【正文】 。 C硅膠和氨基型的混合固定相小柱被成功地應(yīng)用于肉中同化激素和異化激素的分離,激素按照極性、非極性和酚類性質(zhì)分段流出,然后再分別純化。ng)C18柱對樣液色譜分離,用自動餾分收集器收集分析物的餾分,餾分收集后吹干,然后衍生化GC分析。 例如,將牛肝提取液注入凝膠柱中,含同化激素的兩段餾分被切入到硅膠柱(富集柱)中,群勃龍和去甲睪酮激素在富集柱中被濃縮純化(ch,醋酸(c249。,第四十一頁，共六十七頁。 對于多殘留分析,可將幾種免疫親和固定相配伍使用。,超臨界流體(li zi)保留,而非極性的內(nèi)源性物質(zhì)不被保留,然后換流動相來洗脫激素,串聯(lián)質(zhì)譜檢測。因此,超臨界流體萃取法并不能取代所有的樣品處理(chǔlǐ)方法。 皮質(zhì)激素類的殘留分析主要采用色譜法,包括薄層色譜法、液相色譜法和氣相色譜法。nɡ)色譜法,薄層色譜法具有設(shè)備簡單、經(jīng)濟等優(yōu)點,適合生物樣品的篩選分析。 樣液滴注于Kieselgel 60板上,以氯仿甲醇作展開劑,展開后組分得到很好地分離,用2,4二羥苯甲醛噴霧顯色,色澤差異明顯,366nm處熒光檢測分析物。 例如,氫化波尼松、氟強的松龍、氟羥強的松龍和倍他米松TMS衍生化,采用N,O雙(三甲基甲硅烷基)乙酰胺、三甲基甲硅烷咪唑和三甲基氯硅烷混合衍生劑進行硅烷化。,例子(l236。,第四十八頁，共六十七頁。 尿樣：取5mL尿樣,加入2mL pH4.8醋酸鹽緩沖液和Helix pomatia混合酶,于37℃孵育過夜(gu242。,第四十九頁，共六十七頁。,第五十頁，共六十七頁。取部分洗脫液,加入氯鉻酸吡啶氧化,氧化的皮質(zhì)激素衍生物進行GCMS分析。,液相色譜法,反相液相色譜（RPHPLC ）和正相液相色譜（ NPHPLC ）均可用于皮質(zhì)激素的分析。ngy242。這種方法包括用9蒽腈進行柱前熒光衍生化,衍生物經(jīng)固相萃取柱凈化,以除去過量的衍生劑及內(nèi)源性的類固醇雜質(zhì),色譜分離后用熒光檢測(jiǎn c232。 SantosMontes采用RPHPLC測定尿中的皮質(zhì)醇和可的松。 崔曉亮等采用超高效液相色譜串聯(lián)電噴霧四極桿質(zhì)譜法同時測走牛奶中12種糖皮質(zhì)激素的殘留。,第五十四頁，共六十七頁。,第五十五頁，共六十七頁。 例如,用于雌激素的多殘留篩選。 此外,科林斯紅和快藍BB與激素反應(yīng)成鹽后,具有很強的色澤。毛細管GC和SIM檢測方式使GCMS發(fā)展成為一種成熟的、集高效分離、高靈敏度檢測和結(jié)構(gòu)鑒定為一體的分析技術(shù)。)離子監(jiān)測技術(shù),第五十七頁，共六十七頁。 由于它們的結(jié)構(gòu)中含羥基和酮基,常用的衍生方法包括硅烷化、?；碗炕?。 suān)甲地孕酮、醋酸(c249。 樣品用葡萄糖苷酸/芳基硫酸酯混合酶水解,經(jīng)液液萃取和固相萃取柱凈化,再通過HPLC純化,分別收集含分析物的五段餾分,衍生后GCMS檢測。 2005年,Seo等報道了GCMS法同時測定肌肉中多種促生長激素(雌二醇及其代謝物、睪酮、孕酮、玉米赤霉醇、已烯雌酚)。nɡ)于激素的分析。,第六十一頁，共六十七頁。 可食動物組織中雌激素的濃度較低,采用電化學檢測可獲得較高的靈敏度。 一般紫外檢測可獲得足夠的靈敏度,但熒光檢測更適合于組織樣品的測定。,第六十三頁，共六十七頁。 甲睪酮的分析常用RPHPLC法,一般情況下,采用紫外檢測能獲得足夠的靈敏度,但肌肉組織中甲睪酮代謝物殘留量通常為181。,第六十四頁，共六十七頁。mǐ)赤霉醇)殘留。,第六十五頁，共六十七頁。,第六十六頁，共六十七頁。近年來人工合成的一些衍生物,其雄激素作用大為減弱,而同化作用則保留或增強,這些衍生物稱同化激素。環(huán)糊精色譜也被用于雌激素的分析,該法能有效地分離結(jié)構(gòu)異構(gòu)的雌激素結(jié)合物,第六十七頁，共六十七頁。激素污染對人類以外的其他動物影響更為顯著,如魚、鳥和哺乳動物的大量死亡(sǐw225。ir243。 秦燕等建立了不同動物肌肉中類固醇同化激素(jī s249。 萬美梅等采用LC電化學檢測法測定動物組織中己烯雌酚殘留量。mǐ)赤霉烯醇、玉米(y249。g/kg。 體液中睪酮含量較高時,可采用紫外檢測。ng)為181。,第六十二頁，共六十七頁。濃度較高的生物樣品,采用紫外檢測能獲得足夠的靈敏度,也可利用天然熒光的特性而采用熒光檢測,后者尤其適合測定較低的殘留量, 但因雌酮無法利用熒光檢測,實際工作中常(zhōngch225。 環(huán)糊精色譜也被用于雌激素的分析,該法能有效地分離結(jié)構(gòu)異構(gòu)的雌激素結(jié)合物。,液相色譜法,HPLC比GC更常用(ch225。,1997年,Hartmann等報道了GCMS法測定牛肉組織中類固醇激素,包括雄烯二酮、雄酮、睪酮 、孕酮、雌酮、雌二醇、脫氫(tuō qīnɡ)表雄酮、二氫睪酮、表睪酮、羥孕酮、孕烯醇酮、雌三醇、甲基睪酮和甲羥孕酮。 suān)甲羥孕酮、氯睪酮、醋酸(c249。,例子(l236。ngn233。n)采用的方法。,氣相色譜法,在20世紀70年代GCMS已被用于同化激素的分析。),一些與雌酮、雌二醇、己烯雌酚、玉米赤霉醇和玉米赤霉烯醇發(fā)生顯色反應(yīng)的染料被相繼報道。o c233。nghu224。 Sangiorgi等采用大氣壓化學電離LCMS/MS測定牛尿中7種糖皮質(zhì)激素。,第五十三頁，共六十七頁。 Prasad等采用NPHPLC法同時測定血漿中氫化可的松、可的松、地塞米松、強的松、氫化波尼松和甲基強的松龍殘留,最低檢測限為10181。,第五十二頁，共六十七頁。 但對于動物源食品中殘留的某些皮質(zhì)激素及其代謝物,則必須制備成衍生物后,進行熒光檢測。g/L。)用5mL水、5mL丙酮水(20+80)、5mL甲醇水(20 +80)和5mL正已烷淋洗,用1mL乙酸乙酯洗脫。qǔ)樣品的凈化,牛奶、尿和糞便樣液過C18固相萃取柱后,依次用5mL水、5mL丙酮水(20+80)、5mL甲醇水(20+80)、5mL二氯甲烷正己烷(20+80)和5mL乙酸乙酯正己烷(10+90)淋洗,用3mL乙酸乙酯洗脫皮質(zhì)激素,洗脫液蒸發(fā)至干后,用0.5mL乙醇和5ml磷酸緩沖鹽溶液溶解(r243。),水解結(jié)束后,加入5mL磷酸緩沖鹽,過C18固相萃取柱。 t243。t等報道了一種GCMS法分析(fēnxī)肝臟、牛奶、尿樣和糞樣中的5種皮質(zhì)激素(氫化波尼松、甲基強的松龍、地塞米松,雙氟美松和異氟烷)。測定地塞米松時,用TMSenolTMS衍生化較好。,氣相色譜法,GC法分析動物源性食品中皮質(zhì)激素,早期采用TMS衍生化,OV17 275cm柱分離,電子(di224。 Vanoosth181。,薄層(b225。,第四十四頁，共六十七頁。,用超臨界CO2提取牛組織中7種促生長激素,發(fā)現(xiàn)極性藥