑橘黃龍病 Citrus Yellow shoot ? 分布： 1939年在中國廣東發(fā)現(xiàn)該病，現(xiàn)已擴展到亞洲和非洲 37個國家和地區(qū)，中國主要發(fā)生在廣東、廣西、福建、臺灣、海南、云南、貴州、四川、浙江、湖南、江西等省。 ：用?；允删w，如 ZP ZP82等檢驗。此外 有利于發(fā)病的條件包括土壤氮肥水平偏高，鉀肥水平偏低，高溫高濕等。越冬后現(xiàn)在早播玉米苗上取食，引起初侵染，并產(chǎn)卵發(fā)育成新一代成蟲，繼續(xù)向其它植株傳病。 細菌生長溫度最低溫度 8～ 9℃ ，最適溫度30℃ ，最高溫度 39℃ ，致死溫度 53℃ 10min，適宜 ～ ，最適 ～ 。 Pseudobacterium stewartii (Smith) Hrasil’nikov,1949。 Apalnobacter stewartii (Smith) McCulloch。果穗的菌膿可通過內(nèi)層包葉的氣孔滲出，籽粒表面沾滿細菌菌膿，病籽粒變形、皺縮和變色。 ?癥狀 ：整個生育期都可危害，以開花期癥狀最明顯。 玉米細菌性枯萎病 Stewart’s bacterial wilt of corn ?分布 ： 1889年紐約首先報道，現(xiàn)已 20多個國家。 ： 120mg/kg鏈霉素噴霧，或花期用波爾多液噴霧防治，效果很好。 NA上培養(yǎng) 48小時的細菌配成 108 cells /ml的懸液，注入煙草葉片或接種于 1cm厚梨片、或針刺接種于１丈長的巴黎枝條，28℃ 下培養(yǎng)，一般 10~12小時后，煙草注射區(qū)出現(xiàn)白色壞死斑。次氮基三乙酸 ，硫酸十七烷基鈉 ， %溴麝香草酚蘭水溶液 9ml，%中性紅 ，蒸餾水 970ml， 1%放線菌酮 5ml， 1%硝酸銫水溶液 。 ?檢驗方法： ： ：梨火疫病的癥狀很典型，是鑒定的重要方法，但必須與其他癥狀相似的梨梢枯病區(qū)分開。 ② 遠距離傳播：主要是感病寄主繁殖材料，包括種苗、接穗、砧木、水果、被污染的運輸工具、候鳥等。病菌亦通過傷口、自然孔口（氣孔、蜜腺、水孔）、花侵入寄主組織，有一定損傷的花、葉、幼果和茂盛的嫩枝最易感病。除蛋白酶外，病菌不產(chǎn)任何有助于侵入寄主的酶，主要是在環(huán)境條件適宜時，通過胞間組織侵入薄壁組織的病菌產(chǎn)生胞外多糖。氯化鈉濃度高于 2％以上時生長延緩，至 6％－ 7%時則完全抑制。 ?生物學(xué)特性： 兼性厭氧，過氧化物酶陽性，氧化酶陰性，好氣條件下利用葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，厭氧條件產(chǎn)酸緩慢。通常是由感病的接穗在這些砧木上發(fā)病后引起，最終成潰瘍帶而殺死樹體。隨著病菌不斷深入，并侵染主干，皮層收縮，下陷，形成潰瘍斑。初癥是枝尖萎蔫，但萎蔫前不褪色，象拐杖狀。 （ 2）潰瘍枯萎：是指前一季越冬潰瘍邊緣的病菌重新復(fù)活的結(jié)果。 （ 1）花枯萎：侵染開放的花引起花枯萎。 ⑥ 傷口：初期水浸狀，后下陷，呈潰瘍斑，病健交界處產(chǎn)生龜裂紋，韌皮部紅褐色，有黏液狀菌膿。 ② 葉片 :從葉緣沿葉脈擴展，先呈水浸狀，后黑褐色。 梨火疫病的地理分布 ?寄主： 梨火疫病菌寄主范圍很廣，能為害梨、蘋果、山楂、木旬子、李等４０多個屬 220多種植物，大部分屬薔薇科 Pomoideae亞科。 ? 原理： ? 方法：酶聯(lián)免疫吸附實驗（ ELISA）、免疫熒光抗體法 ? 免疫熒光抗體法：將熒光染料（異硫氫酸熒光黃或羅丹明）與抗體以化學(xué)方法接合，再與抗體反應(yīng)，形成有熒光標(biāo)記的抗體 — 抗原復(fù)合物，在熒光顯微鏡下，可觀察到黃綠色熒光。 ? 方法：平皿免疫吸附評價測定法和免疫吸附稀釋培養(yǎng)法 平皿免疫吸附評價測定法簡略流程如下： 常用溶入丙酮的硝酸纖維素或指甲油作包被 洗滌液使用包被緩沖液 ? 原理：噬菌體侵染細菌，裂解寄主細胞，在液體培養(yǎng)時，會使渾濁的細菌懸浮液變清，在固體平板上培養(yǎng)，則出現(xiàn)許多邊緣整齊、透明光亮的噬菌斑。第六章 檢疫性細菌病害 植物檢疫性病原細菌的檢驗方法 梨火疫病 Fire Blight 玉米細菌性枯萎病 Stewart’s bacterial wilt of corn 柑橘黃龍病 Citrus Yellow shoot 椰子致死黃化病 Coconut Lethal Yellowing 復(fù)習(xí)思考題 植物病原細菌檢疫檢驗技術(shù) ? 直接檢測：直觀檢驗和生長檢驗 ? 間接檢測