基因工程的基本程序丁(文件)
【正文】 用 Ca2+處理細胞 感受態(tài)細胞 表達載體與感受態(tài)細胞混合 感受態(tài)細胞吸收 DNA分子 思考與探究： 利用大腸桿菌可以生產(chǎn)出人的胰島素，聯(lián)系前面有關(guān)細胞器功能的知識，結(jié)合基因工程操作程序的基本思路，思考一下，若要生產(chǎn)人的糖蛋白，可以用大腸桿菌嗎？ 有些蛋白質(zhì)肽鏈上有共價結(jié)合的糖鏈，這些糖鏈?zhǔn)窃趦?nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體上加工完成的，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體存在于真核細胞中，大腸桿菌不存在這兩種細胞器，因此，在大腸桿菌中生產(chǎn)這種糖蛋白是不可能的。如蟲吃后中毒死亡，則說明攝入了抗蟲基因并得到表達。 2）將 cDNA、在大腸桿菌中可以適用的啟動子、終止子、抗四環(huán)素的基因、質(zhì)粒等，構(gòu)建成一個表達載體。 歸納 : 基因工程的基本操作程序 1. 獲取目的基因 ? 從基因文庫 ? 利用 PCR ? 化學(xué)方法人工合成 2. 構(gòu)建基因表達載體 ? 目的基因、啟動子、終止子、標(biāo)記基因 3. 將目的基因?qū)胧荏w細胞 ? 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、顯微注射法 4. 目的基因的檢測與鑒定 ? 檢測：是否插入、轉(zhuǎn)錄、翻譯 ? 鑒定： 。如果表達載體未進入大腸桿菌中，大腸桿菌會因不含有抗四環(huán)素基因而死掉；如果培養(yǎng)基上長出大腸桿菌菌落，則表明 β珠蛋白基因已進入其中。當(dāng)它的成分異常時，動物有可能患某種疾病，如鐮刀形細胞貧血癥。 青霉素培養(yǎng)基 青霉素抗性基因 思考： 受體細胞攝入 DNA分子后就說明目的基因完成了表達嗎？ 目的基因是否穩(wěn)定的存在于轉(zhuǎn)基因生物并按人們的預(yù)期進行表達，需要在那些水平上進行檢測？ 四：目的基因的檢測與表達 分子水平 檢測 ① 檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的 DNA 上是否插入了目的基因 ② 檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了 mRNA ③ 檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì) 方法 —— 方法 —— 方法 —— DNA分子雜交技術(shù) 分子雜交技術(shù) 抗原 抗體雜交技術(shù) 提取受體生物 DNA，并解旋成單鏈； 用標(biāo)記了放射性同位素的目的 DNA片段單鏈作為探針； 檢測兩者是否進行雜交； A A 32P T T C G
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